專利名稱：復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法
技術領域：
本發明涉及復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，屬于中藥質量檢測技術領域。
背景技術：
復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑由復方珊瑚姜溶 液和尿素咪康唑軟膏組成，主要用于治療手足癬、甲癬等，質量標準收載于化學藥品地方標準上升國家標準(第四冊)，標準號WS-10001-(HD-0360)-2002。本發明人經過研究發現，現有的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑質量標準中，水楊酸含量測定為滴定分析法，取樣量小，消耗的氫氧化鈉量滴定液的量較少，測定結果誤差大；而且現行標準中存在水楊酸干擾，需要一定的方法將其消除。另外，中國專利申請CN200710200837. 0(公布日期2008年I月9日)和CN200710200207. 3(公布日期2007年8月8日)公開了“治療腳手癬、灰指甲的中西復方制劑及其制備方法和質控方法”，其中在對復方珊瑚姜溶液的質量檢測中，鑒別是對冰片、姜黃的薄層色譜鑒別，含量測定是采用高效液相色譜法對制劑中水楊酸和冰片的含量測定。在進一步研究中，我們發現，珊瑚姜是復方珊瑚姜溶液中的主要藥用成分，但現有檢測方法并沒有對其有效成分姜黃素進行含量測定，另外對尿素咪康唑軟膏中的另一藥用成分硝酸咪康唑也未進行含量測定；另外，未對制劑中水楊酸、硝酸咪康唑進行鑒別，在進行姜黃的薄層色譜鑒別時，供試品溶液的配制以及展開劑的選擇不甚理想，導致顯色不夠清晰，辨別不夠準確；同時，對冰片、姜黃僅采用薄層色譜鑒別，不足以更有效更快捷地對產品質量進行控制；這將在產品的生產和流通環節等造成影響，形成產品質量隱患。隨著社會的發展，對于藥品的質量控制的要求越來越高，而且對于尋找快捷方便可控的檢測方法的需求也越來越迫切，藥品如果沒有嚴格的質量標準，得到的產品質量可靠性不高，其治療效果也不一定明顯。因此，為了提高藥物的治療作用，效地控制藥物的質量，確保用藥的安全，制定更高效、更嚴格可靠的質量檢測方法來保證藥品質量，是藥學工作者進行藥物質量研究的方向和追求。為全面有效控制制劑的質量，保證療效，我們提出復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，在現有技術的基礎上，增加對姜黃素、硝酸咪康唑的含量測定，采用高效液相色譜法測定其含量，其方法專屬、可行，重現性好，保證了質量檢測標準的準確性和先進性；另外增加了對姜黃素、水楊酸、以及硝酸咪康唑的高效液相色譜鑒別方法，對冰片的氣象色譜鑒別方法；在姜黃的薄層色譜鑒別項下，優化了供試品溶液的配制方法以及展開劑的選擇，以達到準確有效地檢測出制劑中所含有的有效成分的目的。該檢測方法精密度、靈敏度、穩定性均好，確保產品質量的“均一、穩定、有效、可控”，能夠有效地控制復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的質量
發明內容
本發明的目的在于提供復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法。本發明所述的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑即市售產品，由復方珊瑚姜溶液和尿素咪康唑軟膏組成。本發明是通過以下技術方案來實現的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，所述檢測方法為性狀、檢查，以及鑒別、含量測定項目；其中鑒別分為定性鑒別，以姜黃對照藥材為對照的薄層色譜鑒別，以及以水楊酸對照品、姜黃素對照品、硝酸咪康唑對照品為對照的高效液相色譜鑒另O、以冰片對照品為對照的氣象色譜鑒別；含量測定是對制劑中所含姜黃素、水楊酸、冰片以及尿素、硝酸咪康唑的含量測定。其中，鑒別方法為冰片的鑒別方法是以冰片對照品為對照，以鍵合交聯聚乙二醇20000為固定相的氣相色譜法；姜黃的鑒別方法是以姜黃對照藥材為對照，以三氯甲烷 甲醇甲酸= 70-99 1-29 O. 1-1為展開劑的薄層色譜法；珊瑚姜的鑒別方法是以姜黃素對照品為對照，以乙腈O. 4%磷酸溶液=35 55 65 45為流動相的高效液相色譜鑒別法；水楊酸的鑒別方法是以甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相高效液相色譜鑒別法；硝酸咪康唑的鑒別方法是以硝酸咪康唑對照品為對照，以甲醇O. 35%磷酸溶液=70 90 30 10為流動相的高效液相色譜鑒別法；含量測定方法為復方珊瑚姜溶液的含量測定方法是分別以姜黃素對照品、水楊酸對照品為對照，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，照中國藥典2010版二部附錄V D高效液相色譜法測定制劑中姜黃素、水楊酸、冰片的含量；以冰片對照品，以鍵合交聯聚乙二醇20000為固定相，中國藥典2010版二部附錄VE氣相色譜法測定制劑中冰片的含量；尿素咪康唑軟膏的含量測定方法是以硝酸咪康唑對照品為對照，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，照中國藥典2010版二部附錄VD高效液相色譜法測定制劑中硝酸咪康唑的含量；以尿素對照品為對照，照中國藥典2010版二部附錄IV A紫外-可見分光光度法測定尿素的含量。具體的鑒別方法為(I)取本品2-10ml，升華后，升華物滴加香草醛硫酸溶液，即顯紫堇色。(2)取本品5_20ml，置蒸發皿中水浴蒸干，殘渣用體積比為20%的二乙胺水溶液5-20ml使溶解，轉入分液漏斗中，用乙醚振搖提取2-4次，每次5_20ml，分取乙醚液，水浴蒸干，殘渣用無水乙醇O. 5-2ml使溶解，再揮至約O. 2-0. 7ml，作為供試品溶液。另取姜黃對照藥材O. 3-0. 8g,加無水乙醇5-20ml冷浸,濾過,濾液水浴蒸干,殘洛同法處理作為對照藥材溶液。照中國藥典2010年版二部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ I、對照藥材溶液5μ 1，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇甲酸= 70-99 1-29 O. 1-1為展開劑，置于展開劑飽和的層析缸內，展開，取出，晾干，置波長為365nm的紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；噴以硫酸，日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)在姜黃素含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中姜黃素峰的保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致；(4)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰的保留時間應與對照品溶液中水楊酸峰保留時間一致；
(5)在冰片含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中冰片峰的保留時間應與對照品溶液中冰片峰保留時間一致。(6)取尿素含量測定項下供試品溶液2 3ml，加鹽酸I滴，搖勻后，加10%咕噸氫醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解；(7)在硝酸咪康唑含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中硝酸咪康唑峰的保留時間應與對照品溶液中硝酸咪康唑峰保留時間一致；更加具體的鑒別方法為(I)取本品5ml，升華后，升華物滴加香草醛硫酸溶液，即顯紫堇色。(2)取本品10ml，置蒸發皿中水浴蒸干，殘渣用體積比為20%的二乙胺水溶液IOml使溶解，轉入分液漏斗中，用乙醚振搖提取三次，每次10ml，分取乙醚液，水浴蒸干，殘渣用無水乙醇Iml使溶解，再揮至約O. 5ml，作為供試品溶液。另取姜黃對照藥材O. 5g， 加無水乙醇IOml冷浸，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣同法處理作為對照藥材溶液。照中國藥典2010年版二部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ I、對照藥材溶液5 μ 1，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇甲酸=96 4 O. 7為展開劑，置于展開劑飽和的層析缸內，展開，取出，晾干，置波長為365nm的紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；噴以硫酸，日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)在姜黃素含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中姜黃素峰的保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致；(4)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰的保留時間應與對照品溶液中水楊酸峰保留時間一致；(5)在冰片含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中冰片峰的保留時間應與對照品溶液中冰片峰保留時間一致；(6)取尿素含量測定項下供試品溶液2 3ml，加鹽酸I滴，搖勻后，加10%咕噸氫醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解；(7)在硝酸咪康唑含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中硝酸咪康唑峰的保留時間應與對照品溶液中硝酸咪康唑峰保留時間一致。具體的含量測定方法為(I)水楊酸照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相；檢測波長為305nm。理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于3000 ；測定法量取本品l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；再量取O. 5-2ml，置IOml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量續濾液取10μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中約含O. 03-0. 09mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得；(2)冰片照中國藥典2010年版二部附錄VE氣相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗以鍵合交聯聚乙二醇20000為固定相的毛細管柱，柱長30m，內徑為O. 25mm，膜厚為O. 5um;柱溫為130°C ;理論版數按龍腦峰計算不低于10000 ；校正因子的測定取水楊酸甲酯適量，加乙酸乙酯溶解并稀釋制成每Iml中含2-4mg的溶液，作為內標溶液；另稱取冰片對照品10-30mg，稱定，置50ml量瓶中，加入內標溶液5-20ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，吸取1μ I注入氣相色譜儀，測定，計算校正因子；測定法量取本品l_3ml，置50ml容量瓶中，再加入內標溶液5_20ml，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，作為供試品溶液；吸取I μ I注入氣相色譜儀，測定，冰片以龍腦峰、異龍腦峰面積之和計算，即得；(3)姜黃素照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈O. 4%磷 酸溶液=35 55 65 45為流動相；檢測波長為440nm，理論塔板數按姜黃素峰計算應不低于3000 ；測定法量取本品l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，量取續濾液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取姜黃素對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含5-20 μ g的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得；(4)硝酸咪康唑照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 35%磷酸溶液=70 90 30 10為流動相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺調pH至3. 2±0.2 ;檢測波長為230nm，理論塔板數按硝酸咪康唑峰計算應不低于3000 ；測定法取本品適量，稱定為約相當于硝酸咪康唑2_8mg，置IOOml量瓶中，加體積比三氯甲烷甲醇=1 120-60ml，置熱水浴中，加熱使溶解后，放冷，用體積比三氯甲烷甲醇=1 I稀釋至刻度，搖勻，冷凍I小時，取出，迅速濾過，待續濾液放至室溫，精密量取10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取硝酸咪康唑對照品適量，精密稱定，加體積比三氯甲烷甲醇=1 I溶解并定量稀釋制成每Iml中含O. 05-0. 2mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得；(5)尿素照中國藥典2010年版二部附錄IV A紫外-可見分光光度法測定稱取尿素對照品O. 2-0. 5g，置IOOml量瓶中，加水適量溶解后，稀釋至刻度，搖勻，量取5-20ml，移置IOOml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得每Iml含尿素O. 1-1. Omg的對照品溶液；供試品溶液的制備稱取本品O. 05-0. 2g,約相當于尿素15-60mg，置IOOml量瓶中，加水適量，置水浴上加熱，并劇烈振搖，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷卻片亥IJ，取出放至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得；測定法量取對照品溶液與供試品溶液各5_20ml，分別置25ml量瓶中，另取水5-20ml，作空白，各精密加對二甲氨基苯甲醛試液5-20ml，其中二甲氨基苯甲醛試液的制備方法為稱取對二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及鹽酸6ml溶解，即得；用水稀釋至刻度，搖勻，放置暗處15分鐘，在420nm波長處分別測定吸收度，計算即得。更加具體的含量測定方法為(I)水楊酸照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 4%磷酸溶液=60 40為流動相；檢測波長為305nm。理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于3000 ；
測定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；再精密量取lml，置IOml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量續濾液取10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中約含O. 06mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得；(2)冰片照中國藥典2010年版二部附錄VE氣相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗以鍵合交聯聚乙二醇20000為固定相的毛細管柱，柱長30m，內徑為O. 25mm，膜厚為O. 5um ;柱溫為130°C;理論版數按龍腦峰計算不低于10000 ；校正因子的測定取水楊酸甲酯適量，加乙酸乙酯溶解并稀釋制成每Iml中含3mg的溶液，作為內標溶液；另稱取冰片對照品約20mg，精密稱定，置50ml量瓶中，精密加入內標溶液10ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，吸取1μ I注入氣相色譜儀，測定，計算校正因子； 測定法精密量取本品2ml，置50ml容量瓶中，再精密加入內標溶液10ml，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，作為供試品溶液；吸取 μ I注入氣相色譜儀，測定，冰片以龍腦峰、異龍腦峰面積之和計算，即得；(3)姜黃素照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈0.4%磷酸溶液=45 55為流動相；檢測波長為440nm，理論塔板數按姜黃素峰計算應不低于3000 ；測定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取姜黃素對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中約含10 μ g的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得;(4)硝酸咪康唑照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 35%磷酸溶液=80 20為流動相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺調pH至3. 2±0. 2 ;檢測波長為230nm，理論塔板數按硝酸咪康唑峰計算應不低于3000 ；測定法取本品適量，精密稱定為約相當于硝酸咪康唑5mg，置IOOml量瓶中，加體積比三氯甲烷甲醇=I I約40ml，置熱水浴中，加熱使溶解后，放冷，用體積比三氯甲烷甲醇=1 I稀釋至刻度，搖勻，冷凍I小時，取出，迅速濾過，待續濾液放至室溫，精密量取10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取硝酸咪康唑對照品適量，精密稱定，加體積比三氯甲烷甲醇=1 I溶解并定量稀釋制成每Iml中約含O. Img的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得；(5)尿素照中國藥典2010年版二部附錄IV A紫外-可見分光光度法測定精密稱取尿素對照品O. 3g，置IOOml量瓶中，加水適量溶解后，稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，移置IOOml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含尿素O. 3mg ;供試品溶液的制備精密稱取本品O. lg，約相當于尿素30mg，置IOOml量瓶中，加水適量，置水浴上加熱，并劇烈振搖，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷卻片刻，取出放至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得；測定法精密量取對照品溶液與供試品溶液各10ml，分別置25ml量瓶中，另取水10ml，作空白，各精密加對二甲氨基苯甲醛試液10ml，其中二甲氨基苯甲醛試液的制備方法為稱取對二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及鹽酸6ml溶解，即得；用水稀釋至刻度，搖勻，放置暗處15分鐘，在420nm波長處分別測定吸收度，計算即得。為了確保本發明有效，其質量檢測方法科學、合理、可靠，申請人進行了一系列的試驗研究，主要的試驗資料如下實驗例I :復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑中姜黃素的高效液相色譜法鑒別及含量測定研究I. I儀器與試藥儀器戴安P680 高效液相色譜儀，Agilent TC-C18 (2) 5 μ m 4. 6mmX 250mm,島津UV1700紫外分光光度計；賽多利斯CPA22 電子天平，精度為十萬分之一。試劑與試藥姜黃素對照品，中國藥品生物制品檢定所，批號110823-200603 ;復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑樣品為本公司生產產品。乙腈色譜純，磷酸分析純，乙醇分析純。I. 2方法與結果I. 2. I實驗用溶液的制備供試品溶液的制備精密量取樣品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得供試品溶液；對照品溶液的制備精密稱取經五氧化二磷干燥24小時的姜黃素對照品15. 19mg，批號110823-200603，置25ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，制成每Iml含O. 6076mg的對照品濃配液；精密量取上述對照品濃配液1ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，制成每Iml含12. 1520 Ug的對照品溶液。I. 2. 2色譜條件的選擇及系統適用性試驗A :流動相的選擇取同一批號的樣品按前述供試品溶液的制備方法制成供試液，分別以乙腈4%冰醋酸溶液=45 55、乙腈0.2%磷酸溶液=45 55，其中磷酸溶液中含O. 2%三乙胺、乙腈O. 4%磷酸溶液=45 55為流動相對樣品中姜黃素進行測定，試驗結果見表I。表I :流動相對含量測定的影響
權利要求
1.復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，其特征在于所述檢測方法為性狀、檢查，以及鑒別、含量測定項目；其中鑒別分為定性鑒別，以姜黃對照藥材為對照的薄層色譜鑒別，以水楊酸對照品、姜黃素對照品、硝酸咪康唑對照品為對照的高效液相色譜鑒別；以冰片對照品為對照的氣象色譜鑒別；含量測定是對制劑中所含姜黃素、水楊酸、冰片以及尿素、硝酸咪康唑的含量測定。
2.根據權利要求I所述的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，其特征在于冰片的鑒別方法是以冰片對照品為對照，以鍵合交聯聚乙二醇20000為固定相的氣相色譜法；姜黃的鑒別方法是以姜黃對照藥材為對照，以三氯甲烷甲醇甲酸=70 99 : I 29 : O. I I為展開劑的薄層色譜法；珊瑚姜的鑒別方法是以姜黃素對照品為對照，以乙腈O. 4%磷酸溶液=35 55 65 45為流動相的高效液相色譜鑒別法；水楊酸的鑒別方法是以甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相高效液相色譜鑒別法；硝酸咪康唑的鑒別方法是以硝酸咪康唑對照品為對照，以甲醇O. 35%磷酸溶液=70 90 30 10為流動相的高效液相色譜鑒別法。
3.根據權利要求I所述的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，其特征在于復方珊瑚姜溶液的含量測定方法是分別以姜黃素對照品、水楊酸對照品為對照，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，照中國藥典2010版二部附錄V D高效液相色譜法測定制劑中姜黃素、水楊酸、冰片的含量；以冰片對照品，以鍵合交聯聚乙二醇20000為固定相，中國藥典2010版二部附錄VE氣相色譜法測定制劑中冰片的含量；尿素咪康唑軟膏的含量測定方法是以硝酸咪康唑對照品為對照，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，照中國藥典2010版二部附錄V D高效液相色譜法測定制劑中硝酸咪康唑的含量；以尿素對照品為對照，照中國藥典2010版二部附錄IVA紫外-可見分光光度法測定尿素的含量。
4.根據權利要求I 3任一所述的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，其特征在于鑒別方法為 (1)取本品2-10ml，升華后，升華物滴加香草醛硫酸溶液，即顯紫堇色。
(2)取本品5-20ml，置蒸發皿中水浴蒸干，殘渣用體積比為20%的二乙胺水溶液5-20ml使溶解，轉入分液漏斗中，用乙醚振搖提取2-4次，每次5_20ml，分取乙醚液，水浴蒸干，殘渣用無水乙醇O. 5-2ml使溶解，再揮至約O. 2-0. 7ml，作為供試品溶液。另取姜黃對照藥材O. 3-0. Sg，加無水乙醇5-20ml冷浸，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣同法處理作為對照藥材溶液。照中國藥典2010年版二部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10μ1、對照藥材溶液5μ1，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇甲酸=70-99 1-29 O. 1-1為展開劑，置于展開劑飽和的層析缸內，展開，取出，晾干，置波長為365nm的紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；噴以硫酸，日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (3)在姜黃素含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中姜黃素峰的保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致； (4)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰的保留時間應與對照品溶液中水楊酸峰保留時間一致； (5)在冰片含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中冰片峰的保留時間應與對照品溶液中冰片峰保留時間一致。
(6)取尿素含量測定項下供試品溶液2 3ml，加鹽酸I滴，搖勻后，加10%咕噸氫醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解； (7)在硝酸咪康唑含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中硝酸咪康唑峰的保留時間應與對照品溶液中硝酸咪康唑峰保留時間一致。
5.根據權利要求4所述的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，其特征在于鑒別方法為 (1)取本品5ml，升華后，升華物滴加香草醛硫酸溶液，即顯紫堇色。
(2)取本品10ml，置蒸發皿中水浴蒸干，殘渣用體積比為20%的二乙胺水溶液IOml使溶解，轉入分液漏斗中，用乙醚振搖提取三次，每次IOml，分取乙醚液，水浴蒸干，殘渣用無水乙醇Iml使溶解，再揮至約O. 5ml，作為供試品溶液。另取姜黃對照藥材O. 5g，加無水乙醇IOml冷浸，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣同法處理作為對照藥材溶液。照中國藥典2010年版二部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ I、對照藥材溶液5 μ 1，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇甲酸=96 4 O. 7為展開劑，置于展開劑飽和的層析缸內，展開，取出，晾干，置波長為365nm的紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；噴以硫酸，日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (3)在姜黃素含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中姜黃素峰的保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致； (4)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰的保留時間應與對照品溶液中水楊酸峰保留時間一致； (5)在冰片含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中冰片峰的保留時間應與對照品溶液中冰片峰保留時間一致； (6)取尿素含量測定項下供試品溶液2 3ml，加鹽酸I滴，搖勻后，加10%咕噸氫醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解； (7)在硝酸咪康唑含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中硝酸咪康唑峰的保留時間應與對照品溶液中硝酸咪康唑峰保留時間一致。
6.根據權利要求1-3任一所述的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，其特征在于含量測定方法為 (1)水楊酸照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 4%磷酸溶液=50 70 30 50為流動相；檢測波長為305nm。理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于3000 ； 測定法量取本品l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；再量取O. 5_2ml，置IOml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量續濾液取10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中約含O. 03-0. 09mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； (2)冰片照中國藥典2010年版二部附錄VE氣相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗以鍵合交聯聚乙二醇20000為固定相的毛細管柱，柱長.30m，內徑為0. 25mm，膜厚為O. 5um ;柱溫為130°C ;理論版數按龍腦峰計算不低于10000 ； 校正因子的測定取水楊酸甲酯適量，加乙酸乙酯溶解并稀釋制成每Iml中含2-4mg的溶液，作為內標溶液；另稱取冰片對照品10-30mg，稱定，置50ml量瓶中，加入內標溶液5-20ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，吸取1μ I注入氣相色譜儀，測定，計算校正因子； 測定法量取本品l_3ml，置50ml容量瓶中，再加入內標溶液5_20ml，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，作為供試品溶液；吸取 μ I注入氣相色譜儀，測定，冰片以龍腦峰、異龍腦峰面積之和計算，即得； (3)姜黃素照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈O. 4%磷酸溶液=35 55 65 45為流動相；檢測波長為440nm，理論塔板數按姜黃素峰計算應不低于 3000 ； 測定法量取本品l_3ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，量取續濾液.10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取姜黃素對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中含5-20 μ g的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； (4)硝酸咪康唑照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 35%磷酸溶液=70 90 30 10為流動相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺調pH至3. 2±0. 2 ;檢測波長為230nm，理論塔板數按硝酸咪康唑峰計算應不低于3000 ； 測定法取本品適量，稱定為約相當于硝酸咪康唑2-8mg，置IOOml量瓶中，加體積比三 氯甲烷甲醇=1 120-60ml，置熱水浴中，加熱使溶解后，放冷，用體積比三氯甲烷甲醇=1 I稀釋至刻度，搖勻，冷凍I小時，取出，迅速濾過，待續濾液放至室溫，精密量取.10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取硝酸咪康唑對照品適量，精密稱定，加體積比三氯甲烷甲醇=I I溶解并定量稀釋制成每Irnl中含O. 05-0. 2mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； (5)尿素照中國藥典2010年版二部附錄IVA紫外-可見分光光度法測定 稱取尿素對照品O. 2-0. 5g，置IOOml量瓶中，加水適量溶解后，稀釋至刻度，搖勻，量取.5-20ml，移置IOOml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，得每Iml含尿素O. 1-1. Omg的對照品溶液；供試品溶液的制備稱取本品O. 05-0. 2g，約相當于尿素15-60mg，置IOOml量瓶中，力口水適量，置水浴上加熱，并劇烈振搖，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷卻片刻，取出放至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得； 測定法量取對照品溶液與供試品溶液各5-20ml，分別置25ml量瓶中，另取水5_20ml，作空白，各精密加對二甲氨基苯甲醛試液5-20ml，其中二甲氨基苯甲醛試液的制備方法為稱取對二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及鹽酸6ml溶解，即得；用水稀釋至刻度，搖勻，放置暗處15分鐘，在420nm波長處分別測定吸收度，計算即得。
7.根據權利要求6所述的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，其特征在于含量測定方法為 (I)水楊酸照中國藥典2010年版二部附錄V D高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 4%磷酸溶液=60 40為流動相；檢測波長為305nm，理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于3000 ；測定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；再精密量取1ml，置IOml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量續濾液取10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中約含.O. 06mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； (2)冰片照中國藥典2010年版二部附錄VE氣相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗以鍵合交聯聚乙二醇20000為固定相的毛細管柱，柱長30m，內徑為O. 25mm，膜厚為O. 5um ;柱溫為130°C ;理論版數按龍腦峰計算不低于10000 ； 校正因子的測定取水楊酸甲酯適量，加乙酸乙酯溶解并稀釋制成每Iml中含3mg的溶液，作為內標溶液；另稱取冰片對照品約20mg，精密稱定，置50ml量瓶中，精密加入內標溶液10ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，吸取1μ I注入氣相色譜儀，測定，計算校正因子； 測定法精密量取本品2ml，置50ml容量瓶中，再精密加入內標溶液10ml，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，作為供試品溶液；吸取I μ I注入氣相色譜儀，測定，冰片以龍腦峰、異龍腦峰面積之和計算，即得； (3)姜黃素照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈O. 4%磷酸溶液=45 55為流動相；檢測波長為440nm，理論塔板數按姜黃素峰計算應不低于3000; 測定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取姜黃素對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中約含10 μ g的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； (4)硝酸咪康唑照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 35%磷酸溶液=80 20為流動相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺調pH至3. 2±0. 2 ;檢測波長為.230nm,理論塔板數按硝酸咪康唑峰計算應不低于3000 ； 測定法取本品適量，精密稱定為約相當于硝酸咪康唑5mg，置IOOml量瓶中，加體積比三氯甲烷甲醇=I I約40ml，置熱水浴中，加熱使溶解后，放冷，用體積比三氯甲烷甲醇=1 I稀釋至刻度，搖勻，冷凍I小時，取出，迅速濾過，待續濾液放至室溫，精密量取.10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取硝酸咪康唑對照品適量，精密稱定，加體積比三氯甲烷甲醇=1 I溶解并定量稀釋制成每Iml中約含O. Img的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； (5)尿素照中國藥典2010年版二部附錄IVA紫外-可見分光光度法測定 精密稱取尿素對照品O. 3g，置IOOml量瓶中，加水適量溶解后，稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，移置IOOml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含尿素O. 3mg ;供試品溶液的制備精密稱取本品O. lg，約相當于尿素30mg，置IOOml量瓶中，加水適量，置水浴上加熱，并劇烈振搖，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷卻片刻，取出放至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得； 測定法精密量取對照品溶液與供試品溶液各10ml，分別置25ml量瓶中，另取水10ml，作空白，各精密加對二甲氨基苯甲醛試液10ml，其中二甲氨基苯甲醛試液的制備方法為 稱取對二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及鹽酸6ml溶解，即得；用水稀釋至刻度，搖勻，放置暗處15分鐘，在420nm波長處分別測定吸收度，計算即得。
8.根據權利要求1-3任一所述的復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，其特征在于所述質量檢測方法為 性狀 復方珊瑚姜溶液為棕黃色至黃色的澄明溶液，具有茉莉香氣，久聞有刺鼻感，易揮發；尿素咪康唑軟膏為淺黃色軟膏； 鑒別 (1)取本品5ml，升華后，升華物滴加香草醛硫酸溶液，即顯紫堇色； (2)取本品10ml，置蒸發皿中水浴蒸干，殘渣用體積比為20%的二乙胺水溶液IOml使溶解，轉入分液漏斗中，用乙醚振搖提取三次，每次IOml，分取乙醚液，水浴蒸干，殘渣用無水乙醇Iml使溶解，再揮至約O. 5ml，作為供試品溶液；另取姜黃對照藥材O. 5g，加無水乙醇IOml冷浸，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣同法處理作為對照藥材溶液。照中國藥典2010年版二部附錄VI B薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液10 μ I、對照藥材溶液5 μ 1，點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷甲醇甲酸=96 4 O. 7為展開劑，置于展開劑飽和的層析缸內，展開，取出，晾干，置波長為365nm的紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；噴以硫酸，日光下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； (3)在姜黃素含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中姜黃素峰的保留時間應與對照品溶液中主峰保留時間一致； (4)在水楊酸含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中水楊酸峰的保留時間應與對照品溶液中水楊酸峰保留時間一致； (5)在冰片含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中冰片峰的保留時間應與對照品溶液中冰片峰保留時間一致； (6)取尿素含量測定項下供試品溶液2 3ml，加鹽酸I滴，搖勻后，加10%咕噸氫醇的甲醇溶液2 3滴，即生成沉淀，加入等量的乙醇沉淀不溶解； (7)在硝酸咪康唑含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液中硝酸咪康唑峰的保留時間應與對照品溶液中硝酸咪康唑峰保留時間一致； 檢查 (1)復方珊瑚姜溶液乙醇量按中國藥典2010年版二部附錄VIIE檢測，應為65% ·75% ;應符合中國藥典2010年版二部附錄I C酊劑項下有關的各項規定； (2)尿素咪康唑軟膏應符合中國藥典2010年版二部附錄IF軟膏劑項下有關的各項規定； 含量測定 (I)水楊酸照中國藥典2010年版二部附錄V D高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 4%磷酸溶液=60 40為流動相；檢測波長為305nm。理論塔板數按水楊酸峰計算應不低于3000 ； 測定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻；再精密量取lml，置IOml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量續濾液取10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取水楊酸對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中約含·O. 06mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得；(2)冰片照中國藥典2010年版二部附錄VE氣相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗以鍵合交聯聚乙二醇20000為固定相的毛細管柱，柱長30m，內徑為O. 25mm，膜厚為O. 5um ;柱溫為130°C ;理論版數按龍腦峰計算不低于10000 ； 校正因子的測定取水楊酸甲酯適量，加乙酸乙酯溶解并稀釋制成每Iml中含3mg的溶液，作為內標溶液；另稱取冰片對照品約20mg，精密稱定，置50ml量瓶中，精密加入內標溶液10ml，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，吸取1μ I注入氣相色譜儀，測定，計算校正因子； 測定法精密量取本品2ml，置50ml容量瓶中，再精密加入內標溶液10ml，用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得，作為供試品溶液；吸取1μ I注入氣相色譜儀，測定，冰片以龍腦峰、異龍腦峰面積之和計算，即得； (3)姜黃素照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈O. 4%磷酸溶液=45 55為流動相；檢測波長為440nm，理論塔板數按姜黃素峰計算應不低于3000; 測定法精密量取本品2ml，置50ml量瓶中，用乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取姜黃素對照品適量，精密稱定，加乙醇溶解并定量稀釋制成每Iml中約含10 μ g的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； (4)硝酸咪康唑照中國藥典2010年版二部附錄VD高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇O. 35%磷酸溶液=80 20為流動相，其中O. 35%磷酸溶液用三乙胺調pH至3. 2±0. 2 ;檢測波長為230nm,理論塔板數按硝酸咪康唑峰計算應不低于3000 ； 測定法取本品適量，精密稱定為約相當于硝酸咪康唑5mg，置IOOml量瓶中，加體積比三氯甲烷甲醇=I I約40ml，置熱水浴中，加熱使溶解后，放冷，用體積比三氯甲烷甲醇=1 I稀釋至刻度，搖勻，冷凍I小時，取出，迅速濾過，待續濾液放至室溫，精密量取10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取硝酸咪康唑對照品適量，精密稱定，加體積比三氯甲烷甲醇=1 I溶解并定量稀釋制成每Iml中約含O. Img的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得； (5)尿素照中國藥典2010年版二部附錄IVA紫外-可見分光光度法測定 精密稱取尿素對照品O. 3g，置IOOml量瓶中，加水適量溶解后，稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，移置IOOml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得每Iml含尿素O. 3mg ;供試品溶液的制備精密稱取本品O. lg，約相當于尿素30mg，置IOOml量瓶中，加水適量，置水浴上加熱，并劇烈振搖，使尿素完全溶于水中，量瓶移置冰浴中冷卻片刻，取出放至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得； 測定法精密量取對照品溶液與供試品溶液各10ml，分別置25ml量瓶中，另取水10ml，作空白，各精密加對二甲氨基苯甲醛試液10ml，其中二甲氨基苯甲醛試液的制備方法為稱取對二甲氨基苯甲醛2g，加乙醇94ml及鹽酸6ml溶解，即得；用水稀釋至刻度，搖勻，放置暗處15分鐘，在420nm波長處分別測定吸收度，計算即得； 上述檢測結果顯示，本品含復方珊瑚姜酊以姜黃素(C21H2tlO6)計每Iml應不得低于O. Img ;水楊酸(C7H6O3)應為標示量的80. 0% 120. 0% ;每Iml含冰片(CltlH2tlO)應不得少于8. Omg ;含尿素(CH4N2O)、硝酸咪康唑(C18H14Cl4N2O · HNO3)均應為標示量的90. 0% 110. 0%。
全文摘要
本發明公開了復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的檢測方法，所述檢測方法為性狀、檢查，以及鑒別、含量測定項目；其中鑒別分為定性鑒別，以姜黃對照藥材為對照的薄層色譜鑒別，以水楊酸對照品、姜黃素對照品、硝酸咪康唑對照品為對照的高效液相色譜鑒別，以冰片對照品為對照的氣相色譜法鑒別；含量測定是對制劑中所含姜黃素、水楊酸、冰片以及尿素、硝酸咪康唑的含量測定。本發明科學合理，準確性高，可行性強，提高了復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的穩定性，有效地控制了復方珊瑚姜溶液尿素咪康唑軟膏復合制劑的質量，從而確保其臨床療效。
文檔編號G01N1/38GK102788863SQ20121015680
公開日2012年11月21日 申請日期2012年5月18日 優先權日2012年5月18日
發明者張濤濤, 張芝庭 申請人:貴州神奇藥業股份有限公司