專利名稱：含水蛭素的抗凝載玻片在制備檢測骨髓液涂片中的應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫療器械技術領域，特別是涉及含水蛭素的抗凝載玻片在制備待測體液涂片檢測中的應用，更加優選的是含水蛭素的抗凝載玻片在制備檢測骨髓液涂片中的用。
背景技術：
近年來，隨著醫學科學的迅速發展，疾病的診斷越來越多的是依靠細胞形態的觀察分析，例如骨髓液、關節炎液、胸腹水、腦脊髓液、血液的診斷，特別是骨髓液細胞形態的觀察，它是疾病診斷的重要手段。骨髓是機體重要造血器官，各種血液病常導致血細胞發生質與量的改變，對于白血病特別是非白血性白血病、再生障礙性貧血、巨幼細胞性貧血、多發性骨髓瘤及特發性 血小板性紫癜等的診斷有決定性意義。血液病治療過程中，也常通過骨髓檢查來評價療效或判斷預后。再例如助診斷某些代謝障礙性疾病如高雪(Gaucher)氏病、尼曼-皮克(Niemann-pick)氏病是由于脂類代謝酶的遺傳性缺陷，導致脂類在單核_巨噬細胞系統細胞內沉積的疾病，在骨髓涂片中找到其特殊細胞即可確定診斷。另外診斷原發性及繼發性轉移瘤除骨髓原發性腫瘤外，某些癌特別是肺癌、骨癌、前列腺癌等常可轉移到骨髓，故能在骨髓涂片中查到癌細胞。診斷某些原蟲性傳染病骨髓富有單核-巨噬細胞系統，故能較多的捕捉病原體，查到黑熱病原蟲主要靠骨髓涂片。骨髓涂片的制備是一項重要工作，絕對不可忽視，骨髓深片與血片基本相同，但因有骨髓小粒和脂肪滴，有核細胞較多，骨髓液離體后常因溫度的改變，細胞外基質，高蛋白質和膠原的促凝，還要根據不同檢測項目增加涂片數量，一般至少要6-10張，時間略長，即形成纖維狀凝塊，致使涂片過薄或過厚，細胞分布不均勻，重疊，凝聚影響染色觀察分析。傳統骨髓涂片一般是采用不同的抗凝劑，如枸櫞酸鈉，EDTA等，均為化學抗凝劑，但它們易與細胞蛋白質結合，使之變化，干擾細胞蛋白質對染色液選擇性吸附作用。抗凝劑極易形成結晶體影響檢測。有時臨床醫生遇到患者特殊體質或某種病癥等因素體液標本易凝固，為防止標本凝固，在沒用統一認可的對策下，常采用加入肝素的方法作為抗凝劑使體液保持液態，但肝素易使細胞滲透壓改變，致使細胞膨脹破裂，肝素液能改變細胞，尤其是紅細胞ZETA電位，使紅細胞聚集成團狀，染色時又因肝素與染色液結合產生因光異色現象，可使細胞染色性發生變化，使染色背景呈淡藍色。這些抗凝劑均影響細胞形態的觀察分析。不合格的骨髓涂片，檢驗室無法出具準確的報告，這也是臨床醫生無法向患者交待的難題。有些特殊的骨髓檢測還需抗凝的骨髓液O. 3-0. 5毫升，有的甚至需1-2毫升，給患者帶來了很大的痛苦。因此干擾性的抗凝劑不能做到骨髓液分析的基本質量保證。
發明內容
本發明人通過大量的臨床試驗研究，成功的制備出了一種含水蛭素的抗凝載玻片，然后將待測骨髓液滴到含水蛭素的抗凝載玻片制成待測骨髓液涂片。本發明的骨髓液涂片檢測觀察骨髓液分布均勻，細胞形態結構完整，清晰便于觀察、所致涂片無堆積現象，適合于各種染色更易于形態學觀察(原有形態)各種血細胞玻片推片染色看片用，不影響血液細胞形態、血細胞染色，不影響背景染色效果。本發明的方法，在臨床上解決了重大課題，減少了患者的痛苦，給患者帶來福音，它的發明填補了醫學領域的空白，促進了臨床檢驗學的發展。為實現上述目的，本發明公開了如下的技術內容
含水蛭素載玻片在制備用于檢測骨髓液涂片方面的應用，其中所述載玻片它是由帶有凹面的載玻片與噴涂在凹面中的水蛭素組成；所述載玻片凹面深度為O. 01-0. 30mm ;所述水蛭素用量為純度93-98%水蛭素濃縮液O. Olmg-IOmg ;待測骨髓液厚度為O. 02-0. 05mm。其中純度93-98%水蛭素濃縮液O. Olmg-IOm的用量優選為O. 01mg-6mg ；O. 01mg-4mg ；0. 01mg_2mg ；0. Olmg-Img ；更加優選水蛭素的用量為 0. Olmg-O. 5mg ；O. Olmg-O. 3mg0技術指標為Img > 10000IU。此濃縮液生產完成即為液態,且無重金屬,無菌，無雜質等特點。呈無色透明狀。本發明進一步公開了采用含水蛭素載玻片檢測待測骨髓液涂片檢的方法，按如下的步驟進行
(1)將骨髓液滴在含水蛭素的抗凝載玻片，用推片混合均勻；
(2)然后吸出溶液滴在除油玻片上，用磨邊片平穩地向前推進至除油玻片的另一端，玻片上便留下含水蛭素的待測骨髓液一薄層，厚度為O. 02-0. 05mm ；
(3)圖片制成后，在空氣中揮動，使其迅速干燥，顯微鏡下觀察細胞形態。本發明同時也公開了含水蛭素的抗凝載玻片的制備方法它是按如下的步驟進行
(1)在十萬級凈化車間中，將邊緣平齊、磨角無任何毛刺、薄厚均勻的凹面深度為O. 01-0. 30mm的載玻片進行除塵、除菌、除油處理；
(2)將純度93-98%水蛭素濃縮液O.Olmg-IOmg噴涂在帶凹面的載玻片上，制成含
O.Olmg-IOmg的水蛭素抗凝載玻片；
(3)將載玻片保存在2-8°C冰箱內，用前恢復常溫后使用。也就是說從冰箱中取出載玻片后，使用時應避免水霧出現。本發明提到的經過除塵、除菌、除油處理的載玻片的處理方法如下
I、浸泡與凈化劑溶液中備一缸水內有PH中性，無泡洗滌粉或液體去污劑。用量約5升水加入10 —15克。水溫35-45°C，不得超過60°C將玻片一個一個地放入缸中，可浸泡過液，不可用刷子刷洗。2、在水中沖洗用自來水沖洗每一塊玻片，輕輕甩干然后浸于凈化的水中達15分鐘。3、擦洗與干燥用無絨毛的軟巾擦凈玻片，每次一塊，將其分別置于一張濾紙上使其干燥，不得成堆，成疊，防止有水紋，劃痕，發黃或有模糊斑跡的片子。本發明提到的載玻片、除油玻片的消毒方法如下
I、紫外線消毒波長為2000— 3000A。(2650— 2660A。者殺菌最強)。240— 280豪微米其中260的作用最強。2、凹形玻片(凹在一側)處理相同(或干燥法)。
本發明公開的水蛭素在制備用于檢測待測骨髓液涂片方面的應用，除了可以檢測骨髓液外，還可以采用此方法對關節炎液、胸腹水、腦脊髓液或血液進行檢測，同樣可以達到顯微鏡下觀察細胞形態，多細胞染色無干擾的目的。本發明公開的是將待測骨髓液滴在含有水蛭素的抗凝載玻片，在臨床試驗中根據具體的情況也可以將水蛭素噴涂在表面器皿上或能用于鏡下的物體上，也可以制成含有水蛭素的抗凝材料，然后再將待測體液鋪在含有水蛭素的抗凝材料上，其厚度為O. 02-0. 05mm。優選制成的厚度為O. 02-0. 03mm。這樣也可以達到測定的效果。關節液、胸腹水、腦脊髓液或血液也可以按照上述方法，取待測液體涂于抗凝載玻片上，利用水蛭素抗凝且不破壞細胞形態學和對血液無任何干擾的原理，觀察細胞形態學。這使得臨床檢測人員可以更加靈活的調配相關體液的檢測。能夠更詳細、多方位的探查患 者的病情，更利于受條件影響無法抽取骨髓，但可以在腦脊髓液、血液、胸腹水、關節液等相對條件允許的部位抽取，用以判斷病情的做法。而抽取這些相關體液的條件通常是在臨時、緊急、大面積、危重病人等情況下尤為突出。同時一些偏遠醫院受醫療條件和人員素質的影響也無法抽取骨髓液。綜上，利用現有條件抽取體液初步判斷病情和搶救患者，只能是最可行方法。偏遠醫院或相對條件簡陋的醫院可以通過初步抽取腦脊髓液、血液、胸腹水、關節液等體液判斷病情，做出是否轉院，病情情況，患者的身體情況等綜合評價，為及時治療、搶救生命提供了更大的選擇。采用含水蛭素的抗凝載玻片制備骨髓液載涂片是一項重要的工作，絕對不可忽視。有時待測體液取材良好，但由于玻片的不清潔或推片技術不佳，而不能得到滿意的涂片。如制備的骨髓液涂片太厚細胞重疊則無法辨認細胞的結構；涂片太薄，細胞過于分散，則影響檢查速度和準確性，甚至漏診或誤診。因此必須制備薄厚適宜、分布均勻的涂片是非
常重要的。下面是本發明采用的使用抗凝劑與未使用抗凝劑制備的骨髓液涂片的情況比較
表I抗凝劑使用情況與涂片結果比較
權利要求
1.含水蛭素載玻片在制備用于檢測骨髓液涂片方面的應用，所述載玻片它是由帶凹面的載玻片與噴涂在凹面中的水蛭素組成；其中所述載玻片凹面深度為0.01-0. 30mm;所述水蛭素用量為純度93-98%水蛭素濃縮液0. Olmg-IOmg ;待測骨髓液厚度為0. 02-0. 05mm。
2.權利要求I所述的應用，其中待測骨髓液涂片檢測的方法，按如下的步驟進行 (1)將骨髓液滴在含水蛭素的載玻片上，混合均勻； (2)然后吸出溶液滴在除油玻片上，用磨邊片平穩地向前推進至除油玻片的另一端，玻片上便留下含水蛭素的待測骨髓液一薄層，厚度為0. 02-0. 05mm ； (3)圖片制成后，在空氣中揮動，使其迅速干燥，顯微鏡下觀察細胞形態。
全文摘要
本發明公開了含有水蛭素的抗凝載玻片在制備用于檢測骨髓液涂片方面的應用，所述抗凝載玻片它是由帶有凹面的載玻片與噴涂在凹面中的水蛭素組成；其中所述凹面深度為0.01-0.30mm；所述水蛭素用量為含0.01mg-10mg,每1mg≥10000IU，純度為93-98%。實驗證明采用含水蛭素的抗凝載玻片檢測骨髓液涂片,骨髓液在顯微鏡下觀察細胞形態分布均勻，細胞形態結構完整，清晰便于觀察、所致涂片無堆積現象，不影響背景染色效果。給臨床上解決了重大課題，為減少患者痛苦帶來了福音，促進了臨床檢驗學的發展。
文檔編號G01N21/85GK102768136SQ20121027830
公開日2012年11月7日 申請日期2012年8月7日 優先權日2012年8月7日
發明者劉晨, 劉金雪, 朱文娟 申請人:天津市百利康泰生物技術有限公司