專利名稱：分散液液微萃取結合磁固相萃取測定茶葉中三嗪類農藥殘留量方法
技術領域：
本發明涉及茶葉農藥殘留分析的樣品前處理方法，是ー種分散液液微萃取結合磁固相萃取方法，應用于茶葉農藥殘留分析中。
背景技術：
茶是我國傳統的飲品，因其特殊的香味和養生效果廣受人們的喜愛。茶葉是我國出口項目的主要經濟作物，為了增加作物產量，減少害蟲侵害，在種植過程中使用了各種殺蟲劑、和除草劑農藥進行預防控制。近些年，許多國家對茶葉中的農藥殘留的檢測項目不斷増加，并且不斷降低檢測物質的檢出限量，這些對茶葉出口國家無疑是個巨大的挑戰。茶是通過用沸水泡茶葉而飲用的，但是這樣就増大了人們接觸農藥殘留的風險，而且長期低劑量的飲用對人體健康會造成較大的危害。因此茶葉中農藥殘留的檢測，有著十分重要的意義。在整個分析過程中，樣品前處理的時間占總分析時間的60%，所以建立一種高效、快速、靈敏的樣品前處理方法是保證準確和快速分析的關鍵。茶葉中農藥殘留檢測的最主要的項目是除草剤，因為除草劑在茶葉生產中使用得十分普遍，其中以三嗪類的除草劑為主。三嗪類除草劑是ー種普遍使用的選擇性芽前和芽后旱田除草剤，主要抑制作物的光合作用，目前在世界上廣泛使用，約占所用農用除草劑的30%。三嗪類除草劑用量太、性質穩定、持效期長，對人類健康和環境所造成的危害越來越為人們所關注。茶葉農藥殘留分析中，經典的樣品前處理方法如索氏提取和液液萃取都存在一定的不足。這些方法步驟繁瑣，不僅花費大量時間，而且有機溶劑用量大，萃取效率較低。分散液液微萃取具有快速達到萃取平衡、操作簡單快速、使用有機溶劑量少和低毒等優點。但是分散液液微萃取需要密度比水大，并且不溶于水的有機溶剤。若選用密度比水小的有機溶齊U，萃取后很難將萃取劑從樣品水溶液中取出。這樣，在一定程度限制了這種方法的應用。我們利用自制的表面修飾了 CS的磁性納米粒子的疏水性，與分散液液微萃取結合，吸附萃取劑，利用磁性納米粒子的磁性，能方便快捷地將液體萃取劑與樣品溶液分離，最后用解析液將吸附在納米粒子上的萃取劑解析，進行高效液相色譜-質譜聯用分析。本發明采用分散液液微萃取結合磁固相萃取法用于茶葉中三嗪類農藥殘留的前處理。方法原理是選擇對三嗪類農藥具有良好溶解性能的溶劑作為提取劑，利用磁性納米粒子的磁性來吸附萃取劑。這種方法的優點是不必進行樣品的轉移和旋轉蒸發濃縮等步驟，操作簡便，萃取效率高，回收率高，溶劑消耗量小，分析成本低，是ー種綠色環保的樣品前處理方法。本發明將這種前處理方法與液相色譜-質譜聯用，應用到茶葉農藥殘留分析 中。既發揮了色譜的高分離能力，又發揮了質譜的高鑒別能力，非常適用于復雜基質中多組分混合物的定性和定量分析
發明內容
本發明目的就是針對茶葉樣品前處理，提出一種簡單、易操作、重現性較好、靈敏度較高的分散液液微萃取結合磁固相萃取方法，用于茶葉中三種三嗪類農藥殘留量的快速檢測。本發明的技術方案如下
一種茶葉中農藥殘留量測定的前處理方法，其特征是分散液液微萃取結合磁固相萃取法，方法步驟包括
1)、將碾細的茶葉試樣置于10毫升具塞的聚丙烯離心管中，加入こ腈提取，振蕩并離心，移取上清液至另ー個離心管中，重復以上提取步驟，合并兩次提取液，40攝氏度氮吹至干;
2)、向離心管中加入水復溶，加入正辛醇和磁性納米粒子溶液，振蕩后用磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管的壁上，并移除廢液；
3)、在離心管中加入甲醇并渦旋，用磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管底部，將溶液取出，供液相色譜-質譜聯用儀測定。本方法的優點
1、處理過程比較簡單，大大縮短了萃取分析時間(2分鐘)；
2、分散劑只使用了少量的正辛醇(20微升)，吸附劑用了少量的磁性納米粒子(4毫克)，對目標物的吸附效果較好，分析成本低，經濟、實用；
3、本方法所消耗的有機溶劑量大大降低，對環境更加友好；
4、方法的萃取效率高，回收率高，減少了目標化合物的損失。因此，本方法簡單、快速，大大降低了實驗成本，適合于茶葉樣品基質中痕量組分的測定，具有較強的應用價值。
3種農藥標準溶液的多反應監測(MRM)色譜圖(10微克/千克)
圖I.撲滅津標準溶液的多反應監測色譜圖 圖2.阿特拉津標準溶液的多反應監測色譜圖 圖3.特丁津標準溶液的多反應監測色譜圖。
具體實施例方式利用本方法測定茶葉中的3種三嗪類農藥殘留物。稱取O. 5克試樣，精確至O. 01克，置于10毫升具塞的聚丙烯離心管中，加入3毫升こ腈，充分震蕩(3分鐘)，以4000轉/分鐘離心5分鐘，移取上清液至另ー個離心管中，再向殘渣中加入3毫升こ腈，重復以上步驟，合并兩次提取液；40攝氏度氮吹至干，移取5暈升水潤旋5分鐘,加入20微升正辛醇,震蕩90秒,再加入200微升20暈克/暈升的磁性納米粒子溶液，震蕩90秒，使正辛醇液滴吸附到納米粒子表面，用超強磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管的壁上，同時用一次性滴管小心移除廢液。在離心管中加入50微升的甲 醇，渦旋90秒，用超強磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管底部，用微量進樣器將溶液取出，進行高效液相色譜-質譜聯用分析。C8-amine-Fe304 MNPs 的合成分為兩步。第一歩,將 I. O g FeCl3 · 6H20 溶解于 30mLこニ醇中，然后加入4. Og無水醋酸鈉和3. 6 g 1，6-己ニ胺,充分振搖后,將溶液放入反應釜中密封加熱6小吋。反應完后，在超聲條件下こ醇清洗產物3次，干燥，即可得到黒色粉末amine_Fe304 MNPs0第二步，取40 mg amine_Fe304 MNPs粉末加入4 mL無水批唳中,超聲使其充分分散。然后加入O. 4 mL ニ甲基辛基硅烷，在室溫下振搖反應12 h。最后得到的產物清洗并收集。色譜條件色譜柱Waterssymmetry C8 column (150 X 2· I 毫米)；柱溫40 攝
氏度；流速0. 2毫升/分鐘；進樣量10微升；流動相A相水(含O. 1%甲酸)；B相甲醇
(含O. 1%甲酸)。梯度洗脫條件見表I :
表I液相色譜梯度洗脫條件
時間(min)さ相(％)[B相(％)
0.0050:50[
7.0015:85:
10.00[50]50
質譜條件離子源電噴霧離子源；掃描模式正離子模式；毛細管電壓1千伏；萃取電壓4伏；離子源溫度120攝氏度；去溶劑溫度350攝氏度；去溶劑氣流量600升/小時；錐孔氣流量50升/小時；檢測方式多反應監測(MRM);選擇離子檢測每種化合物分別選擇ー個定量離子，2個定性離子。定性離子對、定量離子對、碰撞氣能量和去簇電壓參見表2 :
表2 3種三嗪類農藥的定性定量離子對、碰撞氣能量和錐孔電壓
定性離子對定堡離子對 氣能量嫌孔電歷 化合物名稱分+子量 ，f，f ..x
m/zjimfz)/eV/f
ヤ230.2/146.1 230.2/188.24
撲滅津 229.1r40
230.0/188.1 I18
228.1/186.1 228.1/186. 18津 227.133
228.1/68.1I36
抑ヤ,也230.0/174.0 230.0/174.16
特丁津 229.1,34
230.0/96.0O28
將其應用于實際茶葉測定，回收率在81. 69Γ98. 6%之間(見表3)，且檢測限范圍明顯増大，線性相關系數達到O. 9995以上(見表4)。本發明的方法克服了分散液液微萃取中萃取劑選擇范圍小，萃取后萃取劑不易取出的缺點，利用疏水性的磁性納米粒子收集萃取劑，擴展了分散液液微萃取的應用范圍。本方法有諸多優點成本低、操作簡便、環保、分析時間短、萃取效率高等，在茶葉農藥殘留量檢測中具有重要的應用價值。表3 3種農藥添加濃度及其平均回收率的試驗數據_
序號"[化合物名稱_加濃度/(Pg/kg)平均回收率/ (%)
1撲滅津O. I81.6
2阿特拉津O. I89. 5
3〔特丁津
θ. 9998 I》. 001-10
權利要求
1.一種茶葉中農藥殘留量測定的前處理方法，其特征是分散液液微萃取結合磁固相萃取法，方法步驟包括 1)、將碾細的茶葉試樣置于10毫升具塞的聚丙烯離心管中，加入こ腈提取，振蕩并離心，移取上清液至另ー個離心管中，重復以上提取步驟，合并兩次提取液，40攝氏度氮吹至干; 2)、向離心管中加入水復溶，加入正辛醇和磁性納米粒子溶液，振蕩后用磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管的壁上，并移除廢液； 3)、在離心管中加入甲醇并渦旋，用磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管底部，將溶液取出，供液相色譜-質譜聯用儀測定。
2.如權利要求I所述的茶葉中農藥殘留量測定的前處理方法，其特征是方法步驟為稱取O. 5克試樣,置于10暈升具塞的聚丙烯尚心管中，加入3暈升こ腈,充分震蕩，以4000轉/分鐘離心5分鐘，移取上清液至另ー個離心管中，再向殘渣中加入3毫升こ腈，重復以上步驟，合并兩次提取液；40攝氏度氮吹至干，移取5毫升水渦旋5分鐘，加入20微升正辛醇，震蕩90秒，再加入200微升20毫克/毫升的磁性納米粒子溶液，震蕩90秒，用磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管的壁上，同時用一次性滴管移除廢液；在離心管中加入50微升的甲醇，渦旋90秒，用磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管底部，用微量進樣器將溶液取出，進行高效液相色譜-質譜聯用分析。
全文摘要
一種分散液液微萃取結合磁固相萃取法測定茶葉中三嗪類農藥殘留量。為茶葉樣品前處理方法，操作步驟包括取0.5克試樣，置于10毫升具塞的聚丙烯離心管中，加入3毫升乙腈，振蕩，離心，移取上清液至另一個離心管中，再向殘渣中加入3毫升乙腈，重復以上步驟，合并兩次提取液；氮吹至干，移取5毫升水渦旋，加入20微升正辛醇，震蕩，再加入200微升20毫克/毫升的磁性納米粒子溶液，震蕩，用磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管的壁上，同時移除廢液。在離心管中加入50微升甲醇，渦旋，用磁鐵將磁性納米粒子吸在離心管底部，用微量進樣器將溶液取出，進行高效液相色譜-質譜聯用分析。本方法操作簡便，分析時間短，成本低，靈敏度高，適用于茶葉農藥殘留檢測。
文檔編號G01N30/06GK102706993SQ201210174449
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月31日 優先權日2012年5月31日
發明者張玉, 徐暉, 梁璐, 王帥 申請人:華中師范大學