專利名稱：中藥余甘子全時段三波長融合同時測定三種成分含量的方法
技術領域：
本發明屬于采用現代分析檢測手段和信息處理手段對中藥材的質量進行檢測的技術領域，涉及ー種中藥材多指標成分的含量控制方法，更具體的說是ー種中藥余甘子全時段三波長融合同時測定三種成分含量的方法。
背景技術：
據中華人民共和國藥典2010年版一部記載本品為大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果實,冬季至春果實成熟時采收,除去雜質,干燥。余甘子始載于《南方草木狀》。余甘子味甘、寒、無毒，用于清熱腫毒，利咽潤肺，化痰止咳，生津止渴。余甘子主治血病、赤巴病、培根病，肝病，心臟病和高血壓病，以治療血熱血瘀引起的血病為長。近年研究表明余甘子具有抗氧化，抗癌，抗病毒，降血脂等作用。余甘子主產于 云南，四川,廣東,廣西。余甘子主要含有鞣質類、黃酮類、多糖和維生素C，鞣質類主要為沒食子酸、訶子酸、訶黎勒酸、訶子裂酸、鞣花酸、表兒茶素等；黃酮類主要為槲皮素、山奈酚、蘆丁等；多糖為D-葡萄糖、D-果糖、蔗糖等。隨著科學技術的發展，現代先進分析檢測儀器的普遍使用以及信息處理技術的逐步完善，使中藥分析檢測水平有了顯著提高，中藥質量控制方法得到不斷改進。近年來通過建立HPLC圖譜對中藥材指標成分進行含量測定成為中藥質量控制和評價的ー種發展趨勢。中藥HPLC圖譜是指某些中藥材或中成藥經過適當處理后，利用現代信息采集技術和質量分析手段得到的能夠顯現中藥材或中成藥化學特征的光譜圖或色譜圖。由于在三個不同色譜條件下使用不同的前處理方法對余甘子中沒食子酸、表兒茶素和鞣花酸分別進行檢測是無法實現對余甘子藥材進行全面和整體評價的，因此，遵循信息最大化原則建立全時段三波長融合同時測定中藥余甘子三種指標成分含量可以獲取一種較為有效的質量控制方法，從而保證余甘子藥材質量的安全、穩定和可靠。余甘子藥材在中藥材中占有十分重要的地位。目前，市售的余甘子藥材質量參差不齊，因此余甘子藥材的穩定性難以保證。2010版中國藥典規定的含量測定本品按干燥品計算，含沒食子酸(C7H6O5)不得少于I. 2%。
發明內容
本發明目的在于采用現代分析檢測手段和信息處理手段建立余甘子藥材全時段三波長融合HPLC圖譜技術，及其中三個指標成分的含量測定方法，以確保余甘子藥材的質量控制方法更加簡便、合理、可靠。本發明是通過以下技術方案實現的中藥余甘子全時段三波長融合同時測定三種成分含量的方法，其特征在于包括下步驟(I)供試品溶液的制備取余甘子藥材(過16目篩)約3_5g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入70%こ醇33mL，加熱回流1_2小時，提取三次，回收合并濾液，加水定容至20ml，使溶液終濃度為O. 15g/ml，精密吸取續濾液17mL，加在聚酰胺樹脂柱上，用蒸餾水90mL洗滌，再用105mL 50%こ醇洗脫，收集こ醇洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉移至IOmL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；(2)對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品、表兒茶素對照品、鞣花酸對照品和槲皮素對照品適量，加甲醇分別制成每ImL含沒食子酸對照品O. 44mg、表兒茶素對照品O. 1495mg和鞣花酸對照品O. 03775mg,即得；(3)色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基鍵合硅膠為填充劑的AgilentTC-C18 (4. 6mmX 250 mm, 5 μ m)色譜柱；以O. 2%磷酸水為流動相A，以こ腈為流動相B，進行梯度洗脫；流速I. OmL/min ;柱溫35°C ；DAD檢測器在波長230nm、254nm和280nm下同時進行檢測；進樣量5 μ L ;理論塔板數計算，應不低于3000 ；
(4)全時段三波長融合采用多波長融合HPLC圖譜技術將230nm、254nm和280nm三個波長下的譜圖數據進行全時段融合，得到ー張能夠同時包含三個波長信息的色圖譜。(5)樣品含量測定應用融合后的HPLC圖譜數據，計算樣品中三種指標成分的含量。(6)對上述確定的含量測定方法進行有效性評價，其中包括專屬性、準確度、精密度、重復性、穩定性、線性范圍以及耐用性。本發明所述的中藥余甘子全時段三波長融合同時測定三種成分含量的方法與現有的中國藥典規定的測定方法相比所具有的積極效果在于(I)本發明首次公開通過建立余甘子藥材全時段三波長融合HPLC圖譜并對其指標成分進行含量測定的方法，此方法對同一樣品不同成分多波長同時定量分析，從而完善了余甘子藥材質量控制方法。(2)本發明采用現代先進分析檢測技術，對余甘子藥材三個指標成分進行分析檢測，從而獲得極其豐富的信息量。(3)本發明通過信息處理手段將余甘子藥材三波長下的色譜圖進行全時段融合，在保證數據信息損失最小的前提下，獲得ー張同時反應三個波長信息的色譜圖。(4)本發明的三種指標成分含量控制方法，其優點是操作簡單，穩定可靠，精密度、重復性、回收率均達到定量分析要求，能夠綜合宏觀地分析余甘子藥材的質量。(5)本發明通過建立余甘子藥材全時段三波長融合HPLC圖譜，對余甘子藥材中的ニ類成分進行定性和定量分析，較全面真實地掲示余甘子藥材的內在質量特征，從而保證了余甘子藥材的安全、有效、可靠、穩定，確保了其質量的均衡穩定和エ藝的規范化。
圖I是230nm波長下對照品沒食子酸、表兒茶素和鞣花酸的HPLC色譜圖。圖2是254nm波長下對照品沒食子酸、表兒茶素和鞣花酸的HPLC色譜圖。圖3是280nm波長下對照品沒食子酸、表兒茶素和鞣花酸的HPLC色譜圖。圖4是沒食子酸的紫外掃描圖。圖5是表兒茶素的紫外掃描圖。圖6是鞣花酸的紫外掃描圖。
圖7是余甘子藥材230nm波長下HPLC色譜圖。圖8是余甘子藥材254nm波長下HPLC色譜圖。圖9是余甘子藥材280nm波長下HPLC色譜圖。圖10是余甘子藥材全時段多波長融合的色譜圖。
具體實施例方式中藥余甘子全時段三波長融合同時測定三種成分含量的方法，包括下述步驟I、供試品溶液的制備取余甘子藥材(過16目篩)3g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入70%こ醇33mL，加熱回流1.5小時，提取三次，回收合并濾液，加水定容至20ml，使溶液終濃度為 O. 15g/ml，精密吸取續濾液17mL，加在聚酰胺樹脂柱上，用蒸餾水90mL洗滌，再用105mL50%こ醇洗脫，收集こ醇洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉移至IOmL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；2、色譜條件與適應性試驗用十八烷基鍵合硅膠為填充劑的AgilentTC-C18 (4. 6mmX 250 mm, 5 μ m)色譜柱；以O. 2%磷酸水為流動相A，以こ腈為流動相B，進行梯度洗脫，流速I. OmL/min ;柱溫35°C ；DAD檢測器在波長230nm、254nm和280nm下同時進行檢測；進樣量5μ L ;理論塔板數計算，應不低于3000 ；表I流動相梯度洗脫表
時間(min)流動相A (%)流動相B (%)
O973
9973
11928
408614
607525
706040本發明所述的余甘子藥材3種成分含量控制方法，由分析檢測儀器得到230nm、254nm、280nm三個波長下的譜圖數據，運用信息處理手段全時段融合三個波長下的譜圖數據，得到ー張能夠同時包含三個波長信息的色圖譜。本發明所述的余甘子藥材3種成分含量控制方法,將230nm、254nm、280nm三個波長下的譜圖數據全時段融合后可獲得ー組譜圖數據。其中指紋圖譜數據見表2表2融合峰圖譜數據
jj序I保留時間I峰高 I峰面積
1:10. 554 309. 1344 7051. 687
2:36.494 137.2737 3011.118
3J54. 50067 1117. 2189〔1999.186 '
本發明所述的余甘子藥材質量控制方法，得到的HPLC圖譜數據，可以用于余甘子 藥材指標成分的定量分析。
權利要求
1.中藥余甘子全時段三波長融合同時測定三種成分含量的方法，其特征在于包括下述步驟(1)供試品溶液的制備取余甘子藥材(過16目篩)約3g，精密稱定，置圓底燒瓶中，精密加入70%乙醇33mL，加熱回流I. 5小時，提取三次，回收合并濾液，加水定容至20ml，使溶液終濃度為O. 15g/ml，精密吸取續濾液17mL，加在聚酰胺樹脂柱上，用蒸餾水90mL洗滌，再用105mL 50%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉移至IOmL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得；(2)對照品溶液的制備精密稱取沒食子酸對照品、表兒茶素對照品和鞣花酸對照品適量，加甲醇分別制成每ImL含沒食子酸對照品O. 44mg、表兒茶素對照品O. 1495mg和鞣花酸對照品O. 03775mg,即得；(3)色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基鍵合硅膠為填充劑的AgilentTC-C18色譜柱；色譜柱規格為4. 6mmX 250 mm, 5 μ m ;以O. 2%磷酸水為流動相A，以乙腈為流動相B，按表I中的規定進行梯度洗脫；流速I. OmL/min ;柱溫35°C;DAD檢測器在波長230nm、254nm和280nm下同時進行檢測；進樣量5μ L ;理論塔板數計算，應不低于3000 ； 流動相梯度洗脫技術參數為
全文摘要
本發明公開了全時段三波長融合同時測定中藥余甘子三種成分含量的方法，它是將現代分析檢測手段和信息處理手段結合起來，有效融合中藥材指標成分的譜圖信息，所測成分均為最大紫外吸收波長，增大檢測成分的信噪比，可以克服單一波長單一指標檢測時信息量不足的缺點，從而較完善地反映中藥材的內在質量。本發明的三種成分質量控制方法操作簡單、穩定可靠、重現性較好，可用于中藥材質量評價和控制及中藥新藥研發中。特別是可將其作為余甘子藥材質量控制及真偽鑒別的指標之一。
文檔編號G01N30/02GK102818862SQ201210159078
公開日2012年12月12日 申請日期2012年5月22日 優先權日2012年5月22日
發明者孟憲生, 張云坤, 王飛, 包永睿, 王帥 申請人:遼寧中醫藥大學