專利名稱：煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法
煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法技術領域
本發明屬于農藥殘留的理化檢測技術領域，具體涉及一種煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法。
背景技術：
苦參堿是一種從苦參植株中提取出的生物堿，它作為一種天然植物源農藥，具有植物源農藥低毒、高效的特點。煙草中使用該農藥的量不斷加大，以防治煙草中的蚜蟲、煙薊馬、煙粉虱等害蟲。但是，高劑量的苦參堿對小白鼠具較強的神經急性毒性，且還具有一定的遺傳毒性。因此，苦參堿在煙草中的大量使用必將存在一定的安全隱患，進而影響到煙草的質量安全。現有技術中，對苦參堿的前處理方法常常采用堿性溶液將苦參堿轉化為分子形態，再用三氯甲烷等有機溶劑進行萃取或直接用極性較大的乙醇、乙腈進行提取，再對提取液進行一定的凈化，上述二種方法提取的色素等雜質較多，需要較為復雜的凈化步驟。 此外，二種方法都要使用較多量的毒性較大的有機溶劑，這些缺點都不符合對苦參堿的常規殘留檢測要求，本發明提供了一種煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，具有良好的檢測效果。發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種用乙酸水溶液提取，強陽離子交換固相萃取柱凈化后用氣相色譜-氮化學發光檢測器，直接測定煙葉中苦參堿農藥殘留量的方法，以克服現有的方法前處理復雜和要使用毒性較大的有機溶劑的缺點，本方法還具有快速、準確且干擾較少的優點。
本發明的技術方案本發明的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，包括以下步驟(1)稱取研磨的煙葉于離心管中用乙酸水溶液提取，用水相濾膜過濾，得到濾液；(2)濾液用強陽離子交換固相萃取柱凈化；(3)用氣相色譜測定新鮮煙葉中苦參堿農藥殘留量的方法。
所述的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，所述的乙酸水溶液的pH為 3. 0 4· 0。
所述的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，所述的水相濾膜的孔徑為0.45 μ m0
所述的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，所述的濾液用強陽離子交換固相萃取柱凈化為先用HCl調節濾液的pH至1. 5^2. 5，依次用甲醇、水預淋洗活化Bond Elut-SCX柱，將濾液轉移至Bond Elut-SCX柱中，用HCl將殘余物清洗一次過柱，然后依次用HC1、甲醇淋洗萃取柱，棄去淋出液并將Bond Elut-SCX柱抽干，用氨水甲醇混合溶液洗脫萃取柱，收集洗脫液于試管中，氮氣吹干，用甲醇溶解分析物，過0.45 μ m微孔有機濾膜， 將其轉移至微量玻璃平底內插管，待進樣。
所述的一種煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，所述的氨水甲醇混合溶液其組成體積比為氨水甲醇=5:95。
所述的一種煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，所述氣相色譜的檢測器為氮化學發光檢測器。
所述的一種煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，所述氣相色譜的分析條件為 氣相色譜為=Agilent 7890A氣相色譜，氮化學發光檢測器為Agilent 255氮化學發光檢測器組成，色譜柱石英毛細管柱DB-17 ；He為載氣，流量為1 mL/min ；進樣口溫度250 C ； 基座溫度250 C ；進樣模式不分流進樣量2 ？ L ；程序升溫初溫110 C，保持1 min， 以8 C/min升至230 C,保持5 min,以10 C/min升至260 C,保持4 min ；檢測器氫氣流量4. 0 mL/min ；氧氣流量10 mL/min，裂解溫度為950 ？ C，采集數據頻率為20Hz。
本發明達到的有益效果 (1)環保及前處理簡單相對于現有技術中使用較多量的毒性較大的有機溶劑，且前處理復雜，本發明采用用乙酸水溶液提取，濾液用強陽離子交換固相萃取柱凈化，具有環保及前處理簡單的優點。
(2)檢測限低，線性關系好將不同濃度的苦參堿農藥標準工作溶液注入GC-NCD，以3倍信噪比(S/N=3)計算檢測限(LOD)，檢測限為 0. 03 mg/kg ；將濃度梯度為 0. 15 ug/mL，0. 3 ug/mL，0. 9 ug/mL, 1. 8 ug/mL 禾口 3 ug/mL 注入 GC-NCD，以濃度為橫坐標，峰面積響應值為縱坐標，進行線性回歸，苦參堿的的回歸方程為 Y=68. 85Χ+0. 507，r2=0. 9998，表明線性關系較好。
(3)回收率高，精密度好苦參堿在新鮮煙葉中的回收率在89. 5%-91. 6%之間，變異系數(CV)為2. 73%_3. 62%，說明該方法回收率高，精密度好。
具體實施方式
實施例1(1)準確稱取研磨的鮮煙葉2g于50 mL塑料離心管中，加入15 mL pH=3. 5的乙酸水溶液，將樣品渦旋30 s后振蕩提取30 min, 4000 rpm離心后取上層清液，再用8 mL乙酸水溶液洗滌2次，合并濾液過0. 45 μ m水相濾膜，待凈化；(2)先用0.5 mol/L的HCl調節濾液至pH=2，依次用甲醇、水各5 mL預淋洗活化Bond Elut-SCX，將濾液轉移至Bond Elut-SCX柱中，用5 mLO. 5 mol/L的HCl將殘余物清洗一次過柱，然后依次用0.5 mol/L的HC1、甲醇各5 mL淋洗萃取柱，棄去淋出液并將小柱抽干，用 10 mL氨水甲醇(5:95，V/V)溶液洗脫萃取柱，收集洗脫液于20 mL玻璃試管中，45 ？ C 下氮氣吹干，用0. 5 mL甲醇溶解分析物，過0. 45 μ m微孔有機濾膜，將其轉移至250 μ L微量玻璃平底內插管，待進樣；(3)GC-NCD由Agilent 7890A氣相色譜和Agilent 255氮化學發光檢測器組成，色譜柱石英毛細管柱DB-17(30 mXO. 25 mmXO. 25 ？ m) ；He為載氣，流量為1 mL/min ；進樣口溫度250 C;基座溫度250 C;進樣模式不分流進樣量2 ？ L ；程序升溫初溫 110 C，保持 1 min，以 8 C/min 升至 230 C，保持 5 min,以 10 C/min 升至 260 C，保持4 min ；檢測器氫氣流量4. 0 mL/min ；氧氣流量10 mL/min，裂解溫度為950 ？ C，采集數據頻率為20Hz。
實施例2苦參堿標準物質用甲醇配制濃度為2 mg/mL的儲存標準溶液。工作標準溶液用甲醇把儲存標準溶液稀釋為相應的濃度，即配制成不同濃度的苦參堿標準溶液，標準序列為0. 15 ug/mL,0. 3 ug/mL,0. 9 ug/mL,1. 8 ug/mL 禾口 3 ug/mL。
將不同濃度的苦參堿農藥標準工作溶液注入GC-NCD，以3倍信噪比(S/N=3)計算檢測限(LOD)，檢測限為0. 03 mg/kg將濃度梯度為 0. 15 ug/mL, 0. 3 ug/mL, 0. 9 ug/mL, 1. 8 ug/mL 禾口 3 ug/mL 注入 GC-NCD，以濃度為橫坐標，峰面積響應值為縱坐標，進行線性回歸，苦參堿的的回歸方程為 Y=68. 85Χ+0. 507，r2=0. 9998，表明線性關系較好。
實施例3在新鮮煙葉中加入三個濃度梯度的苦參堿標準溶液，放入0 ？ C左右冰箱中靜置過夜， 然后進行前處理，再用GC-NCD檢測分析。并按照添加量和測定值計算其添加回收率。結果見表1，從表1可以看出，按照0. 05 mg/kg, 0. 2 mg/kg, 0. 4 mg/kg進行添加時，苦參堿在新鮮煙葉中的回收率在89. 5%-91. 6%之間，變異系數(CV)為2. 73%_3. 62%，說明該方法回收率高，精密度較好。表1苦參堿在煙萆中的添加回收率
權利要求
1.一種煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，其特征在于包括以下步驟(1)稱取研磨的煙葉于離心管中用乙酸水溶液提取，用水相濾膜過濾，得到濾液；(2)濾液用強陽離子交換固相萃取柱凈化；(3)用氣相色譜測定新鮮煙葉中苦參堿農藥殘留量。
2.根據權利要求1所述的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，其特征在于所述的乙酸水溶液的PH為3. 0 4.0。
3.根據權利要求1所述的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，其特征在于所述的水相濾膜的孔徑為0.45 μπι。
4.根據權利要求1所述的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，其特征在于所述的濾液用強陽離子交換固相萃取柱凈化為先用HCl調節濾液的ρΗ至1. 5^2. 5，依次用甲醇、 水預淋洗活化Bond Elut-SCX柱，將濾液轉移至Bond Elut-SCX柱中，用HCl將殘余物清洗一次過柱，然后依次用HC1、甲醇淋洗萃取柱，棄去淋出液并將Bond Elut-SCX柱抽干，用氨水甲醇混合溶液洗脫萃取柱，收集洗脫液于試管中，氮氣吹干，用甲醇溶解分析物，過0. 45 μ m微孔有機濾膜，將其轉移至微量玻璃平底內插管，待進樣。
5.根據權利要求4所述的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，其特征在于所述的氨水甲醇混合溶液其組成體積比為氨水甲醇=5:95。
6.根據權利要求1所述的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，其特征在于所述氣相色譜的檢測器為氮化學發光檢測器。
7.根據權利要求1或6所述的煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，其特征在于所述氣相色譜的分析條件為氣相色譜為=Agilent 7890A氣相色譜，氮化學發光檢測器為 Agilent 255氮化學發光檢測器組成，色譜柱石英毛細管柱DB-17;He為載氣，流量為1 mL/min;進樣口溫度250 C;基座溫度250 C;進樣模式不分流進樣量2 ？ L ；程序升溫初溫110 C，保持1 min，以8 C/min升至230 C，保持5 min,以10 C/min升至 260 C，保持4 min;檢測器氫氣流量4.0 mL/min ；氧氣流量10 mL/min，裂解溫度為950 ？ C，采集數據頻率為20Hz。
全文摘要
本發明公開了一種煙葉中苦參堿農藥殘留量的測定方法，包括以下步驟稱取研磨的煙葉于離心管中用乙酸水溶液提取，用水相濾膜過濾，得到濾液；濾液用強陽離子交換固相萃取柱凈化，用氣相色譜測定新鮮煙葉中苦參堿農藥殘留量的方法，本發明的方法具有前處理簡單和避免使用了毒性較大的有機溶劑，本方法還具有快速、準確且干擾較少的優點。
文檔編號G01N30/88GK102520107SQ20121000619
公開日2012年6月27日 申請日期2012年1月9日 優先權日2012年1月9日
發明者向章敏, 周淑平, 張婕, 耿召良, 蔡凱, 陳興江 申請人:貴州省煙草科學研究所