專利名稱：用液相色譜法分離測定萘普西諾及其光學異構體的方法
技術領域：
本發明屬分析化學領域，具體涉及用液相色譜法分離測定萘普西諾及其光學異構體的方法。
背景技術：
萘普西諾是一種治療骨關節炎的藥物，由法國NicOx公司研發，分子式為C18H21N06，其化學名為(S)-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸4-硝基氧丁基酯。對于萘普西諾的光學異構體為雜質，在生產萘普西諾進程中需要進行質量控制。因此，實現對萘普西諾與其光學異構體的分離測定，在萘普西諾的質量控制方面具有現實意義。其化學結構式如下·H3CO經反復試驗發現，用CHIRALPAK OD-H手性色譜柱(250X4. 6mm)為分離柱，以正己烷異丙醇(含0.3%乙酸)=97 3為流動相，可以將萘普西諾與其光學異構體進行有效分離，從而可以準確控制萘普西諾的質量。本發明的方法能簡單、快速、準確地分離、檢測出萘普西諾及其光學異構體雜質。
發明內容
本發明的目的在于提供一種用手性色譜柱分離測定萘普西諾及其光學異構體雜質的高效液相方法，從而保證萘普西諾的光學純度的準確測定，實現對萘普西諾原料藥的質量控制。本方法所述的用高效液相色譜法分離測定萘普西諾及其光學異構體(雜質)的方法，是采用纖維素-三[3，5_ 二甲苯基氨基甲酸酯]為填料的手性色譜柱，以正己烷-低級醇溶液為流動相，其中低級醇溶液中包含有機酸。這里所說的液相色譜法包括高效液相色譜法或高效液相色譜法-質譜法聯用。上述所說的手性色譜柱選自牌號為CHIRALCEL OD和CHIRALCEL OD-H色譜柱。本發明的低級醇選自以下化合物甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇，優選為乙醇或異丙醇。本發明的方法，其流動相正己烷-低級醇溶液的體積比為99 : I 70 : 30。上述所說的低級醇溶液中包含的有機酸選自甲酸、乙酸和三氟乙酸，有機酸的濃度(v/v)為 O. I O. 5%。本發明所述的分析分離方法，可按照以下方法實現I)取萘普西諾樣品適量，用乙醇或流動相溶解樣品，配制成每ImL含萘普西諾
O.2 2. Omg的樣品溶液。
2)設置流動相流速為O. 4 I. 5mL/min,流動相的流速優選為O. 8 I. OmL/min,檢測波長為220 240nm，最佳檢測波長為230nm，色譜柱柱箱溫度為20 40°C，柱箱溫度最佳為20°C。3)取I)的樣品溶液10 50 μ L注入液相色譜儀，完成萘普西諾與其光學異構體的分離測定。其中高效液相色譜儀的型號，無特別要求，本發明采用的色譜儀為島津島津LC-1OATvp, SPD-MlOAνρ色譜柱OD-H手性色譜柱(CHIRALCEL250 X 4. 6mm)流動相正己烷-異丙醇(含O. 3%乙酸)=97 : 3
流速0·8 I. OmL/min檢測波長230nm柱溫20°C進樣體積20 μ L本發明采用CHIRALCEL OD-H手性色譜柱，能夠有效的分離測定萘普西諾及其光學異構體。本發明解決了分離測定萘普西諾及其光學異構體的分離問題，從而確保了萘普西諾原料藥的質量可控。
圖I :實施例I空白溶劑的高效液相色譜圖。圖2 :實施例I萘普西諾消旋體的高效液相色譜圖。圖3 :實施例2萘普西諾的高效液相色譜圖。圖4 :實施例3空白溶劑的高效液相色譜圖。圖5 :實施例3萘普西諾消旋體的高效液相色譜圖。圖6 :實施例4萘普西諾的高效液相色譜圖。
具體實施例方式以下實施例用于進一步理解本發明，但不限于本實施的范圍。實施例I儀器與條件高效液相色譜儀島津LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色譜柱0D-H(CHIRALCEL250X4.6mm)；流動相正己烷-異丙醇(含O. 3%乙酸)=97 3 ；流速1.OmL/min ；檢測波長230nm；柱溫20°C;進樣體積20 μ L實驗步驟取萘普西諾消旋體適量，用乙醇溶解樣品，配制成含萘普西諾及其光學異構體約
I.Omg/mL的樣品溶液，作為供試品溶液。
分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結果見圖I、圖2。圖2中I號峰為萘普西諾，2號峰為其光學異構體，可以看出在該條件下萘普西諾與其光學異構體可以完全分離，萘普西諾出峰時間20. 087min，其光學異構體的出峰時間為16. 713min,且峰形對稱,可以滿足中國藥典的要求。實施例2實驗步驟取萘普西諾適量，分別用乙醇溶解樣品，配制成含萘普西諾約I. Omg/mL的樣品溶 液，作為供試品溶液。取供試品溶液，照實施例I的儀器與條件，進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結果見圖3。萘普西諾出峰時間為20. 163min。圖3證明，萘普西諾的光學純度達到原料藥的要求，本法可用于萘普西諾的質量監測。實施例3儀器與條件高效液相色譜儀島津LC_10ATvp,SPD-MIOAvp ；色譜柱OD-H(CHIRALCEL250 X 4. 6mm);流動相正己烷-乙醇(含O. 3%乙酸)=99 I ；流速0.8mL/min ；檢測波長230nm；柱溫20°C；進樣體積20 μ L實驗步驟取萘普西諾消旋體適量，用乙醇溶解樣品，配制成含萘普西諾及其光學異構體約
I.Omg/mL的樣品溶液，作為供試品溶液。分別取試劑空白溶液和供試品溶液，按上述條件進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖，結果見圖4、圖5。圖5中I號峰為萘普西諾，2號峰為其光學異構體，可以看出在該條件下萘普西諾與其光學異構體可以完全分離，萘普西諾出峰時間18. 574min，其光學異構體的出峰時間為15. 216min,且峰形對稱,可以滿足中國藥典的要求。實施例4實驗步驟取萘普西諾適量，分別用乙醇溶解樣品，配制成含萘普西諾約I. Omg/mL的樣品溶液，作為供試品溶液。取供試品溶液，照實施例3的儀器與條件，進行高效液相色譜分析，記錄色譜圖。結果見圖6。萘普西諾出峰時間為18. 652min。圖6證明，萘普西諾的光學純度達到原料藥的要求，本法可用于萘普西諾的質量監測。
權利要求
1.一種用液相色譜法分離測定萘普西諾和其光學異構體的方法，其特征在干以纖維素-三[3，5_ ニ甲苯基氨基甲酸酷]為填料的手性色譜柱，以正己烷-低級醇溶液為流動相，其中低級醇溶液中包含選自甲酸、こ酸和三氟こ酸中的一種有機酸，其濃度(V/V)為O.I 0.5%，正己烷-低級醇的體積比為99 : I 70 : 30。
2.根據權利I所述的分析測定方法，手性色譜柱選自品牌為CHIRALCELOD和CHIRALCEL 0D-H 色譜柱。
3.根據權利I所述的分析測定方法，所說的低級醇選自以下化合物中的ー種甲醇、こ醇、丙醇、異丙醇。
4.根據權利3所述的分析測定方法，所說的低級醇選自以下化合物中的ー種こ醇或異丙醇。
5.根據權利I所述的分析測定方法，正己烷-低級醇的體積比為97 3。
6.根據權利I所述的分析測定方法，其特征在于所說的方法包括以下步驟 1)取萘普西諾樣品適量，用こ醇或流動相溶解樣品，配制成每ImL含萘普西諾O.2 2mg的樣品溶液； 2)設置流動相流速為O.4 I. 5mL/min，檢測波長為220 240nm，色譜柱柱箱溫度為20 40°C ； 3)取I)的樣品溶液10 50μ L注入液相色譜儀，完成萘普西諾與其光學異構體的分離測定。
7.根據權利要求6所述的分析分離方法，步驟2)流動相流速優選為O.8 I. OmL/min。
8.根據權利要求6所述的分析分離方法，步驟2)所說的色譜柱柱箱溫度為20°C。
9.根據權利要求6所述的分析分離方法，步驟2)所說的檢測波長為230nm。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，涉及萘普西諾及其光學異構體(雜質)的分離測定。本發明用高效液相色譜法或高效液相色譜-質譜聯用法，在一定的色譜條件下分離測定萘普西諾的光學異構體，通過該方法能快速準確地分離和測定萘普西諾的光學異構體雜質。
文檔編號G01N30/02GK102854260SQ20121027041
公開日2013年1月2日 申請日期2012年8月1日 優先權日2012年8月1日
發明者陳東, 方麗, 郭夏, 宋雪梅 申請人:北京萬全陽光醫學技術有限公司