專利名稱：檢測b型流感嗜血桿菌發酵液不同發酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法
技術領域：
本發明涉及一種檢測葡萄糖濃度的方法，特別是檢測b型流感嗜血桿菌發酵液不同發酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法。
背景技術：
通過測定不同發酵時間段b型流感嗜血桿菌發酵液中葡萄糖的含量變化情況，可以基本上表征出發酵過程中菌的生長情況，也可以對其發酵動力學及發酵過程中代謝產物的量有一定的表征，根據測定結果適時補充所需葡萄糖，可以促進更好的達到發酵目的。目前發酵液糖含量的測定主要有斐林法，3，5-ニ硝基水楊酸比色法(DNS法)、HPLC、葡萄糖試劑盒以及葡萄糖傳感儀幾種方式。其中斐林法對實驗環境及實驗者的滴定手法要求非常嚴格，因此測定結果重現性較差，不同實驗者出現偏差較大；DNS法發酵液需經過處理，測定過程較為繁瑣，測定時間較長；HPLC、葡萄糖試劑盒及葡萄糖傳感儀成本較高。由于發酵液成分復雜，上述方法存在干擾現象，檢測準確度不高。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的缺點，提供一種檢測b型流感嗜血桿菌發酵液不同發酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，可直觀、準確、迅速的檢測發酵液中葡萄糖的含量，具有檢測結果穩定、檢測時間短，檢測過程簡捷、成本低的優點。本發明的目的通過以下技術方案來實現檢測b型流感嗜血桿菌發酵液不同發酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，它包括以下步驟
A、以任ー時間段的Hib發酵液的樣品作為供試品，取供試品2ml置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；
B、加熱回流使其在3分鐘內沸騰，并連續沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，后立即加入25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(I — 5) 25ml ；
C、待ニ氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續滴定至藍色消失；
D、取水2ml做一空白試驗；
E、發酵液零小時樣品的測定，其包括以下步驟
1)、取2ml發酵液零小時樣品，即加糖不加菌的樣品，置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；
2)、加熱回流使其在3分鐘內沸騰，并連續沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，立即加25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(1 — 5) 25ml ；
3)、待ニ氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續滴定至藍色消失；
F、以發酵液零小時樣品消耗滴定液的體積為100%，其余樣品消耗滴定液體積與發酵零小時樣品消耗的滴定液體積進行比較，得到發酵液不同時段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比。本發明具有以下優點
本發明用檢測還原糖的原 理，測定發酵液中不同發酵時間下的葡萄糖含量，可消除大部分干擾，準確度較高；采用了百分比的形式處理實驗數據，更直觀的表達了整個發酵過程菌的生長情況，解決了發酵過程中實時監控葡萄糖含量的問題，且檢測結果穩定、檢測時間短,檢測過程簡捷、成本低。本發明由于可直觀、準確、迅速的檢測發酵液中葡萄糖的含量水平，可作為判斷菌體生長情況的重要依據，同時可及時監控菌體生長環境中碳源是否充足，為發酵過程的補料提供重要依據。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進ー步的描述
實施例I :分別取發酵0小吋、I小吋、2小吋、3小吋、4小吋、5小吋、6小時的Hib發酵
液作為供試品，依次按下述方法進行葡萄糖含量檢測。檢測b型流感嗜血桿菌發酵液不同發酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法包括以下步驟
A、以任ー時間段的Hib發酵液的樣品作為供試品,取供試品2ml置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；
B、加熱回流使錐形瓶中溶液在3分鐘內沸騰，并連續沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，后立即加入25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(I — 5) 25ml ；
C、待ニ氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續滴定至藍色消失；
D、取水2ml做一空白試驗；
E、發酵液零小時樣品的測定，其包括以下步驟
1)、取2ml發酵液零小時樣品，即加糖不加菌的樣品，置于250ml錐形瓶中，加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；
2)、加熱回流使錐形瓶中溶液在3分鐘內沸騰，并連續沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，立即加25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(I — 5) 25ml ；
3)、待ニ氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續滴定至藍色消失；
F、以發酵液零小時樣品消耗滴定液的體積為100%，其余樣品消耗滴定液體積與發酵零小時樣品消耗的滴定液體積進行比較，得到發酵液不同時段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比。試驗結果如下所示，以上幾種供試品消耗的硫代硫酸鈉體積(去空白后)分別為發酵I小時的Hib發酵液 3. 27 ml,
發酵2小時的Hib發酵液 3. 02 ml,
發酵3小時的Hib發酵液 2. 81 ml,
發酵4小時的Hib發酵液 2. 76 ml,
發酵5小時的Hib發酵液 2. 52 ml,
發酵6小時的Hib發酵液 2. 07 ml,
發酵液零小時樣品3.44 ml通過上述試驗結果可以得出發酵I小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時的Hib發酵液中剰余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比分別為95. 06%,87. 79%，81. 69%，80. 23%, 73. 26%, 60. 17%。本發明采用了百分比的形式處理實驗數據，測定發酵液中不同發酵時間下的葡萄糖含量，更直觀的表達了整個發酵過程菌的生長情況，解決了發酵過程中實時監控葡萄糖含量的問題，且檢測結果穩定、檢測時間短，檢測過程簡捷、成本低，可作為判斷菌體生長情況的重要依據，同時可及時監控菌體生長環境中碳源是否充足，為發酵過程的補料提供重要依據。
權利要求
1.檢測b型流感嗜血桿菌發酵液不同發酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，其特征在于它包括以下步驟A、以任一時間段的Hib發酵液的樣品作為供試品,取供試品2ml置于250ml錐形瓶中， 加水25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；B、加熱回流使其在3分鐘內沸騰，并連續沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，后立即加入25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液(I — 5) 25ml ；C、待二氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續滴定至藍色消失；D、取2ml水做一空白試驗；E、發酵液零小時樣品葡萄糖含量測定；F、以發酵液零小時樣品消耗滴定液的體積為100%，其余樣品消耗滴定液體積與發酵零小時樣品消耗的滴定液體積進行比較，得到發酵液不同時段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比； 其中，所述的發酵液零小時樣品葡萄糖含量測定測定包括以下子步驟I)、取2ml發酵液零小時樣品，即加糖不加菌的樣品，置于250ml錐形瓶中，加水 25ml，精密加入堿性銅試液25ml ；2)、加熱回流使其在3分鐘內沸騰，并連續沸騰5分鐘，迅速冷卻至室溫，期間保證瓶中氧化亞銅不與空氣接觸，立即加25%碘化鉀溶液15ml，搖勻，隨振搖隨緩緩加入硫酸溶液 (1 — 5) 25ml ；3)、待二氧化碳停止放出后，立即用0.lmol/L的硫代硫酸鈉滴定液滴定，滴定至近終點時，加淀粉指示液2ml，繼續滴定至藍色消失。
全文摘要
本發明公開了檢測b型流感嗜血桿菌發酵液不同發酵時間剩余的葡萄糖濃度的方法，其主要是用硫代硫酸鈉滴定液滴定任一時間段的Hib發酵液的樣品，然后將該樣品消耗的滴定液體積與發酵零小時樣品消耗的滴定液體積進行比較，得到發酵液不同時段剩余葡萄糖含量占初始葡萄糖含量的百分比。本發明的有益效果是采用了百分比的形式處理實驗數據測定發酵液中不同發酵時間下的葡萄糖含量，更直觀的表達了發酵過程中菌的生長情況，檢測結果穩定、檢測時間短，檢測過程簡捷、成本低，可直觀、準確、迅速的檢測發酵液中葡萄糖的含量水平，可作為判斷菌體生長情況的重要依據，同時可及時監控菌體生長環境中碳源是否充足，為發酵過程的補料提供重要依據。
文檔編號G01N21/79GK102621140SQ201210036480
公開日2012年8月1日 申請日期2012年2月17日 優先權日2012年2月17日
發明者朱琳, 羅芹, 趙丹, 韓煉 申請人:成都歐林生物科技股份有限公司