專利名稱：6-(甲巰基)嘌呤免疫原和6-(甲巰基)嘌呤檢測試劑的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物技術領域，涉及6-(甲巰基)嘌呤免疫原、抗6_(甲巰基)嘌呤特異性抗體和6-(甲巰基)嘌呤檢測試劑。
背景技術：
6-(甲巰基)嘌呤(6_Methylmercaptopurine,6_MMP),其結構式如式(I )所示。
權利要求
1.ー種6-(甲巰基)嘌呤免疫原，其特征在于結構式如式(I )所示
2.根據權利要求I所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原，其特征在于R選自-(CH2)n-C00-、-O- (CH2) n-C00-、-S- (CH2) n-C00_ 或-NH- (CH2) n-C00_ 中的ー種，n 是 I 至 20 之間的整數，優選n值為I至10。
3.根據權利要求2所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原，其特征在于R為-(CH2)5-C00-。
4.根據權利要求I所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原，其特征在于載體為具有免疫原性的蛋白質，選自血清蛋白，血藍蛋白或甲狀腺球蛋白中的ー種，優選為牛血清蛋白。
5.—種如權利要求1-4中任一項所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原的制備方法，其特征在于包含以下步驟 (1)用IO-IOOml有機溶劑A溶解I.0-10. Og的6-MMP和I. 0-5. Og的碳酸鹽，得到溶液I;將I. 0-5. Og的6-溴己酸こ脂加入到5-50ml的有機溶劑A中，得到溶液2，將溶液I和2合并進行攪拌反應。將反應后的溶液用無機酸溶液中和，經有機溶劑B萃取分離后純化、干燥，得到白色固體狀6-(甲巰基)嘌呤衍生物。
(2)將具有免疫原性的蛋白質100-300mg溶于IO-IOOml的0.2M，pH 8. 5磷酸鹽緩沖液中。
(3)用I.0-5. Oml的有機溶劑A溶解50-500mg的6-(甲巰基)嘌呤衍生物，通過1_乙基-3-(-3- ニ甲氨丙基)碳ニ亞胺進行活化并與載體溶液進行交聯反應，經透析純化后得到具有免疫原性的6-(甲巰基)嘌呤免疫原， 所述的有機溶劑A選自ニ甲基亞砜、ニ甲基甲酰胺、甲醇或こ醇中的ー種，優選為ニ甲基甲酰胺； 所述的有機溶劑B選自こ酸こ酷，こ醚或氯仿中的ー種，優選為こ酸こ酷， 所述的碳酸鹽為Na2CO3或K2CO3，優選為Na2CO3 ； 所述的無機酸溶液為鹽酸溶液或硫酸溶液，優選為鹽酸溶液。
6.ー種抗6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體，由權利要求I 5任意一項所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原免疫宿主動物后生產得到。
7.根據權利要求6所述的6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體，其特征在于所述的抗體為多克隆抗體或單克隆抗體，優選為多克隆抗體。
8.根據權利要求7所述的6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體，其特征在于所述的宿主動物選自家免，山羊，小鼠，綿羊，豚鼠或馬中的ー種，優選為家免。
9.一種如權利要求6-8中任一項所述的6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體的制備方法，其特征在于包含以下步驟 (1)用磷酸鹽緩沖液將合成的6-(甲巰基)嘌呤免疫原稀釋至0.5-5. Omg/mL ； (2)經常規弗氏佐劑法對動物進行注射，注射后抽取動物特異抗血清，得到有效的抗體。
10.ー種6-(甲巰基)嘌呤檢測試劑，含有權利要求6-8所述的抗6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體和指示試劑，所述的指示試劑選自酶試劑、放射性同位素試劑、熒光試劑或化學發光試劑中的ー種。
11.根據權利要求10所述的6-(甲巰基)嘌呤檢測試劑，其特征在于所述的指示試劑為酶試劑，由6-(甲巰基)嘌呤酶標偶聯物和酶底物所組成。
12.根據權利要求11所述的6-(甲巰基)嘌呤檢測試劑，其特征在于所述的6-(甲巰基)嘌呤酶標偶聯物的制備方法包含以下步驟 (1)稱取酶，在室溫條件下溶解于磷酸緩沖液中，終濃度為2-6mg/mL； (2)用有機溶劑溶解6-(甲巰基)嘌呤衍生物，使其終濃度為10-50mg/mL，通過EDAC的方法進行活化，并與酶溶液進行交聯反應，經純化和透析后得到6-(甲巰基)嘌呤酶標偶聯物， 所述的有機溶劑選自ニ甲基亞砜、ニ甲基甲酰胺、甲醇或こ醇中的ー種。
13.根據權利要求12所述的6-(甲巰基)嘌呤檢測試劑，其特征在于所述的酶標偶聯物的酶選自辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶或葡萄糖-6-磷酸脫氫酶中的ー種，優選為辣根過氧化物酶。
全文摘要
本發明公開了一種6-(甲巰基)嘌呤(6-Methylmercaptopurine，6-MMP)免疫原及其合成方法，以及由該免疫原獲得的抗6-MMP特異性抗體、檢測試劑及其制備方法。本發明的高效價的6-MMP特異性抗體研制的免疫試劑可以精確地測定6-MMP的含量。與HPLC等傳統方法相比，本發明提供的免疫檢測試劑靈敏度高、特異性強，并具有操作簡單、速度快、檢測結果準確等優點，對指導臨床合理用藥具有重要的意義。
文檔編號G01N33/543GK102643341SQ20121008989
公開日2012年8月22日 申請日期2012年3月30日 優先權日2012年3月30日
發明者田軍, 蔡江麗, 虞留明, 袁紅霞 申請人:蘇州博源醫療科技有限公司