專利名稱：一種外用抗真菌藥的檢測方法
技術領域：
本發明涉及ー種外用抗真菌藥的檢測方法，具體涉及鞣柳硼三酸散的檢測方法，屬于中藥的質量鑒定領域。
背景技術：
真菌感染性疾病根據真菌侵犯人體的部位分為4類淺表真菌病、皮膚真菌病、皮下組織真菌病和系統性真菌病；前二者合稱為淺部真菌病，后二者又稱為深部真菌病。淺部真菌(癬菌)僅侵犯皮膚、毛發和指(趾)甲，而深部真菌能侵犯人體皮膚、黏膜、深部組織和內臟，甚至引起全身播散性感染。因此，出現了許多抑制或消除真菌感染的藥物，如灰黃霉素、兩性霉素B等抗生素，咪康唑、 氟咆嘧啶等合成藥，以及ー些古老的抗真菌外用藥如水楊酸、碘劑等。其中由鞣酸、水楊酸、硼酸三種成分組成的外用抗真菌藥鞣柳硼三酸散，質量標準收載于化學藥品地方標準上升國家標準(第十冊)，標準號WS-10001-(HD-1007)-2002。本發明人經過研究發現，其中的水楊酸可以溶解角質間的構成形物質(cement)，使角質層產生脫落，能去除積聚過厚的角質層，促進新陳代謝。但現行標準僅對鞣酸、水楊酸、硼酸進行簡單的定性鑒別，沒用采用高效液相等定性鑒別，也沒有對制劑中重要的指標水楊酸進行含量測定，質量難以控制，該種藥品的療效得不到有效的保證。另外，楊大勇等在文獻《高效液相色譜法測定鞣柳硼三酸散中水楊酸的含量》中，提出了米用 Symetry Shield RP18 (5 μ m4. 6mmX 250mm) Columm 色譜柱，以 O. 05mol/L 憐酸ニ氫鈉緩沖液(PH2.6)-こ腈(50 50)為流動相，檢測波長為233nm的檢測條件，來對鞣柳硼三酸散中水楊酸的含量進行測定，取得了一定效果，但是分離度不佳，峰形有拖尾，另外重復性和穩定性等也有缺陷。因此，需要認真研究水楊酸在藥物中的特性，分析比較得出更好的方法和參數，使得鞣柳硼三酸外用制劑的療效得到更好的保證。
發明內容
本發明的目的是提供一種鞣柳硼三酸散的檢測方法。在現有技術的基礎上，増加了水楊酸的液相色譜鑒別方法，另外在水楊酸的高效液相色譜含量測定法中，優化供試品溶液的配制方法以及展開劑的選擇，以達到準確有效地檢測出制劑中所含有的有效成分的目的。本發明是這樣構成的鞣柳硼三酸散的檢測方法，所述檢測方法為性狀、檢查、鑒別以及含量測定項目；其中鑒別分為定性鑒別，以水楊酸對照品為對照、以甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相的高效液相色譜鑒別；含量測定是以水楊酸對照品為對照，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相，照中國藥典2010版二部附錄V D高效液相色譜法測定制劑中水楊酸的含量。具體的鑒別方法為
(I)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為O. 2-0. 4%的水溶液8_12ml，加1%明膠溶液2 3滴，生成乳白色沉淀；(2)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致；(3)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為2-4%的水溶液2-4滴，滴于姜黃試紙上即顯橘紅色，干燥后顯櫻紅色，用氨試液濕潤即變為綠黑色。更具體的鑒別方法為(I)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為O. 2%的水溶液10ml，加I %明膠溶液2 3滴，生成乳白色沉淀；(2)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致； (3)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為2%的水溶液2滴，滴于姜黃試紙上即顯橘紅色，干燥后顯櫻紅色，用氨試液濕潤即變為綠黑色。具體的含量測定方法為照高效液相色譜法中國藥典2010年版二部附錄V D測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相；檢測波長為305nm，理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于3000 ；測定法稱取約相當于水楊酸O. 075-0. Ig的鞣柳硼三酸散，置50ml量瓶中，加こ醇30-50ml，超聲5-20分鐘，放冷，用こ醇稀釋至刻度，搖勻；量取l_3ml，置50ml量瓶中，用こ醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量,稱定,加こ醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含O. 04-0. 08mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得。更加具體的含量測定方法為照高效液相色譜法中國藥典2010年版二部附錄V D測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇0.4%磷酸溶液=60 40為流動相；檢測波長為305nm，理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于3000 ；測定法精密稱取約相當于水楊酸O. 075g的鞣柳硼三酸散，置50ml量瓶中，加こ醇40ml，超聲10分鐘，放冷，用こ醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml，置50ml量瓶中，用こ醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液ΙΟμΙ，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量,稱定,加こ醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含O. 06mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得。本發明散劑中，含水楊酸(C7H6O3)應為標示量的90. 0% 110. 0%。為了確保本發明有效，其檢測方法科學、合理、可靠，申請人對試品的專屬性、系統適用性、線性關系、精密度、穩定性、重復性、加樣回收率、耐用性等方面進行了一系列的試驗研究，主要的試驗資料如下實驗例鞣柳硼三酸散中水楊酸的高效液相色譜法鑒別及含量測定研究I、儀器與試藥儀器戴安P680 高效液相色譜儀，Agilent TC-C18 (2) 5 μ m4. 6_X 250mm 柱號518925-902，島津UV1700紫外分光光度計；賽多利斯CPA22 電子天平，精度為十萬分之
O試劑與試藥水楊酸對照品，中國藥品生物制品檢定所，批號100106-200303 ;鞣
柳硼三酸散供試品，貴州神奇制藥有限公司生產。甲醇色譜純，磷酸分析純，こ醇分析純。2、色譜條件的選擇及系統適用性試驗2. I流動相的選擇取同一批號的樣品按供試品制備方法制成供試液，分別以甲醇-O. 4%磷酸溶液、甲醇-O. 5%冰醋酸溶液、O. 05mol/L磷酸ニ氫鈉緩沖液(pH2. 6)-こ腈溶液為流動相對樣品中水楊酸進行測定，試驗結果見表I。 表I流動相對含量測定的影響
流動相出峰時間峰形水楊酸含量(mg/g)
甲醇-0.4%磷酸7.7分鐘左右峰形對稱379.60甲醇-0.5%冰醋酸10分鐘Ai右峰拖尾381.680.05mol/L磷酸ニ氫鈉緩
10分鐘左右峰拖尾372.51
沖液(pH2.6)-乙腈試驗結果表明上述三種流動相對含量測定結果無顯著影響，但以甲醇-O. 4%磷酸溶液為流動相得峰形對稱，出峰時間較早，故選擇甲醇-O. 4%的磷酸溶液為本品含量測定用流動相。2. 2色譜條件及系統適用性試驗采用C184. 6X250mm色譜柱，經過試驗以甲醇O. 4%磷酸溶液=60 40為流動相，流速I. Oml/min,檢測波長為305nm，柱溫為25°C，測定效果較好。紫外吸收光譜表明水楊酸在305nm附近有最大吸收,選定305nm為檢測波長。按上述色譜條件測定制劑中水楊酸的含量，水楊酸峰拖尾因子、分離度符合要求。理論板數不低于3000。3、專屬性試驗及樣品液相鑒別按照已知的鞣柳硼三酸散的制備方法，制備缺水楊酸的陰性樣品，按上述色譜條件檢測，陰性樣品在相應位置應未見吸收峰；測定樣品中水楊酸峰的保留時間，應與對照品溶液中水楊酸峰的保留時間一致。4、試驗用溶液的制備4. I對照品溶液的制備精密稱取水楊酸對照品15. 48mg，批號100106-200303，置25ml容量瓶中，用こ醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成每Iml中含O. 6192mg的對照品濃配液；精密量取上述對照品濃配液I. Oml，置IOml量瓶中，用こ醇稀釋至刻度，搖勻，制成每Iml中含O. 06192mg的對照
品溶液。4. 2超聲時間考察對供試品溶液的制備超聲時間進行了考察，比較了超聲10分鐘、20分鐘、30分鐘的提取效果。試驗結果見表2。表2超聲時間對含量測定的影響
權利要求
1.一種外用抗真菌藥的檢測方法，所述外用抗真菌藥為鞣柳硼三酸散，其特征在于所述檢測方法為性狀、檢查，以及鑒別、含量測定項目；其中鑒別分為定性鑒別，以水楊酸對照品為對照、以甲醇0.4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相的高效液相色譜鑒別；含量測定是以水楊酸對照品為對照，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇0. 4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相，照中國藥典2010版二部附錄V D高效液相色譜法測定制劑中水楊酸的含量。
2.根據權利要求I所述的外用抗真菌藥的檢測方法，其特征在于鑒別方法為 (1)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為0.2-0. 4%的水溶液8-12ml，加I %明膠溶液2 3滴，生成乳白色沉淀； (2)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致； (3)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為2-4%的水溶液2-4滴，滴于姜黃試紙上即顯橘紅色，干燥后顯櫻紅色，用氨試液濕潤即變為綠黑色。
3.根據權利要求2所述的外用抗真菌藥的檢測方法，其特征在于 鑒別方法為(1)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為0. 2%的水溶液10ml，加1%明膠溶液2 3滴，生成乳白色沉淀； (2)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致； (3)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為2%的水溶液2滴，滴于姜黃試紙上即顯橘紅色，干燥后顯櫻紅色，用氨試液濕潤即變為綠黑色。
4.根據權利要求I所述的外用抗真菌藥的檢測方法，其特征在于含量測定方法為 照高效液相色譜法中國藥典2010年版二部附錄V D測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇0.4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相；檢測波長為305nm，理論塔板數按水楊酸峰計算應不低 于 3000 ； 測定法稱取約相當于水楊酸0. 075-0. Ig的鞣柳硼三酸散，置50ml量瓶中，加乙醇30-50ml，超聲5-20分鐘，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；量取l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 yl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量,稱定,加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含0. 04-0. 08mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得。
5.根據權利要求4所述的外用抗真菌藥的檢測方法，其特征在于含量測定方法為 照高效液相色譜法中國藥典2010年版二部附錄V D測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇0.4%磷酸溶液=60 40為流動相；檢測波長為305nm，理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于3000 ； 測定法精密稱取約相當于水楊酸0. 075g的鞣柳硼三酸散，置50ml量瓶中，加乙醇40ml，超聲10分鐘，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 Ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量,稱定,加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含0. 06mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得。
6.根據權利要求I所述的外用抗真菌藥的檢測方法，其特征在于所述檢測方法為 性狀本品為淡黃色粉末；具特殊刺激臭，水溶液顯酸性反應； 鑒別⑴取鞣柳硼三酸散制成的重量比為0. 2-0. 4%的水溶液8-12ml，加1%明膠溶液2 3滴，生成乳白色沉淀； (2)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致； (3)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為2-4%的水溶液2-4滴，滴于姜黃試紙上即顯橘紅色，干燥后顯櫻紅色，用氨試液濕潤即變為綠黑色； 檢查最低裝量應符合中國藥典2010年版二部附錄XF的規定； 其他除水分外，應符合中國藥典2010年版二部附錄關于散劑項下有關的各項規定； 含量測定 照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇0.4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相；檢測波長為305nm，理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于 3000 ； 測定法稱取約相當于水楊酸0. 075-0. Ig的鞣柳硼三酸散，置50ml量瓶中，加乙醇30-50ml，超聲5-20分鐘，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；量取l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 yl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量,稱定,加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含0. 04-0. 08mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； 本發明鞣柳硼三酸散中，含水楊酸(C7H6O3)應為標示量的90. 0% 110. 0%。
7.根據權利要求6所述的外用抗真菌藥的檢測方法，其特征在于所述檢測方法為 性狀本品為淡黃色粉末；具特殊刺激臭，水溶液顯酸性反應； 鑒別⑴取鞣柳硼三酸散制成的重量比為0. 2%的水溶液10ml，加I %明膠溶液2 3滴，生成乳白色沉淀； (2)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致； (3)取鞣柳硼三酸散制成的重量比為2%的水溶液2滴，滴于姜黃試紙上即顯橘紅色，干燥后顯櫻紅色，用氨試液濕潤即變為綠黑色； 檢查最低裝量應符合中國藥典2010年版二部附錄XF的規定； 其他除水分外，應符合中國藥典2010年版二部附錄關于散劑項下有關的各項規定； 含量測定 照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇0.4%磷酸溶液=60 40為流動相；檢測波長為305nm，理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于3000 ；測定法精密稱取約相當于水楊酸0. 075g的鞣柳硼三酸散，置50ml量瓶中，加乙醇40ml，超聲10分鐘，放冷，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；精密量取2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 yl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量,稱定,加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含0. 06mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； 本發明鞣柳硼三酸散中，含水楊酸(C7H6O3)應為標示量的90. 0% 110. 0%。
全文摘要
本發明公開了一種外用抗真菌藥的檢測方法，所述外用抗真菌藥為鞣硼三酸散，所述檢測方法為性狀、檢查、鑒別以及含量測定項目；其中鑒別分為定性鑒別，以水楊酸對照品為對照的高效液相色譜鑒別；含量測定是對以水楊酸對照品為對照，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇0.4％磷酸溶液＝50～7030～50為流動相測定制劑中水楊酸的含量，本發明科學合理，準確性高，可行性強，提高了鞣柳硼三酸制劑的穩定性，可有效地控制藥品的質量，從而保證臨床效果和用藥安全。
文檔編號G01N30/88GK102662023SQ201210167260
公開日2012年9月12日 申請日期2012年5月25日 優先權日2012年5月25日
發明者張濤濤, 張芝庭 申請人:貴州神奇藥業股份有限公司