專利名稱：酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及體外診斷試劑技術領域，具體涉及一種酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑。
背景技術：
測定葡萄糖是一項對臨床有著重要意義的檢測項目，這是由于葡萄糖含量是重要的人體生理指標，在臨床上應用廣泛，需求量很大。體內的葡萄糖主要來自于食物，它是糖在體內的運輸形式，通過糖元生成與糖元分解、糖元異生與糖元酵解、脂肪形成與解脂作用間的相互調節與平衡，血糖的相對恒定對維持機體的正常生理功能有重要的意義。目前，葡萄糖含量偏高或偏低的臨床表現為1、葡萄糖升高高血糖癥最常見的是糖尿病；胰腺炎、胰腺癌等彌漫性胰腺疾病患，空腹血糖可增高；抽搐及某些疾病終期，糖元分解加速可出現輕度高血糖；窒息可引起酸中毒及糖元分解增多，結果出現高血糖；感染性疾病、毒血癥以及顱內疾患，由于機體內對病例損傷的反應,可能出現明顯的高血糖癥；麻醉往往可出現高·血糖，血糖升高的程度與麻醉種類和時間長短有關，并出現尿糖。2、葡萄糖降低最多見于接受超劑量胰島素治療的糖尿病患者；甲狀腺功能低下和腎上腺皮質功能低下患者，血糖可降至正常值范圍以下；由于肝糖元分解過程中某些酶的缺陷而引起的肝糖元累積病，糖元不能轉化為葡萄糖，也可能出現低血糖；慢性腹瀉吸收不良及脂肪瀉，由于葡萄糖吸收障礙可使血糖降低；劇烈運動可產生低血糖，肝臟病由于肝糖元儲備不足，有時可出現低血糖。臨床實驗室傳統測定血葡萄糖的方法為酶比色法，大致可分為兩種。第I種為葡萄糖氧化酶法(GOD )，葡萄糖在GOD催化下，生成葡萄糖酸和過氧化氫(H2O2)，H2O2與4-氨基安替吡啉和對溴苯酚生成紅色化合物，在一定范圍內，紅色深淺與葡萄糖量成正比，從而可求得血清中葡萄糖含量。第2種采用己糖激酶法(HK)，葡萄糖與ATP在HK催化下生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)和ADP，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)催化G-6-P與NAD+形成6-磷酸葡萄糖酸(6-PG)及NADH，NADH生成與樣本中葡萄糖濃度成正比。隨著大型全自動生化分析儀的推廣使用以及生化分析儀的更新換代，廣泛應用于臨床檢驗科的血葡萄糖的測定方法從傳統的酶比色法為主導逐漸過渡到酶比色法與酶電極法兩種方法并重的局面。葡萄糖酶比色法是根據葡萄糖在GOD或HK催化下的酶促反應，產生具有特征吸收峰的物質，在特定的波長下測定吸光度改變的速率，來計算溶液中葡萄糖的濃度，但傳統的酶比色法易受樣本中內源性物質，如維生素C、尿酸、尿素、膽紅素、肌酐的干擾，溶血樣本也會對其檢測產生影響。葡萄糖酶電極法是根據電化學原理，利用電勢與溶液中給定離子活動度的對數的線性關系，直接測定溶液中離子的濃度。在電極膜上連接上生物酶后，就能將電極法的快速與酶促反應的專一性結合起來，使測定結果可靠、快速，并可避免樣本中的內源性物質可能對比色產生影響，保證檢測結果的可靠性，進而為臨床診斷提供真實的數據。
在檢測速度上，酶電極法平均30秒可出結果，而傳統的酶比色法卻要費時I分鐘以上，因此，酶電極法更適用于急診，及時為臨床醫生提供檢測結果，爭取寶貴的治療時間。另外，酶電極法的其他性能指標，如線性范圍、準確度等，與傳統的酶比色法相比也符合方法學要求，且具有良好的相關性，適合現代快速臨床檢驗需求。而如何提供一種適用于酶電極法的、與傳統的酶比色法相比具有良好的相關性，較寬的檢測線性范圍，檢測速度更加快速，且 不受內源性物質的干擾，結果更加可靠的酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑成為亟待解決的問題。
發明內容
本發明針對現有技術的上述不足，提供一種與傳統的酶比色法相比具有良好的相關性，較寬的檢測線性范圍，檢測速度更加快速，更重要的是不受內源性物質的干擾，結果更加可靠的酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑。為解決上述技術問題，本發明的具體技術方案為一種酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑，該試劑包含緩沖液、葡萄糖氧化酶(G0D)、無水乙醇、碘鹽、鑰酸銨、穩定劑和防腐劑。上述的酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑，該試劑具體由以下濃度范圍的各組分組成緩沖液(pH6.0) :50-500mmol/L葡萄糖氧化酶(GOD):10-500KU/L無水乙醇0. 1-10% (v V體積百分含量)碘鹽l_100mmol/L鑰酸銨l-100mmol/L穩定劑:0.l-10g/L防腐劑0.l-10g/L。上述組份中，緩沖液為檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液、甘氨酸緩沖液、Tris緩沖液或醋酸-醋酸鈉緩沖液；上述組份中，碘鹽為碘化鉀或碘化鈉；穩定劑為丙三醇或辛醇；防腐劑為甲醛、疊氮鈉或PC系列防腐劑(如proclin300)。本發明酶電極法的主要原理為，一薄層GOD覆蓋在氧電極表面，通過氧電極檢測溶液中溶解氧的消耗量可以間接測定葡萄糖的含量。具體的反應原理為02在GOD催化下氧化葡萄糖，生成H2O2和葡萄糖酸，消耗反應液中的含氧量，用氧電極來測定反應液中的O2消耗速率，其下降速率與樣本中的葡萄糖成正比。由于本法直接測定O2消耗量，為了避免H2O2在過氧化氫酶存在時被催化生成O2而產生干擾，試劑中加入乙醇來消除干擾，同時為徹底消除H2O2，試劑中加入了碘鹽和鑰酸鹽。主要反應方程式為
葡萄糖 + + H1O ---^^>葡萄糖酸 + H1O1
HiOi +乙醇腺德, > 乙醛+ Hl0
權利要求
1.ー種酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的試劑包含緩沖液、葡萄糖氧化酶、無水こ醇、碘鹽、鑰酸銨、穩定劑和防腐剤。
2.根據權利要求I所述的酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述試劑具體由以下濃度范圍的各組分組成 緩沖液(PH6. 0) 50-500mmol/L 葡萄糖氧化酶10-500KU/L 無水こ醇0. 1-10%碘鹽l-100mmol/L 鑰酸銨l-100mmol/L 穩定劑:0. l-10g/L 防腐齊IJ :0. l-10g/L。
3.根據權利要求2所述的酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的緩沖液為檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液、甘氨酸緩沖液、Tris緩沖液或醋酸-醋酸鈉緩沖液。
4.根據權利要求2所述的酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的碘鹽為碘化鉀或碘化鈉。
5.根據權利要求2所述的酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的穩定劑為丙三醇或辛醇。
6.根據權利要求2所述的酶電極法檢測葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的防腐劑為甲醛、疊氮鈉或PC防腐剤。
全文摘要
本發明公開了一種酶電極法檢測葡萄糖的試劑，所述的試劑包含緩沖液、葡萄糖氧化酶、無水乙醇、碘鹽、鉬酸銨、穩定劑和防腐劑。本發明提供的葡萄糖檢測試劑利用酶電極檢測，適用于配備有葡萄糖酶電極的全自動生化分析儀，與傳統的葡萄糖酶比色法相比具有良好的相關性，且其具有抗干擾性能好，檢測快速，線性范圍寬等優點，尤其能夠滿足臨床急診生化的需求。
文檔編號G01N27/26GK102735726SQ20121018752
公開日2012年10月17日 申請日期2012年6月5日 優先權日2012年6月5日
發明者張桂春, 鄒炳德, 鄒繼華 申請人:寧波美康生物科技股份有限公司