一種肝暢制劑的質量檢測方法

專利名稱：一種肝暢制劑的質量檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥復方制劑的質量檢測方法，特別涉及一種肝暢制劑的質量檢測方法，屬于醫藥技術領域。
背景技術：
肝臟是人體的代謝中心，為維持生命的重要臟器之一，它的機能狀態密切關系人體的健康，肝臟細胞受到破壞，肝臟的功能受到損害，可能引起身體的系列不適應癥狀。肝炎屬中醫“肝病”范疇，肝病多由感受時疫濕濁之毒；或飲食不節，損傷脾胃，以致水谷之氣運化失常，濕濁內阻，郁蒸化熱而使濕熱相混，脾胃壅阻，肝氣郁結，不能疏泄；或由七情內傷，肝失疏運；或氣郁化火，肝絡瘀阻；或陰血不足，肝陽偏亢，以及濕熱內蘊，寒滯肝脈而成此病；或熱迫膽汁外泄；或肝氣郁結，日久傷絡，血瘀阻滯，致膽汁排泄不暢，膽汁外泄， 溢于肌膚為黃疸。臨床主要表現右肋脹痛，據按、食欲不振，四肢無力，嘔吐、頭痛、眩暈、耳鳴，目赤，易怒，全身發黃，肝臟腫大等。據統計，全球攜帶乙型肝炎表面抗原的人數超過2. 8 億，我國是肝炎大國，目前我國人群中有8-10%為乙肝病毒攜帶者，且每年仍有相當數量的新增患者。肝暢膠囊為金訶藏藥股份有限公司獨家產品，收載于中成藥地方標準上升國家標準部分，標準編號WS-10927(ZD-0927)-2002。肝暢膠囊制劑是由如下重量配比的藥材制成的松石20. lg、天竺黃20. lg、紅花40. 0g、西紅花8. 0g、綠絨蒿59. 6g、甘青青蘭40. lg、 塞北紫堇40. lg、巖精膏40. lg、丁香20. lg、人工牛黃4. 0g、印度獐牙菜20. lg、波棱瓜子 12. 0g、木香馬兜鈴12. 0g、石花4. 0g、麝香I. 6g、銀朱I. 7g。以上藥味，除人工牛黃、人工麝香研細粉外，其余松石等藥味粉碎成細粉，過篩，與上述細粉混勻，裝入膠囊，制成1000粒， 即得。用于肝膽濕熱所引起的胸脅脹痛，食欲不振，急性肝炎見上述證候者。目前該制劑質量標準存質量標準簡單、手段單一、產品質量不易控制。原質量標準無含量測定項，現有技術中也未發現對于肝暢膠囊的其他質量檢測方法。因此，造成肝暢膠囊制劑產品質量檢測不精準，質量標準有待提高。

發明內容
針對現有技術的不足，本發明的目的是提供一種肝暢制劑的質量檢測方法。發明概述本發明對現有的肝暢制劑質量標準進行了相應提高，在原標準的基礎上增加了紅花、波棱瓜子的鑒別方法，還新增加了制劑中西紅花的有效成分西紅花苷-I和西紅花苷-II、紅花的有效成分羥基紅花黃色素A、人工牛黃的有效成分膽紅素、印度獐牙菜的有效成分獐牙菜苦苷、丁香的有效成分丁香酚的含量測定方法，進一步確保了產品質量安全、 均一、穩定、質量可控。術語說明肝暢膠囊是國家中成藥標準匯編(中成藥地方標準上升國家標準部分)記載的藥
肝暢制劑包括肝暢膠囊及用肝暢膠囊原料藥配方制備的其他制劑。本發明的技術方案如下一種原料藥組成為松石20. I重量份、天竺黃20. I重量份、紅花40. O重量份、西紅花8. O重量份、綠絨蒿59. 6重量份、甘青青蘭40. I重量份、塞北紫堇40. I重量份、巖精膏 40. I重量份、丁香20. I重量份、人工牛黃4. O重量份、印度猜牙菜20. I重量份、波棱瓜子 12. O重量份、木香馬5 鈴12. O重量份、石花4. O重量份、磨香I. 6重量份、銀朱I. 7重量份的肝暢制劑的質量檢測方法，該方法包括如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種鑒別A.紅花的鑒別取肝暢制劑2g-6g，加體積百分比70% -80%丙酮15_20ml，密塞，振搖20-30分鐘，靜置，吸取上清液，作為供試品溶液；另取紅花對照藥材O. 5g-l. 5g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1-10 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積份數比為4-12 1-3 1-3的醋酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上， 顯相同顏色的斑點；B.波棱瓜子的鑒別取肝暢制劑2. 5g-7. 5g，加乙醚20_30ml，加熱回流1_1. 5小時，濾過，濾液濃縮至
2-3ml，作為供試品溶液；另取波棱瓜子對照藥材I. Og,同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μ1-10μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積份數比為5-12 O. 5-1. 5的環己烷-丙酮為展開劑， 展開，取出，晾干；噴以重量體積份數比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定A.西紅花的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-體積份數比O. 1%甲酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為20-30 70-80 ;檢測波長440nm ； 理論板數按西紅花苷-I峰計算應不低于3500 ；對照品溶液的制備取西紅花苷-I對照品、西紅花苷-II對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末O. 6-lg，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇50-60ml，密塞，稱定重量，超聲處理30-40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;B.紅花的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-體積
8份數比O. 5%甲酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為28-30 72-75 ;檢測波長403nm ； 理論板數按羥基紅花黃色素A峰計算應不低于3000 ；對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，加體積百分比25%甲醇制成每Iml含O. 13-0. 15mg的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末3_5g，置具塞的錐形瓶中，加入體積百分比25%甲醇水溶液50-60ml，密塞，稱定重量，超聲處理40_50min，放冷，再稱定重量， 用體積百分比25%甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；C.人工牛黃的含量測定照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-體積份數比O. 5%醋酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為 80-83 10-13 10-13檢測波長為450nm;理論板數按膽紅素峰計算應不低于2000;對照品溶液的制備稱取膽紅素對照品適量，加二氯甲烷制成每Iml含IOug的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末4_5g，置具塞的錐形瓶中，精密加入二氯甲烷50-60ml，密塞，稱定重量，超聲30-40min，放冷，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;D.印度獐牙菜的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動相；流動相的體積份數比為22-25 78-75 ;檢測波長237nm ;理論板數按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500 ；對照品溶液的制備取獐牙菜苦苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含O. 12mg的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末5_7g，置具塞的錐形瓶中，加入甲醇 25-30ml，密塞，稱定重量，超聲處理30-40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量， 搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;Ε. 丁香的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動相；流動相的體積份數比為62-65 38-40 ;檢測波長280nm ;理論板數按丁香酚峰計算應不低于3000 ；對照品溶液的制備取丁香酚對照品適量，加甲醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，即得;供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末O. 5-lg，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25-30ml，密塞，稱定重量，超聲處理30-40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;F.麝香的含量測定照氣相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI Ε)測定；色譜條件與系統適用性試驗以體積百分比50%苯基-甲基硅酮0V-17為固定相，涂布濃度為2% ;柱溫180°C ;理論板數按麝香酮峰計算應不低于1500 ；對照品溶液的制備取麝香酮對照品適量，加無水乙醇制成每Iml含O. 25mg的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末3. 5g，置具塞的錐形瓶中，加入乙酸乙酯50-60ml，密塞，稱定重量，超聲處理30-40min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，40°C以下減壓濃縮，殘渣加無水乙醇使溶解并定容至 2ml，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各I μ 1，注入氣相色譜儀，測定， 即得。所述的制劑是指取上述原料藥，按常規工藝，加入常規輔料制備成臨床可接受的任何一種劑型，包括丸劑、微丸、滴丸、片劑、膠囊、顆粒、飲片或分散片。優選的,一種原料藥組成為松石20. I重量份、天竺黃20. I重量份、紅花40. O重量份、西紅花8. O重量份、綠絨蒿59. 6重量份、甘青青蘭40. I重量份、塞北紫堇40. I重量份、 巖精膏40. I重量份、丁香20. I重量份、人工牛黃4. O重量份、印度獐牙菜20. I重量份、波棱瓜子12. O重量份、木香馬5 鈴12. O重量份、石花4. O重量份、磨香I. 6重量份、銀朱I. 7 重量份肝暢制劑的質量檢測方法，該方法包括如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種鑒別A.紅花的鑒別取肝暢膠囊4g，加體積百分比80%丙酮15ml，密塞，振搖20分鐘，靜置，吸取上清液，作為供試品溶液；另取紅花對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄 VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以體積份數比為8 2 2的醋酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干； 供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.波棱瓜子的鑒別取肝暢膠囊5g，加乙醚20ml，加熱回流I小時，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液；另取波棱瓜子對照藥材I. Og,同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1-10 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以體積份數比為9 I的環己烷-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干；噴以重量體積份數比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定A.西紅花的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-體積份數比O. I %甲酸水溶液為流動相；流動相的體積份數比為24 76 ;檢測波長440nm;理論板數按西紅花苷-I峰計算應不低于3500 ；對照品溶液的制備取西紅花苷-I對照品、西紅花苷-II對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末O. 6g，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;本發明肝暢膠囊含西紅花以西紅花苷-I (C44H64O24)和西紅花苷-II (C38H54O19)的總量計，不得少于O. 7mg/粒；B.紅花的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-體積份數比O. 5%甲酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為28 72 ;檢測波長403nm;理論板數按羥基紅花黃色素A峰計算應不低于3000 ；對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，加體積百分比25%甲醇制成每Iml含O. 13mg的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末3g，置具塞的錐形瓶中，加入體積百分比25%甲醇水溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用體積百分比25%甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；本發明肝暢膠囊每粒含紅花以羥基紅花黃色素A(C27H3tlO15)計，不得少于O. 36mg/ 粒;C.人工牛黃的含量測定照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-體積份數比O. 5%醋酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為80 10 10檢測波長為450nm ;理論板數按膽紅素峰計算應不低于2000 ；對照品溶液的制備稱取膽紅素對照品適量，加二氯甲烷制成每Iml含IOug的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末4g，置具塞的錐形瓶中，精密加入二氯甲烷50ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;本發明肝暢膠囊含人工牛黃以膽紅素(C33H36N4O6)計，不得少于O. 022mg/粒；D.印度獐牙菜的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動相；流動相的體積份數比為22 78 ;檢測波長237nm ;理論板數按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500 ；對照品溶液的制備取獐牙菜苦苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含O. 12mg的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末5g，置具塞的錐形瓶中，加入甲醇 25ml，密塞，稱定重量，超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;本發明肝暢膠囊含印度獐牙菜以獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計，不得少于O. 05mg/粒；E. 丁香的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動相；流動相的體積份數比為62 38;檢測波長280nm;理論板數按丁香酚峰計算應不低于3000 ；對照品溶液的制備取丁香酚對照品適量，加甲醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，即得;供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末O. 5-lg，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量， 搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;本發明組合物膠囊含丁香以丁香酚CltlH18O2計，不得少于2mg/粒。F.麝香的含量測定照氣相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI E)測定；色譜條件與系統適用性試驗以體積百分比50%苯基-甲基硅酮0V-17為固定相，涂布濃度為2% ;柱溫180°C ;理論板數按麝香酮峰計算應不低于1500 ；對照品溶液的制備取麝香酮對照品適量,加無水乙醇制成每Irnl含O. 25mg的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末3. 5g，置具塞的錐形瓶中，加入乙酸乙酯50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，40°C以下減壓濃縮，殘渣加無水乙醇使溶解并定容至2ml，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各I μ 1，注入氣相色譜儀，測定， 即得；本發明肝暢膠囊含麝香以麝香酮(C16H3tlO)計，不得少于O. 029mg/粒。本說明書中所述的重量份與體積份的單位對應關系為g/ml或kg/1。肝暢膠囊原質量標準項下只有西紅花、人工牛黃、齊墩果酸的薄層鑒別，無含量測定項，不能有效的檢測其他主要成分的質量。本發明對現有的肝暢制劑質量標準進行了相應提高，在原標準的基礎上增加了紅花、波棱瓜子的鑒別方法，還新增加了制劑中西紅花的有效成分西紅花苷-I和西紅花苷-II、紅花的有效成分羥基紅花黃色素A、人工牛黃的有效成分膽紅素、印度獐牙菜的有效成分獐牙菜苦苷、丁香的有效成分丁香酚的含量測定方法， 進一步確保了產品質量安全、均一、穩定、質量可控，從而確保了其臨床療效和廣大患者的身體健康。下述實驗例和實施例用于進一步說明但不限于本發明。實驗例I鑒別實驗肝暢膠囊由青海金訶藏藥藥業股份有限公司提供。A.紅花的鑒別取肝暢膠囊4g，加體積百分比80%丙酮15ml，密塞，振搖20分鐘，靜置，吸取上清液，作為供試品溶液；另取紅花對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄 VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各10μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開劑體積份數比4-12 1-3 1-3的范圍內分別取(10 : 3 : 3)、(8 : 2 : 2)、(8 : I : I)的醋酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；結果分析在體積份數比為4-12 1-3 1-3的醋酸乙酯-甲酸-水展開劑條件下，有較好的展開效果。其中，體積份數比(8:2:2)的醋酸乙酯-甲酸-水的展開劑展開效果最好。B.波棱瓜子的鑒別取肝暢膠囊5g,加乙醚20ml,加熱回流I小時,濾過,濾液濃縮至2ml,作為供試品溶液；另取波棱瓜子對照藥材I. Og,同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1-10 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以環己烷-丙酮為展開劑，展開劑體積份數比5-12 O. 5-1. 5的范圍內分別取 (12 : 0.5)、(9 : I)、(8 : 1.5)環己烷-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干；噴以重量體積份數比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；結果分析在體積份數比為(12 : 0.5)、(9 : I)、(8 : 1.5)環己烷-丙酮展開劑條件下，有較好的展開效果。其中，體積份數比(9 I)的醋酸乙酯-甲酸-水的展開劑展開效果最好。實驗例2 :含量測定實驗A.西紅花的含量測定I.儀器、試藥和供試樣品
儀器1220型安捷倫高效液相色譜儀島津AuW220D電子天平。對照品西紅花苷-I對照品(中國藥品生物制品鑒定所)，批號111588-200501 ； 西紅花苷-II對照品(中國藥品生物制品鑒定所)，批號100001-200504。樣品肝暢膠囊(青海金訶藏藥藥業股份有限公司提供)，批號20100414、 20100415,20100416ο2.檢測波長的選擇取西紅花苷-I、西紅花苷-II對照品，于190_500nm波長范圍內進行掃描，根據紫外吸收圖譜，選定440nm為檢測波長。3.流動相選擇研究發現，分別以甲醇-水、乙腈-水、甲醇-體積份數比O. I %甲酸水溶液、乙腈-體積份數比O. 1%甲酸水溶液為流動相，乙腈-體積百分比O. 1%甲酸水溶液具有較好的色譜分離效果。其中以乙腈體積份數比O. 1%甲酸水溶液的體積比為24 76為流動相最優。4.系統適用性試驗及陰性干擾的考察在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，供試品色譜中西紅花苷-I、西紅花苷-II與其相鄰色譜峰的分離度均大于I. 5，且陰性對照無干擾。見附

圖1，圖2，圖3。5.對照品制備取西紅花苷-I對照品、西紅花苷-II對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每 Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得。6.供試品制備6. I提取方法選擇本品研細后，取粉末O. 6g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，分別超聲、回流、振搖處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量， 搖勻，濾過，取續濾液，即得。表I提取方法考察試驗結果
權利要求
1.一種原料藥組成為松石20. I重量份、天竺黃20. I重量份、紅花40. O重量份、西紅花8. O重量份、綠絨蒿59. 6重量份、甘青青蘭40. I重量份、塞北紫堇40. I重量份、巖精膏 40. I重量份、丁香20. I重量份、人工牛黃4. O重量份、印度猜牙菜20. I重量份、波棱瓜子 12. O重量份、木香馬5 鈴12. O重量份、石花4. O重量份、磨香I. 6重量份、銀朱I. 7重量份的肝暢制劑的質量檢測方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種鑒別A.紅花的鑒別取肝暢制劑2g-6g，加體積百分比70% -80%丙酮15-20ml，密塞，振搖20-30分鐘，靜置，吸取上清液，作為供試品溶液；另取紅花對照藥材O. 5g-l. 5g，同法制成對照藥材溶液; 照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μ1-10μ1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積份數比為4-12 1-3 1-3的醋酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.波棱瓜子的鑒別取肝暢制劑2. 5g-7. 5g，加乙醚20-30ml，加熱回流1-1. 5小時，濾過，濾液濃縮至 2-3ml，作為供試品溶液；另取波棱瓜子對照藥材I. Og,同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μ 1-10μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積份數比為5-12 O. 5-1. 5的環己烷-丙酮為展開劑， 展開，取出，晾干；噴以重量體積份數比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定A.西紅花的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-體積份數比O. I %甲酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為20-30 70-80 ;檢測波長440nm ;理論板數按西紅花苷-I峰計算應不低于3500 ；對照品溶液的制備取西紅花苷-I對照品、西紅花苷-II對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末O. 6-lg，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇50-60ml，密塞，稱定重量，超聲處理30-40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；B.紅花的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-體積份數比O. 5%甲酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為28-30 72-75 ;檢測波長403nm ;理論板數按羥基紅花黃色素A峰計算應不低于3000 ；對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，加體積百分比25%甲醇制成每Iml含O. 13-0. 15mg的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末3-5g，置具塞的錐形瓶中，加入體積百分比25%甲醇水溶液50-60ml，密塞，稱定重量，超聲處理40_50min，放冷，再稱定重量，用體積百分比25%甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;C.人工牛黃的含量測定照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-體積份數比O. 5%醋酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為80-83 10-13 10-13 檢測波長為450nm ;理論板數按膽紅素峰計算應不低于2000 ；對照品溶液的制備稱取膽紅素對照品適量，加二氯甲烷制成每Iml含IOug的溶液，即得;供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末4-5g，置具塞的錐形瓶中，精密加入二氯甲烷50-60ml，密塞，稱定重量，超聲30-40min，放冷，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；D.印度獐牙菜的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動相；流動相的體積份數比為22-25 78-80 ;檢測波長237nm ;理論板數按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500 ；對照品溶液的制備取獐牙菜苦苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含O. 12mg的溶液，即得;供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末5-7g，置具塞的錐形瓶中，加入甲醇 25-30ml，密塞，稱定重量，超聲處理30-40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量， 搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；Ε. 丁香的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動相；流動相的體積份數比為62-65 38-40 ;檢測波長280nm ;理論板數按丁香酚峰計算應不低于3000 ；對照品溶液的制備取丁香酚對照品適量，加甲醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末O. 5-lg，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25-30ml，密塞，稱定重量，超聲處理30-40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；F.麝香的含量測定照氣相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI E)測定；色譜條件與系統適用性試驗以體積百分比50%苯基-甲基硅酮0V-17為固定相，涂布濃度為2% ;柱溫180°C ;理論板數按麝香酮峰計算應不低于1500 ；對照品溶液的制備取麝香酮對照品適量，加無水乙醇制成每Iml含O. 25mg的溶液，即得;供試品溶液的制備肝暢制劑研細后，取粉末3. 5g，置具塞的錐形瓶中，加入乙酸乙酯 50-60ml，密塞，稱定重量，超聲處理30-40min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，40°C以下減壓濃縮，殘渣加無水乙醇使溶解并定容至2ml， 濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各I μ 1，注入氣相色譜儀，測定，即得。
2.如權利要求I所述的一種肝暢制劑的質量檢測方法，其特征在于所述肝暢制劑是將原料藥按常規工藝，加入常規輔料制備成臨床可接受的任何一種劑型。
3.如權利要求I或2所述的一種肝暢制劑的質量檢測方法，其特征在于，該方法包括如下鑒別和/或含量測定方法中的一種或幾種鑒別Α.紅花的鑒別取肝暢膠囊4g，加體積百分比80%丙酮15ml，密塞，振搖20分鐘，靜置，吸取上清液，作為供試品溶液；另取紅花對照藥材lg，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B) 試驗，吸取上述兩種溶液各10μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積份數比為8 2 2的醋酸乙酯-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.波棱瓜子的鑒別取肝暢膠囊5g，加乙醚20ml，加熱回流I小時，濾過，濾液濃縮至2ml，作為供試品溶液； 另取波棱瓜子對照藥材I. Og,同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1-10 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積份數比為9 I的環己烷-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干；噴以重量體積份數比5%香草醛硫酸溶液，于105°C加熱至斑點清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定A.西紅花的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-體積份數比O. I %甲酸水溶液為流動相；流動相的體積份數比為24 76 ;檢測波長440nm;理論板數按西紅花苷-I峰計算應不低于3500 ；對照品溶液的制備取西紅花苷-I對照品、西紅花苷-II對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含20 μ g和10 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末O. 6g，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇 50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；本發明肝暢膠囊含西紅花以西紅花苷-I (C44H64O24)和西紅花苷-II (C38H54O19)的總量計，不得少于O. 7mg/粒；B.紅花的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-體積份數比O. 5%甲酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為28 72 ;檢測波長403nm ;理論板數按羥基紅花黃色素A峰計算應不低于3000 ；對照品溶液的制備取羥基紅花黃色素A對照品適量，加體積百分比25%甲醇制成每 Iml含O. 13mg的溶液，即得；供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末3g，置具塞的錐形瓶中，加入體積百分比 25%甲醇水溶液50ml，密塞，稱定重量，超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用體積百分比 25%甲醇水溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得;本發明肝暢膠囊每粒含紅花以羥基紅花黃色素A(C27H3tlO15)計，不得少于O. 36mg/粒；C.人工牛黃的含量測定照高效液相法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-四氫呋喃-體積份數比O. 5%醋酸溶液為流動相；流動相的體積份數比為80 10 10檢測波長為450nm ;理論板數按膽紅素峰計算應不低于2000 ；對照品溶液的制備稱取膽紅素對照品適量，加二氯甲烷制成每Iml含IOug的溶液，即得;供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末4g，置具塞的錐形瓶中，精密加入二氯甲烷50ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得； 本發明肝暢膠囊含人工牛黃以膽紅素(C33H36N4O6)計，不得少于0.022mg/粒；D.印度獐牙菜的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動相；流動相的體積份數比為22 78 ;檢測波長237nm ;理論板數按獐牙菜苦苷峰計算應不低于2500 ；對照品溶液的制備取獐牙菜苦苷對照品適量，加甲醇制成每Iml含O. 12mg的溶液，即得;供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末5g，置具塞的錐形瓶中，加入甲醇25ml， 密塞，稱定重量，超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得；本發明肝暢膠囊含印度獐牙菜以獐牙菜苦苷(C16H22Oltl)計，不得少于0.05mg/粒；E.丁香的含量測定照高效液相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水為流動相；流動相的體積份數比為62 38;檢測波長280nm;理論板數按丁香酚峰計算應不低于 3000 ；對照品溶液的制備取丁香酚對照品適量，加甲醇制成每Iml含O. 2mg的溶液，即得； 供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末O. 5-lg，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量,搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得； 本發明組合物膠囊含丁香以丁香酚CltlH18O2計，不得少于2mg/粒；F.麝香的含量測定照氣相色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄VI E)測定；色譜條件與系統適用性試驗以體積百分比50%苯基-甲基硅酮0V-17為固定相，涂布濃度為2% ;柱溫180°C ;理論板數按麝香酮峰計算應不低于1500 ；對照品溶液的制備取麝香酮對照品適量，加無水乙醇制成每Iml含O. 25mg的溶液，即得;供試品溶液的制備肝暢膠囊研細后，取粉末3. 5g，置具塞的錐形瓶中，加入乙酸乙酯 50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用乙酸乙酯補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液25ml，40°C以下減壓濃縮，殘渣加無水乙醇使溶解并定容至2ml，濾過， 取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各I μ 1，注入氣相色譜儀，測定，即得;本發明肝暢膠囊含麝香以麝香酮(C16H3tlO)計，不得少于0.029mg/粒。
全文摘要
本發明公開了一種治療肝病的藥物組合物的質量檢測方法，屬于醫藥技術領域。本發明對現有的肝暢膠囊的質量標準進行了相應提高，在原標準的基礎上增加了紅花、波棱瓜子的鑒別方法，還新增加了制劑中西紅花的有效成分西紅花苷-I和西紅花苷-II、紅花的有效成分羥基紅花黃色素A、人工牛黃的有效成分膽紅素、印度獐牙菜的有效成分獐牙菜苦苷、丁香的有效成分丁香酚的含量測定方法，進一步確保了產品質量安全、均一、穩定、質量可控。從而確保了其臨床療效和廣大患者的身體健康。
文檔編號G01N30/90GK102590433SQ20121004755
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月28日 優先權日2012年2月28日
發明者孫泰俊, 楊敬燕, 江玉娟, 馬宏偉, 魏永義 申請人:山東阿如拉藥物研究開發有限公司