專利名稱：一種通過檢測葉綠素含量鑒別蜂膠與楊樹膠的方法
技術領域：
本發明涉及蜂膠與楊樹膠鑒別技術領域，特別是通過葉綠素含量的含量檢測來鑒別蜂膠與楊樹膠的一種方法。
背景技術：
蜂膠具有降血脂、降血糖、提高人體免疫力、增強機體抵抗力、抗氧化、抗腫瘤、預防感染等多種生物學特性，被廣泛地應用在人體保健和疾病治療之中，是近年來國內外蜂廣品研究和開發的熱點。蜂膠是西方蜜蜂采集植物芽、葉或樹皮破裂處分泌的樹脂并混入蜜蜂上顎腺分泌 物和蜂蠟而成的芳香固體物，被蜜蜂涂布在蜂箱的縫隙、框耳等處，經人工收集的具有天然屬性的蜜蜂產品。我國天然蜂膠年產量約400噸，每公斤收購價在400元。楊樹膠是人工利用楊柳科楊屬植物的嫩枝、幼芽、樹皮等進行熬制提取的膠體，是國內假蜂膠的主要類型，其成本價每公斤150元左右。由于楊樹膠價格便宜，受利益驅動，目前我國蜂膠市場上有相當數量的產品是以楊樹膠冒充的蜂膠產品，這一現象倍受國內蜂業界及有關部門的關注。蜂膠和楊樹膠在感官性狀上十分相似，總黃酮類物質化學成分相差無幾，依據目前國內關于蜂膠的相關標準，難以區分兩者。比如1、中華人民共和國農業部發布NY5136-2002無公害食品蜂膠中，用高效液相色譜法測定蜂膠中的總黃酮含量，儀器昂貴，過程繁雜，而且八種黃酮高良姜素、蘆丁、槲皮素、楊梅酮、莰菲醇、芹菜素、松屬素、柯因標樣價格昂貴，國內購買不全。而且楊樹膠中也同樣含有前述八種黃酮只是各自的比例不同，無法從根本上區分蜂膠和楊樹膠。2、中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局發布GB/T 24283-2009蜂膠中，用紫外分光光度法，以蘆丁為對照品，測定蜂膠中的總黃酮含量，檢測儀器和和對照品成本較高，而且楊樹膠中以蘆丁為對照的總黃酮與蜂膠中總黃酮相同，同樣無法區分蜂膠和楊樹膠。3、NY5136-2002和GB/T 24283-2009中，均有測定乙醇提取物含量和氧化時間，在相同條件下楊樹膠同樣可以滿足這兩項檢測指標，也無法區分蜂膠和楊樹膠。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種有效鑒別蜂膠和楊樹膠的方法。本發明的技術問題通過下述方法解決
一種檢測葉綠素含量鑒別蜂膠與楊樹膠的方法，以丙酮提取試樣中的葉綠素，用乙醚分層萃取，硫酸鈉溶液洗滌凈化，于兩處一定的波長下比色定量，進行鑒別；具體工藝步驟如下
a、分析步驟
a.I、蜂膠的炮制及提取取毛蜂膠樣品，先在-5 一 10°C以下冷凍24 48小時，然后搗碎精密稱定；置于玻璃研缽中，加與樣品等量的碳酸鈣及石英砂，研磨，加相當兩倍樣品量的乙醇繼續研磨成糊狀；將研磨物全部轉移至具塞錐形瓶中，用乙醇洗滌研缽至無色，使乙醇量達到樣品量的二十倍，密塞、冷浸、振搖混勻、靜置24 48小時，用63玻璃漏斗抽濾，用丙酮水溶液洗滌抽干；將漏斗內殘渣倒回研缽中加丙酮水溶液研磨，再轉移至漏斗中，抽濾，繼續用丙酮水溶液洗滌研缽及漏斗中的殘渣，至濾液無色，使用丙酮水溶液量達到樣品量的二十倍；精密吸取總抽濾液的四分之一，置于干燥恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，在90°C 110°C溫度下干燥3小時并冷卻至室溫，迅速精密稱定重量，以干燥品計算出毛蜂膠中浸出物的含量(％);
a.2、試樣的溶解取上述干燥蜂膠提取物，精密稱定，置燒杯中，加丙酮水溶液使供試品全部溶解，備用；
a.3、分離凈化將上述試樣溶解液全部轉入內盛硫酸鈉溶液的分液漏斗中，用乙醚分次洗滌燒杯，并入分液漏斗中，振搖，使分層，水層放入另一分液漏斗中，加試樣溶解液五分之三的乙醚萃取，棄去水層；有機層并入第一個分液漏斗中，用水洗滌，棄去水層；將乙醚層通過一裝有無水硫酸鈉的小漏斗濾入棕色容量瓶中，用試樣溶解液五分之一的乙醚洗滌分液漏斗，并洗去無水硫酸鈉層中的色素，定容，搖勻，待用；
a.4、測定取上述溶液到棕色容量瓶中，用乙醚定容，搖勻，立即于分光光度計上測定642nm及660nm波長處的吸光值,用乙醚作空白。a. 5通過一定的公式計算出試樣中葉綠素的含量。所述試劑為化學純或分析純，水為蒸餾水。所述試劑包括乙醇、碳酸鈣、石英砂試劑級、丙酮、無水硫酸鈉、乙醚、丙酮水溶液及硫酸鈉水溶液中的一種。所述的試劑無水硫酸鈉為在650°C灼燒4h的無水硫酸鈉。所述的試劑丙酮水溶液的質量體積比為85+15，V/V。所述的試劑硫酸鈉水溶液為2%，m/V。上述試樣及加入物為固體時以g為計量單位，試樣及加入物為液體時以ml為計量單位，在倍數換算時Ig相當于1ml。本發明采用極性較低的有機溶劑萃取和分離蜂膠或以楊樹皮或芽為材料制成的楊樹膠中的葉綠素，以分光光度法對其含量進行定量檢測，分別求出蜂膠和楊樹膠各自葉綠素含量的最高值和平均值，設定蜂膠葉綠素含量安全限值為15mg/100g，通過對比檢測葉綠素含量可準確鑒別蜂膠和楊樹膠。如果被檢測樣品葉綠素含量值<15mg/100g，可判定樣品是真蜂膠；如果被檢測樣品葉綠素含量值> 15mg/100g，可判定樣品是假蜂膠，或是在蜂膠中摻入了楊樹膠，檢測樣品葉綠素含量值越高說明楊樹膠摻入量越大。本發明的檢測方法簡便，檢測樣品及設備簡單易得，檢測準確率高。具體實施方法 實施例I
方法原理以丙酮提取試樣中的葉綠素，用乙醚分層萃取，硫酸鈉溶液洗滌凈化，于642nm及660nm波長下比色定量。試劑乙醇。儀器設備
多孔電子恒溫水浴鍋，分光光度計，具塞錐形瓶、250ml，瓷蒸發皿，玻璃研缽、150ml, G3玻璃砂芯漏斗，分液漏斗、250ml，棕色容量瓶、50ml，移液管、IOml、20ml。I、分析步驟
I.I、蜂膠的炮制及提取取毛蜂膠樣品5g，先在-5°C下冷凍24h，然后搗碎精密稱定；置于玻璃研缽中，加碳酸鈣5g及石英砂5g，緩緩研磨成極細粉，加乙醇IOml繼續研磨成糊狀；將研磨物全部轉移至250ml具塞錐形瓶中，用乙醇洗滌研缽近無色，使乙醇的總體積至100ml，密塞，冷浸，前6h內時時振搖，再靜置18h，全部用G3玻璃漏斗抽濾，用丙酮水溶液(85%)反復洗漆錐形瓶至漏斗內抽干；將漏斗內殘洛倒回研缽中用丙酮水溶液研磨5min,再轉移至漏斗中，抽濾，繼續用丙酮水溶液反復洗滌研缽及漏斗中的殘渣，至濾液近無色，使用丙酮水溶液的總體積為IOOml。精密吸取抽濾液50ml，置于干燥恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，在110°C干燥3h，置干燥器中冷卻30min至室溫，迅速精密稱定重量，以干燥品計算出毛蜂膠中浸出物的含量(％)。I. 2、試樣的溶解取上述干燥蜂膠提取物約0. 2g，精密稱定，置50ml燒杯中，加丙酮水溶液(85%) 50ml使供試品全部溶解，得50ml試樣溶液，備用。I. 3、分離凈化將上述試樣溶解液全部轉入內盛50mL 2%硫酸鈉溶液的250ml分液漏斗中，用20ml乙醚分次洗滌燒杯，并入分液漏斗中，振搖lmin，使分層，水層放入另一分液漏斗中，加20ml乙醚萃取，棄去水層；有機層并入第一個分液漏斗中，用水洗滌兩次，每次20ml，棄去水層。將乙醚層通過一裝有5g無水硫酸鈉的小漏斗濾入50ml棕色容量瓶中，用乙醚洗滌分液漏斗，并洗去無水硫酸鈉層中的色素，定容，搖勻，待用。I. 4、測定取上述溶液IOml到50ml棕色容量瓶中，用乙醚定容，搖勻，立即于分光光度計上測定642nm及660nm處的吸光值，I cm比色皿，用乙醚作空白。I. 5結果計算
按下式(I)、( 2 )計算試樣中的總葉綠素質量分數含量。X1= . 12A660+16 . 8A642 ....................................... (I)
X2= [(X1XVXF) (mX 1000)] XlOO ............... (2)
式中A1 —樣液中總葉綠素的含量，單位為毫克每升(mg/L)；
A 一相應波長處(660nm，642nm)測得吸光值；
X2 一試樣中總葉綠素的質量分數,單位為毫克每100克(mg/100g)
V一提取液的總體積，單位為暈升(ml)；
F一試樣的稀釋倍數； m 一試樣的質量,單位為克(g)；
測定結果取平行試驗結果的算術平均數，保留小數點后第一位。平行試驗允許誤差(相對)不大于3%。a.楊樹(芽)膠的檢測結果見下表I :表I吸光值吸光值I相對誤差I葉綠素含量 樣口口編 5 取樣里(匕)A642A660(%)(n g./100g)
楊樹膠 I0.2026CL 1300. 125L 375, I
楊樹膠 II0. 20010, 2130, 1951,5124. 4
楊樹膠III0.20390, 1910. 180I. 3HO. I
權利要求
1.一種檢測葉綠素含量鑒別蜂膠與楊樹膠的方法，以丙酮提取試樣中的葉綠素，用乙醚分層萃取，硫酸鈉溶液洗滌凈化，于兩處波長下比色定量，進行鑒別；具體工藝步驟如下 a、分析步驟 a. I、蜂膠的炮制及提取取毛蜂膠樣品，先在_5°C 一 10°C下冷凍24 48小時，然后搗碎精密稱定；置于玻璃研缽中，加與樣品等量的碳酸鈣及石英砂，研磨，加相當兩倍樣品量的乙醇繼續研磨成糊狀；將研磨物全部轉移至具塞錐形瓶中，用乙醇洗滌研缽至無色，使乙醇量達到樣品量的二十倍，密塞、冷浸、振搖混勻、靜置24 48小時，用G3玻璃漏斗抽濾，用丙酮水溶液洗滌抽干；將漏斗內殘渣倒回研缽中加丙酮水溶液研磨，再轉移至漏斗中，抽濾，繼續用丙酮水溶液洗滌研缽及漏斗中的殘渣，至濾液無色，使用丙酮水溶液量達到樣品量的二十倍；精密吸取總抽濾液的四分之一，置于干燥恒重的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，在90°C 110°C溫度下干燥3小時并冷卻至室溫，迅速精密稱定重量，以干燥品計算出毛蜂膠中浸出物的含量(％); a. 2、試樣的溶解取上述干燥蜂膠提取物，精密稱定，置燒杯中，加丙酮水溶液使供試品全部溶解，備用； a. 3、分離凈化將上述試樣溶解液全部轉入內盛硫酸鈉溶液的分液漏斗中，用乙醚分次洗滌燒杯，并入分液漏斗中，振搖，使分層，水層放入另一分液漏斗中，加試樣溶解液五分之二的乙醚萃取，棄去水層；有機層并入第一個分液漏斗中，用水洗滌，棄去水層；將乙醚層通過裝有四分之一乙醚量的無水硫酸鈉的小漏斗濾入棕色容量瓶中，用試樣溶解液五分之三的乙醚洗滌分液漏斗，并洗去無水硫酸鈉層中的色素，定容，搖勻，待用； a. 4、測定取上述溶液到棕色容量瓶中，用乙醚定容，搖勻，立即于分光光度計上測定642nm及660nm波長處的吸光值,用乙醚作空白； a. 5計算出試樣中葉綠素的含量。
2.根據權利要求I所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述試劑為化學純或分析純，水為蒸懼水。
3.根據權利要求I或2所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述試劑包括乙醇、碳酸鈣、石英砂試劑級、丙酮、無水硫酸鈉、乙醚、丙酮水溶液及硫酸鈉水溶液中的一種。
4.根據權利要求3所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述的試劑無水硫酸鈉為在650°C灼燒4h的無水硫酸鈉。
5.根據權利要求3所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述的試劑丙酮水溶液的質量體積比為85+15，V/V。
6.根據權利要求3所述的一種蜂膠與楊樹膠的鑒別方法，其特征在于所述的試劑硫酸鈉水溶液為2%, m/Vo
全文摘要
本發明提供了一種檢測葉綠素含量鑒別蜂膠與楊樹膠的方法，以丙酮提取試樣中的葉綠素，用乙醚分層萃取，硫酸鈉溶液洗滌凈化，于兩處一定的波長下比色定量，進行鑒別。本發明采用極性較低的有機溶劑萃取和分離蜂膠或以楊樹皮或芽為材料制成的楊樹膠中的葉綠素，以分光光度法對其含量進行定量檢測，分別求出蜂膠和楊樹膠各自葉綠素含量的最高值和平均值，設定蜂膠葉綠素含量安全限值為15mg/100g，通過對比檢測葉綠素含量可準確鑒別蜂膠和楊樹膠。本發明的檢測方法簡便，檢測樣品及設備簡單易得，檢測準確率高。
文檔編號G01N1/34GK102778437SQ20121017585
公開日2012年11月14日 申請日期2012年5月31日 優先權日2012年5月31日
發明者劉泊, 楊茂森, 王鑫 申請人:楊茂森