專利名稱：酸性磷酸酶活性測定試劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及酸性磷酸酶活性測定試劑盒技術領域。
背景技術：
前列腺癌是主要危及老年男性的惡性腫瘤，在歐美國家其發病率居男性惡性腫瘤第一位，死亡率僅次于肺癌，占第二位。我國居民前列腺癌的患病率低于國外，但隨著我國人口的老齡化及居民生活水平的提高，發病率也呈增長趨勢 。在美國，平均每六個老年人中就有一個人患前列腺癌。前列腺酸性磷酸酶是男性血清酸性磷酸酶(ACP)的主要來源，是只由前列腺上皮細胞溶酶體產生的一種同工酶，是一種糖蛋白，有兩個亞基構成，相對分子量約為1，000, 000，主要分布在精液和尿中，血清中含量較低，具有組織特異性，一度被認為是前列腺癌特異性最敏感的腫瘤標志物，廣泛用于前列腺診斷和治療監控。近來的研究表明，它并不是絕對的組織特異性標志物。在臨床上，前列腺炎在惡性和良性病變之間重疊較大，不宜單獨作為前列腺癌早期診斷的有效篩選指標。但將其用以聯檢，結合前列腺特異抗原密度測量、直腸指診和直腸超等手段，能明顯提高前列腺癌篩查的靈敏度。目前實驗室多采用以磷酸萘酚為底物，經ACP(酸性磷酸酶)水解后釋放萘酚，再與固紅TR鹽發生偶氮化反應，通過在405nm處監測偶氮化合物生成的速率進行ACP動力學法測定，由于膽紅素等在400nm處有吸收，因此對檢測會產生嚴重干擾。
發明內容
本發明針對現有技術不足，提供一種準確度、精密度較好，穩定性好，抗膽紅素干擾能力強，能滿足臨床檢驗要求的酸性磷酸酶活性測定試劑盒。為了解決上述技術問題，本發明所采用的技術方案為酸性磷酸酶活性測定試劑，該試劑盒包括如下濃度范圍的各組分
緩沖液 CpH 4.0-5.0)0.05-0.5 M (moI/L)
鱗酸萘■1-100 mM (mmol/L)
_紅丁11 (4_氯鄰甲苯胺鹽酸鹽)1-100 mM 去干擾劑1~100 mM
穩定劑0.1-10 g/L
激活劑0.1 10 g/L
防腐劑0.1 10 g/L。本發明試劑盒可以是單試劑試劑盒，做成單試劑，該試劑盒包括如下濃度范圍的各組分
緩沖液(pH4.0~5.0)0.05-0.5 M
磷酸萘酚I-IOOmM
N 紅 TRIMOOmM
去千擾劑1-100 mM
穩定劑0.1-10 g/L
激活劑0.1 10g/L
防腐劑0.1 10g/L;上述單試劑的試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液體試劑，直接使用。發明試劑盒還可以配成雙試劑試劑盒，更有利于消除膽紅素干擾，該試劑盒包括如下濃度范圍的各組分試劑I :
緩沖液 CpH 4.0-5.0)0.05-0.5 M
去干擾劑I-IOOmM
穩定劑0.1~10g/L
防腐劑0.1 10g/L;試劑2:
磷酸萘酚I-IOOmM
㈣紅 TRI-IOOmM
激活劑0.1-10 g/L
防腐劑0.1 10 g/L。雙試劑的 配方不僅限于上述配方，其中試劑2的成分磷酸萘酚，固紅TR，激活劑中的一種或者兩種可以放在試劑I ;試劑I中的成分去干擾劑，穩定劑中的一種也可以放在試劑2，如此可形成多種配方，不在此一一詳述。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液體試劑，直接使用。發明試劑盒還可以配成如下三試劑的試劑盒，不但更有利于消除膽紅素干擾，還更利于試劑的穩定，該試劑盒包括如下濃度范圍的各組分試劑I :緩沖液(pH 4.0-5.0)0.05-0.5 M
去千擾劑I-IOOmM
穩定劑0.1 10 g/L
防腐劑0.1 10 g/L;試劑2:磷酸萘酚I-IOOmM防腐劑0. I 10g/L ；試劑3 固紅TRI-IOOmM激活劑0. I 10g/L防腐劑0. I 10g/L。上述三試劑的配方不僅限于上述配方，其中試劑I的成分去干擾劑、穩定劑可以放在試劑2或試劑3中；試劑2的成分磷酸萘酚可以放在試劑I或試劑3中；試劑3的成分固紅TR、激活劑可以放在試劑I或試劑2中；如此可形成多種配方，不在此一一詳述。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液體試劑，直接使用。本發明上述的各種試劑盒配置，即采用常規的將各組分與水混合均勻，形成上述試劑配方的試劑盒。本發明上述各種試劑盒中的緩沖液的pH值可以是4.(T5.0，可以是甘氨酸-鹽酸緩沖液、鄰苯二甲酸-鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、乙酸-乙酸鈉緩沖液、2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液等中的一種，優選2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液。本發明中的激活劑為曲拉通100 (曲拉通X-100)、l，5-戊二醇、1，10-癸二醇等中的一種或幾種。本發明中的穩定劑為吐溫20、吐溫80、布里杰-35 (Brij-35)(非離子表面活性劑)、甘油、乙二醇、BSA等中的一種或幾種。本發明中的去干擾劑為釩酸鹽(釩酸鈉、釩酸鉀等)、亞硝酸鹽(如鉀、鈉鹽)、亞鐵氰化鉀、高鐵氰化鉀等中的一種或幾種。本發明中的磷酸萘酚包括萘酚AS-BI磷酸二鈉、萘酚AS-MX磷酸二鈉、磷酸萘酚AS-E、磷酸萘酚AS-BS、萘酚AS-TR磷酸鹽等中的一種或幾種。本發明的防腐劑為疊氮鈉或proclin系列防腐劑(如Proclin300)等。本發明的優點和有益效果本發明的試劑盒采用在酸性條件下，通過去干擾劑的氧化作用將樣本中存在的膽紅素氧化成膽綠素，從而消除了其在405nm檢測波長處的干擾。
具體實施例方式以下是本發明的具體實施例，對本發明的技術方案作進一步描述，但本發明并不限于這些實施例。本發明試劑盒均采用行業常規方法配置，具體過程不再詳述。本發明的檢測原理如下a-磷酸萘酚經ACP水解后釋放出a-萘酚和磷酸，a-萘酚再與固紅TR鹽發生偶氮化反應生成重氮化合物，重氮化合物在405nm處有特異吸收，通過測定在405nm處吸光度的變化速率來計算ACP的活性。實施例I (單試劑)
權利要求
1.一種酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于該試劑盒包括如下濃度范圍的各組分緩沖液(pH4.0-5.0)0.05-0.5 M磷酸萘酚I IOOmMj丨1丨UI TR卜 I OOmM去千擾劑I-IOOmM穩定劑0.1 10g/L激活劑0.1~10g/L防腐劑0.1 10g/L。
2.—種權利要求I所述的酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于該試劑盒為單試劑試劑盒，該單試劑試劑盒包括如下濃度范圍的各組分緩沖液(pH4.0....5.0)0.05-0.5 Vl磷酸萘酚I IOOmM!丨丨丨I紅TR! -100 mM去干擾劑I-IOOmM穩定劑0.1~10g/L激活劑0.1 10g/L防腐劑0.1 10g/L。
3.—種權利要求I所述的酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于該試劑盒為雙試劑試劑盒，該雙試劑試劑盒包括如下濃度范圍的各組分 試劑I :緩沖液(pH 4.0-5.0；0.05-0.5 M去干擾劑I-IOOmM穩定劑0.1 10g/L防腐劑0.1 10g/L; 試劑2 磷酸萘酚I-IOOmMj丨丨丨I紅TRI-IOOmM激活劑0.1 10g/L防腐劑0.1-10 g/Lo
4.一種權利要求I所述的酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于該試劑盒為三試劑試劑盒，該三試劑試劑盒包括如下濃度范圍的各組分 試劑I :緩沖液(pH 4.0-5.0)0.05-0.5 M去千擾劑I-IOOmM穩定劑0.1~10g/L防腐劑0.1 10g/L; 試劑2 磷酸萘酚I-IOOmM 防腐劑0. I 10g/L ； 試劑3 固紅 TRI-IOOmM 激活劑0. I 10g/L 防腐劑0. I 10g/L。
5.根據權利要求1-4任一權利要求所述的酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于所述的緩沖液為甘氨酸-鹽酸緩沖液、鄰苯二甲酸-鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、乙酸-乙酸鈉緩沖液、2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液中的一種。
6.根據權利要求1-4任一權利要求所述的酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于所述的激活劑為曲拉通100、I，5-戊二醇、1，10-癸二醇中的一種或幾種。
7.根據權利要求1-4任一權利要求所述的酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于所述的穩定劑為吐溫20、吐溫80、布里杰-35、甘油、乙二醇、BSA中的一種或幾種。
8.根據權利要求1-4任一權利要求所述的酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于所述的去干擾劑為釩酸鹽、亞硝酸鹽、亞鐵氰化鉀、高鐵氰化鉀中的一種或幾種。
9.根據權利要求1-4任一權利要求所述的酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于所述的磷酸萘酚包括萘酚AS-BI磷酸二鈉、萘酚AS-MX磷酸二鈉、磷酸萘酚AS-E、磷酸萘酚AS-BS、萘酚AS-TR磷酸鹽中的一種或幾種。
10.根據權利要求1-4任一權利要求所述的酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于所述的防腐劑為疊氮鈉或proclin系列防腐劑。
全文摘要
本發明公開一種酸性磷酸酶活性測定試劑，其特征在于該試劑盒包括如下濃度范圍的各組分緩沖液(pH4.0-5.0)0.05~0.5M，磷酸萘酚1~100mm，固紅TR 1~100mm，去干擾劑1~100mm，穩定劑0.1~10g/L，激活劑0.1~10g/L，防腐劑0.1~10g/L。本發明的試劑盒具有準確度、精密度較好，穩定性好，抗膽紅素干擾能力強，能滿足臨床檢驗要求的優點。
文檔編號G01N21/75GK102706861SQ20121016972
公開日2012年10月3日 申請日期2012年5月24日 優先權日2012年5月24日
發明者沃燕波, 臧海燕, 鄒炳德, 鄒繼華 申請人:寧波美康生物科技股份有限公司