專利名稱：一種檢測烘烤制品中兒茶素含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測烘烤制品中兒茶素含量的方法，尤指一種檢測含有茶或茶提取物的烘烤食品中的兒茶素含量的方法，屬于食品分析領域。
背景技術：
現代研究表明茶葉抗菌、降脂、防癌等保健功能是多種成分綜合作用的結果，其中起主要作用的有兩大類物質，一類是多酚類化合物(簡稱茶多酚)，另一類是脂多糖類化合物(簡稱茶多糖)。兒茶素作為茶多酚主要成分，不僅是賦予茶葉感官品質的主要品質成分，同時也是最主要的茶葉藥效成分。s. Valcic等比較了 6種兒茶素單體(沒食子酸，兒茶素，表兒茶素，表沒食子兒茶素，表兒茶素沒食子酸酯，表沒食子兒茶素沒食子酸酯)對多種癌細胞 (乳腺癌細胞MCF-7、克隆癌細胞HT-29、肺癌細胞A-427和黑色素瘤細胞UACC-375)生長的影響，發現EGCG、GC、EGC對四種癌細胞生長均有顯著的抑制作用，EGCG對乳腺癌細胞MCF-7、克隆癌細胞HT-29和黑色素瘤細胞UACC-375的抑制作用均高于其他幾種兒茶素單體。Levites Y等人對帕金森小鼠模型的研究中發現茶多酚可升高紋狀體中超氧化物酶(SOD)水平，降低過氧化氫酶活性，從而抑制多巴胺黑質損傷，抑制紋狀體多巴胺衰竭，提高谷氨酸氫化酶水平。朱善瑾研究發現，茶多酚對福氏痢疾桿菌、宋氏痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、副傷寒及大腸桿菌的抑菌圈大于16mm的質量分數分別為11315%,黃洋等考察單體兒茶素對大腸桿菌抑菌效果的影響，其抑菌圈大小為EGCG > ECG > EGC >EC0由于茶具有較好的保健功效，茶多酚是天然的抗氧化劑，將茶或茶提取物加入到面包中，不僅可以延長保質期，讓人們在享用美食的同時也能起到保健功效。但對烘烤產品進行有效成分含量檢測時，而由于其提取液中含有油脂、糖類、可溶性蛋白等物質，給檢測帶來困擾。目前測定茶葉和速溶茶粉中的兒茶素采用GB8313-2008方法，但該方法在檢測烘烤食品如茶面包中的兒茶素含量時，只能測定出兩種兒茶素單體和咖啡堿，影響了檢測結果的準確性。
發明內容
本發明的目的是提供一種準確測定含有茶或茶提取物的烘烤制品(如面包)中兒茶素含量的方法。為實現上述目的，本發明采用以下技術方案一種檢測烘烤制品中兒茶素含量的方法，包括如下步驟(I)制備供試品溶液；(2)制備對照品溶液；(3)制作標準曲線；
(4)測定供試品溶液；(5)根據標準曲線和供試品溶液的峰面積計算供試品中總兒茶素的含量。所述步驟(I)制備供試品溶液是指準確稱取5_15g(優選IOg)粉碎的烘烤食品樣品于50-200ml (優選100ml)提取液中，在60-80°C (優選70°C )水浴鍋中振蕩水浴20-40min (優選30min),冷卻至室溫后,搖勻，倒入離心管中，在室溫3000-4000r/min (優選3500r/min)離心5_15min (優選IOmin);收集上清液,并用O. 45 μ m濾膜過濾,所得濾液作為供試品溶液；其中提取液由體積百分比含量為60% -80%的甲醇、20% -40 %的水和O. 1% -O. 5%的甲酸組成(優選由70%的甲醇、29. 7%的水和O. 3%的甲酸組成)。所述步驟⑵制備對照品溶液是指分別稱取沒食子酸3_8mg(優選5. OOmg)，兒茶素3-8mg(優選5. OOmg),表兒茶素3_8mg(優選5. OOmg),表沒食子兒茶素3_8mg(優選5. OOmg)，表兒茶素沒食子酸酯3-8mg (優選5. OOmg)，表沒食子兒茶素沒食子酸酯3_8mg (優·選5. OOmg)溶于5-20ml (優選IOml)提取液中，其中提取液由體積百分比含量為60%-80%的甲醇、20% -40%的水和O. 1% -O. 5%的甲酸組成(優選由70%的甲醇、29. 7%的水和
O.3%的甲酸組成)。所述步驟(3)制作標準曲線是指取對照品溶液，注入HPLC色譜儀，按色譜條件測定峰面積，并以峰面積I對不同對照品濃度X，mg/ml進行線性回歸。回歸方程為Y = a · X+b ;式中Y為對照品溶液的峰面積；X為對照品溶液的濃度(mg/ml)；a，b 為常數。所述步驟(4)測定供試品溶液是指精密吸取10-30 μ I (優選20 μ I)試品溶液，注入HPLC色譜儀，按照色譜條件，在250-300nm(優選270nm)下測定測定峰面積。所述步驟(3)和步驟(4)中的色譜條件為采用Angile 1200 色譜儀，用 Agilent SB-C18 (4. 6 X 250mm，5 μ m)作為固定相，流動相洗脫液A 0. 1-0. 3% (優選O. 2% )乙酸乙腈溶液洗脫液B 0. 1-0. 3% (優選O. 2% )乙酸水溶液測定波長250-300nm(優選270nm)柱溫30-40°C(優選 35°C )梯度洗脫條件洗脫液A和洗脫液B的體積百分比如下O-Smin洗脫液A的體積百分比為2 % _5 %中的任一值，洗脫液B的體積百分比為98% -95%中的任一值 8-14min洗脫液A的體積百分比從2 % _5 %中的任一值勻速升至8 %，洗脫液B的體積百分比從98% -95%中的任一值勻速降至92%14-25min洗脫液A的體積百分比從8%勻速升至10%，洗脫液B的體積百分比從92%勻速降至90%25-30min洗脫液A的體積百分比從10 %勻速升至15 %，洗脫液B的體積百分比從90%勻速降至85%30-35min洗脫液A的體積百分比從15 %勻速升至20 %，洗脫液B的體積百分比從85%勻速降至80%35-40min洗脫液A的體積百分比從20 %勻速升至30 %，洗脫液B的體積百分比從80%勻速降至70%40-45min洗脫液A的體積百分比為30 %，洗脫液B的體積百分比為70 %45-50min洗脫液A的體積百分比從30%勻速降至2% _5%中的任一值，洗脫液B的體積百分比從70% -勻速升至95% -98%中的任一值50-55min洗脫液A的體積百分比為2 % _5 %中的任一值，洗脫液B的體積百分比為98% -95%中的任一值。優選的梯度洗脫條件洗脫液A和洗脫液B的體積百分比如下O-Smin洗脫液A的體積百分比為2 %，洗脫液B的體積百分比為98 %8-14min洗脫液A的體積百分比從2 %勻速升至8 %,洗脫液B的體積百分比從98%勻速降至92%14-25min洗脫液A的體積百分比從8%勻速升至10%，洗脫液B的體積百分比從92%勻速降至90%25-30min洗脫液A的體積百分比從10 %勻速升至15 %，洗脫液B的體積百分比從90%勻速降至85%30-35min洗脫液A的體積百分比從15 %勻速升至20 %，洗脫液B的體積百分比從85%勻速降至80%35-40min洗脫液A的體積百分比從20 %勻速升至30 %，洗脫液B的體積百分比從80%勻速降至70%40-45min洗脫液A的體積百分比為30 %，洗脫液B的體積百分比為70 %45-50min洗脫液A的體積百分比從30 %勻速降至2 %，洗脫液B的體積百分比從70% -勻速升至98%50-55min洗脫液A的體積百分比為2 %，洗脫液B的體積百分比為98 %。更優選的梯度洗脫條件洗脫液A和洗脫液B的體積百分比如下0-8min洗脫液A的體積百分比為3 %，洗脫液B的體積百分比為97 %8-14min洗脫液A的體積百分比從3%勻速升至8%,洗脫液B的體積百分比從97%勻速降至92%14-25min洗脫液A的體積百分比從8%勻速升至10%，洗脫液B的體積百分比從92%勻速降至90%25-30min洗脫液A的體積百分比從10 %勻速升至15 %，洗脫液B的體積百分比從90%勻速降至85%30-35min洗脫液A的體積百分比從15 %勻速升至20 %，洗脫液B的體積百分比從85%勻速降至80%35-40min洗脫液A的體積百分比從20 %勻速升至30 %，洗脫液B的體積百分比從80%勻速降至70%40-45min洗脫液A的體積百分比為30 %，洗脫液B的體積百分比為70 %45-50min洗脫液A的體積百分比從30%勻速降至3%，洗脫液B的體積百分比為從70勻速升至97%
50-55min洗脫液A的體積百分比為3 %，洗脫液B的體積百分比為97 %。其中，7. 6-7. 9min峰代表沒食子酸，23. 2-23. 9min峰代表兒茶素，26. 1-26. 7min峰代表表兒茶素，33. 2-33. 6min峰代表表沒食子兒茶素，34. 1-34. 5min峰代表表兒茶素沒食子酸酯，39. 7-40. Omin峰代表表沒食子兒茶素沒食子酸酯。所述烘烤食品是指含有茶或茶提取物的烘烤食品，包括但不限于面包、餅干、糕點和方便食品。所述茶選自綠茶、紅茶、烏龍茶、白茶、黃茶和黑茶中的一種或幾種。所述茶提取物選自綠茶提取物、紅茶提取物、烏龍茶提取物、白茶提取物、黃茶提取物和黑茶提取物中的一種或幾種。
所述黑茶為普洱茶。所述黑茶提取物為普洱茶提取物。通過下述方法學對本發明進行驗證一.線件范闈考察取GA (O. 509mg/ml)對照品 O. 2,0. 4,0. 6,0. 8、Iml 稀釋至 IOml ;取 EGC (O. 51 Img/ml)對照品 l、2、3、4、5ml 稀釋至 IOml ;取 C (O. 510mg/ml)對照品 l、2、3、4、5ml 稀釋至 IOml ；取 EC (O. 505mg/ml)0. 2、0· 4、0· 6、0· 8、Iml 稀釋至 IOml ;取 EGCG (O. 514mg/ml)對照品 O. 2、
0.4、0· 6、0· 8Uml 稀釋至 IOml ;取 ECG(O. 493mg/ml)對照品 O. 2、0· 4、0· 6、0· 8、lml 稀釋至10ml。按色譜條件測定峰面積，并以峰面積(Y)對不同對照品濃度(X，mg/ml)進行線性回歸，回歸方程為Y = a · X+b式中Y為對照品溶液的峰面積； X為對照品溶液的濃度(mg/ml)。a, b 為常數。結果如圖I-圖6所示，表明本發明在檢測范圍內具有良好的線性范圍。二.精密度試驗取2%茶面包樣(面包原料中添加占面粉質量2%的普洱茶提取物)10g，精確稱定，按照樣品溶液的制備方法提取，重復進樣6次，計算得總兒茶素含量的RSD為I. 005%(η = 6) ο結果見表I。表I精密度試驗
進樣序次123456 RSD%
兒茶素含量(％) 0.04979 0.04991 0.05105 0.05071 0.05078 0.05062 1.005三.重復件試驗取2%茶面包(面包原料中添加占面粉質量2%的普洱茶提取物)約IOg(共6份)，精密稱量，按照供試液的制備方法提取，HPLC方法測定，計算兒茶素的含量，RSD為
1.51% (η = 6)。結果見表 2。表2重復性試驗
權利要求
1.一種烘烤食品中兒茶素含量的檢測方法，其特征在于包括如下步驟 (1)制備供試品溶液； (2)制備對照品溶液； (3)制作標準曲線； (4)測定供試品溶液； (5)根據標準曲線和供試品溶液的峰面積計算供試品中總兒茶素的含量。
2.根據權利要求I所述的檢測方法，其特征在于所述步驟(I)制備供試品溶液是指準確稱取5-15g粉碎的烘烤食品樣品于50-200ml提取液中，在60_80°C水浴鍋中振蕩水浴20-40min,冷卻至室溫后，搖勻，倒入離心管中，在室溫3000-4000r/min離心5_15min ;收集上清液，并用O. 45 μ m濾膜過濾，所得濾液作為供試品溶液；提取液由體積百分比含量為60% -80%的甲醇、20% -40%的水和O. 1% -O. 5%的甲酸組成； 所述步驟(2)制備對照品溶液是指分別稱取沒食子酸3-8mg，兒茶素3-8mg，表兒茶素3-8mg，表沒食子兒茶素3-8mg，表兒茶素沒食子酸酯3_8mg，表沒食子兒茶素沒食子酸酯3_8mg溶于5-20ml提取液中，提取液由體積百分比含量為60% -80%的甲醇、20% -40%的水和O. I % -O. 5 %的甲酸組成； 所述步驟⑶制作標準曲線是指取沒食子酸0.4-0. 6mg/ml、表沒食子兒茶素O.4-0. 6mg/ml、兒茶素O. 4-0. 6mg/ml、表兒茶素O. 4-0. 6mg/ml、表沒石子兒茶素沒食子酸酯O. 4-0. 6mg/ml、表兒茶素沒食子酸酯O. 4-0. 6mg/ml對照品，按色譜條件測定峰面積，并以峰面積I對不同對照品濃度X，mg/ml進行線性回歸，回歸方程為Y = a · X+b ;式中 Y為對照品溶液的峰面積； X為對照品溶液的濃度mg/ml ； b為常數； 所述步驟(4)測定供試品溶液是指精密吸取10-30 μ I試品溶液，按照色譜條件，在250_300nm下測定峰結果； 所述步驟(3)和步驟(4)中的色譜條件為 流動相洗脫液A :0. 1-0. 3%乙酸乙腈溶液 洗脫液B :0. 1-0. 3%乙酸水溶液 測定波長250-300nm 柱溫30-40°C 梯度洗脫條件洗脫液A和洗脫液B的體積百分比如下 0-8min 洗脫液A的體積百分比為2 % -5 %中的任一值，洗脫液B的體積百分比為98% -95%中的任一值 8-14min 洗脫液A的體積百分比從2 % -5 %中的任一值勻速升至8 %，洗脫液B的體積百分比從98% -95%中的任一值勻速降至92% 14-25min 洗脫液A的體積百分比從8 %勻速升至10 %，洗脫液B的體積百分比從92%勻速降至90% 25-30min 洗脫液A的體積百分比從10%勻速升至15%，洗脫液B的體積百分比從90%勻速降至85% 30-35min 洗脫液A的體積百分比從15%勻速升至20%，洗脫液B的體積百分比從85%勻速降至80% 35-40min 洗脫液A的體積百分比從20%勻速升至30 %，洗脫液B的體積百分比從80%勻速降至70% 40-45min洗脫液A的體積百分比為30 %，洗脫液B的體積百分比為70 % 45-50min洗脫液A的體積百分比從30%勻速降至2% _5%中的任一值，洗脫液B的體積百分比從70 % -勻速升至95 % -98 %中的任一值 50-55min 洗脫液A的體積百分比為2 % -5 %中的任一值，洗脫液B的體積百分比為98% -95%中的任一值。
3.根據權利要求2所述的檢測方法，其特征在于所述步驟(I)制備供試品溶液是指準確稱取IOg粉碎的烘烤食品樣品于IOOml提取液中，在70°C水浴鍋中振蕩水浴30min，冷卻至室溫后，搖勻，倒入離心管中，在室溫3500r/min離心IOmin ;收集上清液,并用O. 45 μ m濾膜過濾，所得濾液作為供試品溶液；提取液由體積百分比含量為70%的甲醇、29. 7%的水和O. 3 %的甲酸組成； 所述步驟(2)制備對照品溶液是指分別稱取沒食子酸5. OOmg，兒茶素5. OOmg，表兒茶素5. OOmg，表沒食子兒茶素5. OOmg，表兒茶素沒食子酸酯5. OOmg，表沒食子兒茶素沒食子酸酯5. OOmg溶于IOml提取液中，提取液由體積百分比含量為70%的甲醇、29. 7%的水和.0.3%的甲酸組成； 所述步驟(3)制作標準曲線是指取沒食子酸0. 500mg/ml、表沒食子兒茶素0. 500mg/ml、兒茶素0. 500mg/ml、表兒茶素0. 500mg/ml、表沒石子兒茶素沒食子酸酯0. 500mg/ml、表兒茶素沒食子酸酯0. 500mg/ml對照品，按色譜條件測定峰面積，并以峰面積y對不同對照品濃度X，mg/ml進行線性回歸，回歸方程為Y = a · X+b ;式中 Y為對照品溶液的峰面積； X為對照品溶液的濃度mg/ml ； b為常數； 所述步驟⑷測定供試品溶液是指精密吸取20μ1試品溶液，按照色譜條件，在270nm下測定峰結果； 所述步驟(3)和步驟(4)中的色譜條件為 流動相洗脫液A :0. 2%乙酸乙腈溶液 洗脫液B :0. 2%乙酸水溶液 測定波長270nm 柱溫35°C 梯度洗脫條件洗脫液A和洗脫液B的體積百分比如下 0-8min洗脫液A的體積百分比為3%，洗脫液B的體積百分比為97% 8-14min洗脫液A的體積百分比從3%勻速升至8%，洗脫液B的體積百分比從97%勻速降至92% 14-25min洗脫液A的體積百分比從8%勻速升至10%，洗脫液B的體積百分比從92%勻速降至90% 25-30min洗脫液A的體積百分比從10 %勻速升至15 %，洗脫液B的體積百分比從90 %勻速降至85%30-35min洗脫液A的體積百分比從15 %勻速升至20 %，洗脫液B的體積百分比從85 %勻速降至80% 35-40min洗脫液A的體積百分比從20 %勻速升至30 %，洗脫液B的體積百分比從80 %勻速降至70% 40-45min洗脫液A的體積百分比為30%，洗脫液B的體積百分比為70% 45-50min洗脫液A的體積百分比從30%勻速降至3%，洗脫液B的體積百分比為從70勻速升至97% 50-55min洗脫液A的體積百分比為3 %，洗脫液B的體積百分比為97 %。
4.根據權利要求1-3中任何一項所述的檢測方法，其特征在于所述烘烤食品是指含有茶或茶提取物的烘烤食品，包括但不限于面包、餅干、糕點和方便食品。
5.根據權利要求1-3中任何一項所述的檢測方法，其特征在于所述茶選自綠茶、紅茶、烏龍茶、白茶、黃茶和黑茶中的一種或幾種。
6.根據權利要求1-3中任何一項所述的檢測方法，其特征在于所述茶提取物選自綠茶提取物、紅茶提取物、烏龍茶提取物、白茶提取物、黃茶提取物和黑茶提取物中的一種或幾種。
7.根據權利要求5中任何一項所述的檢測方法，其特征在于所述黑茶為普洱茶。
8.根據權利要求6中任何一項所述的檢測方法，其特征在于所述黑茶提取物為普洱茶提取物。
9.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于色譜條件為 高效液相色譜儀(Agilent 1200)； 流動相洗脫液A :0. 2%乙酸乙腈溶液 洗脫液B :0. 2%乙酸水溶液 測定波長270nm 柱溫35°C 梯度洗脫條件洗脫液A和洗脫液B的體積百分比如下 ·0-8min洗脫液A的體積百分比為2 %，洗脫液B的體積百分比為98 % ·8-14min洗脫液A的體積百分比從2 %勻速升至8 %，洗脫液B的體積百分比從98 %勻速降至92% ·14-25min洗脫液A的體積百分比從8%勻速升至10%，洗脫液B的體積百分比從92%勻速降至90% ·25-30min洗脫液A的體積百分比從10 %勻速升至15 %，洗脫液B的體積百分比從90 %勻·速降至85% ·30-35min洗脫液A的體積百分比從15 %勻速升至20 %，洗脫液B的體積百分比從85 %勻速降至80% ·35-40min洗脫液A的體積百分比從20 %勻速升至30 %，洗脫液B的體積百分比從80 %勻速降至70% ·40-45min洗脫液A的體積百分比為30%，洗脫液B的體積百分比為70% ·45-50min洗脫液A的體積百分比從30 %勻速降至2 %，洗脫液B的體積百分比從·70% -勻速升至98%50-55min洗脫液A的體積百分比為2 %，洗脫液B的體積百分比為98 %。
10.根據權利要求3所述的檢測方法，其特征在于步驟如下 1)供試品溶液的制備 準確稱取10. OOOg粉碎的含有普洱茶提取物的面包樣于IOOml提取液(70%甲醇，.29. 7%水和O. 3%甲酸)在70°C水浴鍋中振蕩水浴30min，冷卻至室溫后，搖勻，倒入離心管中，在室溫3500r/min離心IOmin ;收集上清液,并用O. 45 μ m濾膜過濾,所得濾液作為供試品溶液； 2)對照品溶液的制備 分別稱取沒食子酸5. 09mg，兒茶素5. 10mg，表兒茶素5. 05mg，表沒食子兒茶素5. Ilmg,表兒茶素沒食子酸酯5. 05mg,表沒食子兒茶素沒食子酸酯5. 14mg溶于IOml 70%甲醇 .29. 3%水和O. 3%的甲酸溶液中； 3)標準曲線的繪制 取沒食子酸(O. 509mg/ml)、表沒食子兒茶素(O. 511mg/ml)、兒茶素(O. 510mg/ml)、表兒茶素(O. 505mg/ml)、表沒食子兒茶素沒食子酸酯(O. 514mg/ml)、表兒茶素沒食子酸酯(O. 493mg/ml)對照品，按色譜條件測定峰面積，并以峰面積(Y)對不同對照品濃度(X, mg/ml)進行線性回歸，回歸方程為Y= a · X+b式中 Y為對照品溶液的峰面積； X為對照品溶液的濃度(mg/ml)； a,b為常數 4)測定供試品溶液 精密吸取20 μ I試品溶液，按照色譜條件，在270nm下測定峰面積； 5)將不同的保留時間的成分進行含量計算，最后各成分之和即各兒茶素單體成分含量之和即為總兒茶素含量； 其中色譜條件為高效液相色譜儀(Agilent 1200)； 流動相洗脫液A :0. 2%乙酸乙腈溶液 洗脫液B :0. 2%乙酸水溶液 測定波長270nm 柱溫35°C 梯度洗脫條件洗脫液A和洗脫液B的體積百分比如下 0-8min洗脫液A的體積百分比為3 %，洗脫液B的體積百分比為97 % 8-14min洗脫液A的體積百分比從3%勻速升至8%，洗脫液B的體積百分比從97%勻速降至92% 14-25min洗脫液A的體積百分比從8%勻速升至10%，洗脫液B的體積百分比從92%勻速降至90% 25-30min洗脫液A的體積百分比從10 %勻速升至15 %，洗脫液B的體積百分比從90 %勻速降至85%· 30-35min洗脫液A的體積百分比從15 %勻速升至20 %，洗脫液B的體積百分比從85 %勻速降至80% 35-40min洗脫液A的體積百分比從20 %勻速升至30 %，洗脫液B的體積百分比從80 %勻速降至70% 40-45min洗脫液A的體積百分比為30%，洗脫液B的體積百分比為70% 45-50min洗脫液A的體積百分比從30 %勻速降至3 %，洗脫液B的體積百分比從70% -勻速升至97% 50-55min洗脫液A的體積百分比為3 %，洗脫液B的體積百分比為97 %。
全文摘要
本發明涉及一種烘烤食品中兒茶素含量的檢測方法，包括如下步驟(1)制備供試品溶液；(2)制備對照品溶液；(3)制作標準曲線；(4)測定供試品溶液；(5)根據標準曲線和供試品溶液的峰面積計算供試品中總兒茶素的含量。
文檔編號G01N30/88GK102890135SQ20121024814
公開日2013年1月23日 申請日期2012年7月18日 優先權日2011年7月19日
發明者李麗維, 李長文, 徐詠全 申請人:云南天士力帝泊洱生物茶集團有限公司