一種檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置及其方法

專利名稱：一種檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置及其方法
技術領域：
本發明申請涉及一種檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置及其方法，屬于臨床免疫學檢測技術領域。
背景技術：
心磷脂是從牛的心肌中分離出來的一種具有抗原性的磷脂，并加以命名，其在哺乳動物肌中含量最高，每個心磷脂分子包含4個不飽和的脂肪酸，極易氧化。抗心磷脂抗體是一種以血小板和內皮細胞膜上帶負電荷的心磷脂作為靶抗原的自身抗體。常見于系統性紅斑狼瘡(SLE)及其他自身免疫性疾病。該抗體與血栓形成、血小板、自然流產或宮內死胎關系密切。研究證實，許多因素與抗心磷脂抗體的產生關系密切。抗心磷脂抗體IgM型可出現在健康人群，但其與栓塞發生無關；IgG型較常見，其在相關疾病中滴度較高。臨床檢測抗心磷脂抗體的常見方法包括免疫印跡法、放射免疫分析法和ELISA法，但這些方法都存在著不足之處。一、免疫印跡法免疫印跡是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。其不足之處在于:(I)只能進行定性和半定量分析，無法得出被檢物質具體的量。(2)操作步驟繁瑣，試驗用時較長。(3)檢測的靈敏度還有待提聞。二、放射免疫分析法放射免疫分析法是利用同位素標記的與未標記的抗原，同抗體發生競爭性抑制反應，是一種在無須采用生物測定方法的情況下用于檢測抗原的實驗室測定方法。該法極其敏感而又極其特異，但其卻需要具備尖端復雜的設備，且成本也不低。同時，還需要特殊的預防措施，因為其要用到放射性物質。因此，如今放射免疫分析法在很大程度上已經被ELISA所取代。三、酶聯免疫吸附法酶聯免疫吸附法(ELISA)被廣泛應用于檢測抗心磷脂抗體，但該方法也存在著下述的不足之處:(I)使用12X8型、6X8型、8X12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原包被用具和反應容器，在使用時只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，無法進行獨立的、單人份的檢測；(2)定量測定所用的試劑種類較多，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類多，力口注試劑的操作也極為繁瑣；
(3)缺少對檢測信息的相應標注，只能通過查看試劑盒外包裝盒的標識才能了解或知悉檢測試劑的生產批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中不受控，具有很大的隨意性；(4)檢測試劑在檢測過程中處于開放的空間，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果的準確性；(5)檢測過程多采用手工操作，試劑或樣本的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發生操作差錯，檢測結果的準確度和精密度較差；(6)在檢測項目成套試劑的數量配置及使用上均為項目數X48/96人份，如果需要檢測10個項目，則試劑的配置及使用數須為10X48/96人份，如果只有一份樣本需要檢測10個不同的項目，也需要配置10X48/96人份的試劑，存在著不夠經濟合理的缺點。

發明內容
本發明專利申請即是針對目前對于抗心磷脂抗體的檢測中存在的上述不足之處，提供一種能夠進行獨立單人份檢測的試劑裝置及其檢測方法。本發明專利申請基于酶聯免疫檢測的原理來實現抗心磷脂抗體的檢測，是一種獨立的、單人份的、一次性的檢驗方法；進一步的，本發明申請還提供了與該方法配套的相應的試劑裝置，該試劑裝置將抗心磷脂抗體酶聯免疫檢測所需要的多種試劑盛裝在一個獨立的、多孔結構的試劑裝置內，通過分步加注移棄完成檢測步驟；進一步的，所述的試劑裝置還可以通過專用的免疫分析儀進行相應的全自動檢測。本發明申請的目的之一是提供一種檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置，該目的是通過下述的技術方案實現的:具體來說，本發明申請所述的檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置為長條狀，包括具有八個孔位的基體和位于基體一端的手柄，八個孔位的排列順序從近手柄端開始依次為樣本孔、輔劑孔、酶結合物孔、底物孔、終止液孔、稀釋液孔、反應孔和稀釋孔，樣本孔內盛有待測樣本，輔劑孔供檢測有需要時加入輔助試劑使用，酶結合物孔內盛有酶結合物溶液，底物孔內盛有底物溶液，終止液孔內盛有終止液，稀釋液孔內盛有稀釋液，反應孔為平底且具有高的光通透性，孔內包被有心磷脂和人β 2糖蛋白I組成的抗原，并作為反應容器加注待測的液體樣本和檢測試劑及洗滌液，反應終止后進行吸光度測定，稀釋孔作為樣本稀釋容器，供稀釋樣本時用。進一步的，所述的試劑裝置中，輔劑孔、酶結合物孔、底物孔、終止液孔和稀釋液孔上覆蓋有密封薄膜，該密封薄膜主要起到在運輸和移動的過程中防止液體溢出的作用，另夕卜，也起到防塵防污染及增強穩定性的作用。進一步的，所述的手柄上粘貼有條形碼，該條形碼標識有抗心磷脂抗體檢測試劑及分析裝置的相關信息。更進一步的，所述的信息包括檢測項目代碼、檢測試劑生產批號、試劑有效期、定量檢測標準曲線參數、酶聯免疫反應類型、試劑及分析裝置的序列號。進一步的，所述試劑裝置還包括若干個支撐柱，所述的支撐柱位于所述試劑裝置基體的下面，相鄰支撐柱之間間隔有一個以上的孔位，支撐柱的作用是為了加強基體的機械強度及平衡性。
進一步的，所述試劑裝置中反應孔由外孔和內孔構成，外孔的底部開有底孔，內孔穿過底孔且與底孔緊配合，外孔和內孔之間留有防溢腔，防溢腔的作用是在反應過程中，如果液體溢出，可以留在腔內，防止污染儀器和其他試劑裝置。更進一步的，所述試劑裝置中反應孔的內孔包被的心磷脂和人β 2糖蛋白I組成的抗原包括天然的心磷脂和人β 2糖蛋白I或重組的心磷脂和人β 2糖蛋白I。應該明確的是，本發明申請中，所述試劑裝置中各孔位的大小、形狀并不加以限制，例如各孔位的開放口緣可為方形或圓形，其剖面的形狀也可以是方形、“U”型、或“V”型，但對于反應孔來說，為了獲得較好的光通透性，底部應為平底。進一步的，所述的樣本孔內加入的樣本為待測血清或血漿，加入的量根據樣本孔的大小和檢測需要稀釋的倍數來確定。所述的輔劑孔是在必要的時候加入輔助試劑之用，例如吸附劑、中和劑、抑制劑、緩沖液等，以去除檢測過程中其他物質對檢測反應及結果的干擾。所述的酶結合物孔內加入酶結合物溶液，主要成份為辣根過氧化物酶標記的抗人IgG、或IgA、或IgM、或Ig(GAM)抗體，堿性磷酸酶標記的抗人IgG、或IgA、或IgM、或Ig (GAM)抗體，葡萄糖氧化物酶標記的抗人IgG、或IgA、或IgM、或Ig(GAM)抗體,或β -半乳糖苷酶標記的抗人IgG、或IgA、或IgM、或Ig(GAM)抗體。所述的底物孔中加入的底物溶液主要成份為TMB、OPD或ABTS。TMB作為一種新型安全的色原試劑，已逐步取代強致癌物聯苯胺和其他致癌性的聯苯胺衍生物，應用于臨床化驗、法醫檢驗、刑事偵破及環境監測等領域，尤其是在臨床生化檢驗方面，TMB作為過氧化物酶的新底物，在酶免疫分析法(EIA)和酶聯免疫吸附檢驗法(ELISA)中獲得了廣泛的應用。所述的終止液孔中加入的終止液主要成份為濃度是0.1 0.5M的硫酸或鹽酸溶液。所述的稀釋液孔中加入的稀釋液主要成份為磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、硼酸鹽緩沖液或碳酸鹽緩沖液，并含一定濃度的牛血清白蛋白、疊氮化鈉等組份，用于排除樣本中小分子物質的非特異性反應的干擾及增加穩定性。本發明申請的另一個目的是提供利用上述試劑裝置進行類抗心磷脂抗體的檢測方法，所述的方法包括如下的步驟:I)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本；2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中；3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔；4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中，將樣本進行稀釋；5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進行進一步的稀釋；6)從稀釋孔中吸取液體加入反應孔中，25 37°C的條件下，孵育30 60min ；7)用洗滌液對反應孔進行3 5次洗滌后移除液體；8)從酶結合物孔中吸取酶結合物溶液加入反應孔中，25 37°C的條件下，反應30 60min后移除液體；9)重復步驟7)；10)從底物孔中吸取底物溶液加入反應孔中，25 37°C的條件下，反應10 20min ；11)從終止液孔中吸取終止液加注至反應孔中，I IOmin內于450nm讀取OD值，或選擇雙波長法測定，波長范圍在620nm 690nm。進一步的，所述的方法包括如下的步驟:I)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本，體積至少為樣本孔容量的1/4 ；2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中，吸取的量為孔內液體總量的7/10以上；3)移除稀釋液孔中的剩余液體，根據預期稀釋倍數從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔；4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中，將樣本進行稀釋，稀釋倍數為I 10倍;5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進行進一步的稀釋，稀釋倍數為I 100倍；6)從稀釋孔中吸取液體加入反應孔中，25 37°C的條件下，孵育30 60min ；7)用洗滌液對反應孔進行3 5次洗滌后移除液體；8)從酶結合物孔中吸取酶結合物溶液加入反應孔中，25 37°C的條件下，反應30 60min后移除液體；9)重復步驟7)；10)從底物孔中吸取底物溶液加入反應孔中，25 37°C的條件下，反應10 20min ；11)從終止液孔中吸取終止液加入反應孔中，I IOmin內于450nm讀取OD值，或選擇雙波長法測定，波長范圍在620nm 690nm。更進一步的，所述的方法包括如下的步驟:I)在所述的樣本孔中加入樣本80 150 μ L ;2)用精密加液器從稀釋液孔中吸取360 μ L液體到稀釋孔中；3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取180 μ L液體回稀釋液孔；4)用精密加液器從樣本孔中吸取20 μ L液體到稀釋液孔中，樣本10倍稀釋；5)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體20 μ L到稀釋孔中，樣本100倍稀釋；6)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體IOOyL到反應孔中，25 37°C下，孵育60min后移除液體；7)用洗滌液對反應孔進行3 5次洗滌后移除液體；8)用精密加液器從酶結合物孔中吸取100 μ L辣根過氧化物酶標記的抗體酶結合物溶液至反應孔進行反應，25 37°C下，反應30min后移除液體；9)重復步驟7)；10)用精密加液器從底物孔中吸取100 μ L的TMB底物溶液至反應孔中反應10 15min ；11)用精密加液器從終止液孔中吸取100 μ L的終止液加注至反應孔中，I IOmin內于450nm和630nm雙波長條件下進行檢測，讀取OD值。所述的洗滌液包括PBST溶液，PBST溶液是指PBS溶液加上Tween-20，PBS溶液是指磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffer Solution),滲透壓近似于生理條件,又有很強的pH緩沖能力，常用來洗細胞和作為細胞培養的基礎液，而Tween-20為一種非離子表面活性劑，對細胞生長可產生影響，Tween-20有復性抗原的作用，可提高特異性的識別能力。本發明申請所述測定抗心磷脂抗體的試劑裝置及其方法，不但具有其他檢測方法所具有的特異性強、靈敏度高，準確性好、成本較低、使用要求不高、操作較為簡便、獲得檢測結果時間短、應用廣泛等的優點，而且解決了其他檢測方法的諸多不足，具體體現在以下幾個方面:1.所述的檢測方法運用酶聯免疫分析原理，利用特定的分析儀器，采用配套專用的檢測試劑盒及分析試劑裝置，自動實現抗心磷脂抗體定量測定，是一種全新的、適用的、實用的、高效的、快速的檢測抗心磷脂抗體的方案；2.它是一種獨立的、單人份的檢測試劑及分析裝置，無需像通用ELISA法那樣使用12X8型、6X8型、8X 12型或整板型96孔專用酶聯免疫微孔板作為抗原包被用品和反應容器，在使用時只要有一份樣本即可進行對應項目的檢測而無試劑的浪費，如果樣本的數量超過一份，按實際樣本數使用該試劑及分析裝置即可；3.它將每一檢測必需的試劑盛裝在一個分析試劑裝置的試劑孔位內，而無須將檢測試劑分別用不同的試劑瓶來盛裝，不但操作極為簡便，而且不容易造成操作差錯，從而保證檢測結果的正確性；4.它對每一個分析試劑裝置都有一個專用條形碼，條形碼的數值包含檢測所對應的檢測項目代碼、檢測試劑生產批號、試劑有效期、定量測定標準曲線參數、具體的酶聯免疫反應類型、試劑及分析裝置的序列號等信息，不能隨意被改變，使用時嚴格受控，尤其是在使用超過有效期檢測試劑時，將被識別并阻止發出檢測報告，從而可以確保檢測的準確性；5.它將每一檢測試劑進行有效分隔和密封，不會引起各種試劑之間的交叉污染而影響檢測結果；6.它是一種專用于特定分析儀器的分析試劑裝置，在檢測過程中用全自動的精密加液器來加注檢測試劑、洗滌液或樣本，操作自動化，加量精確，檢測結果的準確度和精密
度高；7.在檢測項目成套試劑的數量配置及使用上，一切按實際使用需要來進行配備即可，尤其是在對多項目檢測上，配備更為適量，不會出現超配置及使用情況。


圖1是本發明申請所述試劑裝置的一個實施例的剖面結構示意圖；圖2是圖1所述實施例的平面俯視圖；圖3是本發明申請所述試劑裝置的另一個實施例的剖面結構示意圖；圖4是本發明申請所述試劑裝置的再一個實施例中反應孔的平面俯視圖；圖5和圖6是圖4所述試劑裝置中反應孔中內孔和外孔的裝配示意圖；其中，10為基體、20為手柄、30為條形碼、40為密封薄膜、50為支撐柱、11為樣本孔、12為輔劑孔、13為酶結合物孔、14為底物孔、15為終止液孔、16為稀釋液孔、17為反應孔、18為稀釋孔、171為外孔、172為內孔、173為防溢腔、174為底孔。
具體實施例方式以下結合具體的檢測裝置與實施步驟對本發明申請所述的試劑裝置和檢測方法進行進一步的描述，目的是為了公眾更好的理解本發明申請所述的技術方案，而不是對所述技術方案的限制。事實上，以相同或近似的原理，對所述試劑裝置進行的改進，包括其形狀、尺寸、所用材質的改變，以及相應結構的增減或替換，都在本發明申請所要求保護的技術方案之內。實施例一檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置一如圖1-2所示，本發明申請所述的檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置為長條狀，包括具有八個孔位的基體10和位于基體10 —端的手柄20，八個孔位的排列順序從近手柄10端開始依次為樣本孔11、輔劑孔12、酶結合物孔13、底物孔14、終止液孔15、稀釋液孔16、反應孔17和稀釋孔18，所述的樣本孔11內盛有待測樣本，輔劑孔12供檢測需要時加入輔助試劑使用，在本發明申請所述的檢測方法中輔劑孔12內未加入任何試劑，酶結合物孔13內加入酶結合物溶液，底物孔14內加入底物溶液，終止液孔15加入終止液，稀釋液孔16內加入稀釋液，反應孔17為平底并具有很高的光通透性，當盛裝無色或空白試劑溶液時，對可見光或紫外光或熒光的吸光度值接近于零，孔內已包被有純化的心磷脂和人β 2糖蛋白I組成的抗原，并作為反應容器加注待測的液體樣品和檢測試劑及洗滌液，反應終止后進行吸光度測定，稀釋孔18作為樣品稀釋容器，供稀釋樣品時用。進一步的，所述的試劑裝置中，輔劑孔12、酶結合物孔13、底物孔14、終止液孔15和稀釋液孔16上覆蓋有密封薄膜40，該密封薄膜40主要起到在運輸和移動的過程中，防止液體溢出的作用，另外，也起到防塵防污染及增加穩定性的作用。進一步的，所述的手柄20上粘貼有條形碼30，該條形碼30標識有抗心磷脂抗體檢測試劑及分析裝置的信息，所述的信息包括檢測項目代碼、檢測試劑生產批號、試劑有效期、定量檢測標準曲線參數、酶聯免疫反應類型、試劑及分析裝置的序列號。實施例二檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置二如圖3所示，本實施例中的檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置，其基本結構與實施例一中的試劑裝置相同，在所述試劑裝置還包括若干個支撐柱50，所述的支撐柱50位于所述試劑裝置中基體10的下面，相鄰支撐柱50之間間隔有一個以上的孔位，支撐柱50的作用是為了加強基體的機械強度及平衡性。實施例三檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置三如圖4-6所示，為本發明申請所述檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置的優選的實施例，其基本結構與實施例一或實施例二相同，區別在于反應孔17為可拆卸式的結構，反應孔17由外孔171和內孔172構成，外孔171的底部開有底孔174，內孔172穿過底孔174且與底孔174緊配合，外孔171和內孔172之間留有防溢腔173，防溢腔173的作用是在反應過程中，如果液體溢出，可以留在腔內，防止污染儀器和其他試劑裝置。進一步的，所述內孔和外孔的配合固定方式還可以是將內孔的外壁設計為兩段，上段外壁的厚度大于下段外壁的厚度，外孔的底孔的直徑與內孔下段的外徑相等，這樣將內孔下段插入底孔中，內孔的上段恰好卡在底孔之上，同樣可以起到緊固的效果。實施例四試劑裝置或試劑盒的制作-間接法檢測抗心磷脂抗體
本發明是基于酶聯免疫檢測技術上的一種更加簡單、準確、有效的一套方法，其采用的基本原理為間接酶聯免疫法:將由純化的心磷脂和人β 2糖蛋白I組成的抗原吸附于固相上，通過孵育使稀釋的人血清或血漿中的特異性抗體與抗原結合，洗滌去除未與固相結合的抗體，加入用辣根過氧化物酶標記的抗人免疫球蛋白酶聯物，孵育，去除未結合的酶聯物，加入酶色原底物，產生的顏色與檢測樣本中的特異性抗體濃度成正比。這種方法主要是通過用于酶聯免疫檢測的分析試劑裝置和配套試劑來實現抗心磷脂抗體的免疫檢測。通過這種酶聯免疫方法，同時運用特定分析儀器的分析試劑裝置和試劑，可快速，準確的做出判斷用于輔助臨床診斷。以孔位11作為樣本孔，在使用時加入液體樣本，供檢測時取用；以孔位12作為輔劑孔，用密封薄膜封口，供檢測備用；以孔位13作為酶結合物孔，加入酶結合物溶液用密封薄膜封口，供檢測時取用；以孔位14作為底物孔，加入TMB底物溶液后用密封薄膜封口，供檢測時用；以孔位15作為終止液孔，加入終止液后用密封薄膜封口，供檢測時用；以孔位16作為稀釋液孔，加入樣本稀釋液后用密封薄膜封口，供檢測時用；以孔位17作為包被物孔/反應孔/比色孔，已包被有純化的心磷脂和人β 2糖蛋白I組成的抗原，并作為反應容器加注待測的液體樣本和檢測試劑及洗滌液，反應終止后進行吸光度測定；以孔位18作為稀釋孔，供稀釋樣本時用；在手柄20粘貼抗心磷脂抗體檢測試劑及分析裝置信息的條形碼30，該條形碼包括檢測項目代碼、檢測試劑生產批號、試劑有效期、定量測定標準曲線參數、酶聯免疫反應類型、試劑及分析裝置的序列號。按照上述方法制備若干分析裝置，另外制備相應的校準品和質控物。這樣即構成了完整的抗心磷脂抗體測定試劑盒組份。將檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置及配套使用組份裝入試劑盒的外包裝盒，即制成檢測抗心磷脂抗體試劑盒。實施例五抗心磷脂抗體Ig(GAM)的檢測方法本發明申請提供一種利用上述試劑裝置進行抗心磷脂抗體Ig(GAM)檢測的方法，所述的方法包括如下的步驟:1.在所述的樣本孔中加入樣本80 150μ L ;2.用精密加液器從稀釋液孔中吸取360 μ L液體到稀釋孔中；3.移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取180 μ L液體回稀釋液孔；4.用精密加液器從樣本孔中吸取20 μ L液體到稀釋液孔中，樣本10倍稀釋；5.用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體20 μ L到稀釋孔中，樣本100倍稀釋；6.用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體IOOyL到反應孔中，25°C下，孵育60mi η后移除液體；7.用洗滌液對反應孔進行3 5次洗滌后移除液體；8.用精密加液器從酶結合物孔中吸取IOOyL辣根過氧化物酶標記的抗人Ig(GAM)抗體酶結合物溶液至反應孔進行反應，25°C下，反應30min后移除液體；9.重復步驟7;10.用精密加液器從底物孔中吸取100 μ L的TMB底物溶液至反應孔中反應10 15min ；11.用精密加液器從終止液孔中吸取100 μ L的終止液加注至反應孔中，I IOmin內于450nm和630nm雙波長條件下進行檢測，讀取OD值。實施例六通過全自動分析儀實現對樣本中抗心磷脂抗體Ig(GAM)檢測的分析操作流程進一步的，本發明申請所述的檢測方法還包括相應配合使用的全自動分析儀，該全自動分析儀包括一個分析裝置托盤，它是與分析裝置的形狀相配套的，一共有30個位置可供分析裝置放置，用于檢測分析，此外還包括模塊式集成機械電子結構及軟件控制系統，可實現自動化的加注、稀釋、孵育、洗滌、讀數、分析過程。每個位置獨立定量分析，保證結果的準確性。儀器運行后，分析裝置托盤會自行轉動到不同的位置進行加注，稀釋，孵育，洗滌以及讀數的步驟。具體的操作包括如下的步驟:(I)檢查程序的準備:按要求配置好相應的溶液，包括洗滌緩沖液，清洗液或消毒液，配制完畢裝入相應的液體瓶中；(2)與外接計算機相連:儀器和外接計算機相連，從而將儀器正常工作所得結果交由集中式系統處理；(3)開機:打開儀器開關后，通過外接計算機的工作界面對儀器設置自動或手動自檢，從而為儀器的正常運行做準備；(4)預熱:在開機后，儀器會啟動加熱程序，將溫度調至待檢溫度；(5)沖洗檢查；(6)抗心磷脂抗體Ig(GAM)的檢測:I)從有密封口的一邊打開包裝袋，取用所需數量的分析試劑裝置，排除空氣后將袋口封緊；2)檢查分析試劑裝置TMB底物孔中的溶液，應為無色澤改變，否則應棄掉；3)分別在每個分析試劑裝置的樣本孔中加50 120 μ L未稀釋的樣本，建議加100 μ L的樣本，每更換一個批號的試劑，應取其中一個分析試劑裝置及校準品進行儀器校準；4)按照所需檢測的數量在分析裝置托盤中放入相對應數量的分析試劑裝置，點擊“開始”、“掃描”，儀器可自動地掃描分析試劑裝置條碼、質控物條碼和校準品條碼，然后對樣本進行編號，或通過外部條碼掃描儀對樣本條碼進行掃描；5)點擊“運行”，儀器根據條碼信息自動運行，根據條碼，程序首先檢測校準品，通過校準，修正標準曲線；其次對質控物進行檢測，如果其檢測結果在標示的范圍內，則表示檢測的標準曲線符合要求，可用于樣本的檢測，最后開始樣本的檢測程序；6)稀釋:加注針刺破孔位密封薄膜自動吸取稀釋液360 μ L到稀釋孔中，并移除稀釋液孔中的剩余液體，再從稀釋孔中吸取稀釋液180μ L回稀釋液孔，加注針從樣本孔自動吸取樣品20 μ L到稀釋液孔進行樣本稀釋，再從稀釋液孔中吸取20 μ L到稀釋孔，動作完成后，被稀釋的樣本被加注針移至反應孔孵育30 60min，通常儀器設定為60min，之后移除液體；7)洗滌:沖洗針從相應的液瓶中吸取一定量的洗滌緩沖液對試劑孔進行三到五次洗滌后移除液體；8)加注針刺破酶結合物孔密封薄膜吸取100 μ L辣根過氧化物酶標記的抗人Ig(GAM)抗體酶結合物溶液至反應孔進行反應，反應30 60min后移除液體，通常儀器設定為 30min ；9)重復步驟7);10)加注針刺破TMB底物孔密封薄膜吸取100 μ L的TMB底物溶液至反應孔反應10 20min,通常儀器設定為IOmin ；11)加注針刺破終止液孔密封薄膜吸取100 μ L的終止液加注至反應孔，在I IOmin內于450nm/630nm雙波長下讀取OD值。(7)檢測結果:當檢測程序運行完畢，可通過計算機上的數據處理軟件分析，最后生成報告單以便查閱；(8)關機:檢測結束后，在儀器關機前，必須啟動清洗循環，這樣可以避免來自溶液中的殘留鹽份在液路中結晶，避免損壞儀器或導致檢測結果無效，清洗完成后，儀器電源自動關閉。 實施例七患者樣本中抗心磷脂抗體Ig(GAM)的檢測應用、結果分析以及檢測的質控采用實施例五的操作方法與程序，使用實施例四所述的試劑盒，可用于定量測定人血清或血漿中的抗心磷脂抗體Ig(GAM)水平。60%以上的憐脂綜合癥患者抗心憐脂抗體檢測陽性，在30% 40%的SLE患者中也可檢測到，但只有三分之一的患者發展為磷脂綜合癥。可根據檢測的結果來輔助臨床診斷，初步判斷患者患病的情況，最終確診應結合臨床表現或其他診斷方法/指標進行綜合考慮。以下為檢測結果的分析:(I)參考值(參考范圍)正常參考值:0 45AU/mL ;檢測一定數量(具有統計學意義)的陰性樣本，結果的平均值加3倍標準偏差(即X+3SD)為參考值的上限。各實驗室可根據實際情況建立適宜的參考范圍。(2)檢測結果的解釋若樣本值> 45AU/mL,提示抗體水平升高,但應結合臨床表現或其他診斷方法/指標進行確診。為了方便臨床應用，可參考如下判斷規則:樣本值<40AU/mL陰性40AU/mL <樣本值< 50AU/mL 可疑樣本值> 50AU/mL 陽性當檢測結果為可疑時，應重新檢測，若仍為可疑，需在2 3周后重新采集樣本檢測。以下是將實施例六的檢測過程重復檢測陽性和陰性質控血清，檢查結果的再現性，獲得如下的結果:
權利要求
1.一種檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置，其特征在于:所述的試劑裝置為長條狀，包括具有八個孔位的基體和位于基體一端的手柄，八個孔位的排列順序從近手柄端開始依次為樣本孔、輔劑孔、酶結合物孔、底物孔、終止液孔、稀釋液孔、反應孔和稀釋孔，樣本孔內盛有待測樣本，輔劑孔供檢測有需要時加入輔助試劑使用，酶結合物孔內盛有酶結合物溶液，底物孔內盛有底物溶液，終止液孔內盛有終止液，稀釋液孔內盛有稀釋液，反應孔為平底且具有高的光通透性，孔內包被有心磷脂和人β 2糖蛋白I組成的抗原，并作為反應容器加注待測的液體樣本和檢測試劑及洗滌液，反應終止后進行吸光度測定，稀釋孔作為樣本稀釋容器，供稀釋樣本時用。
2.根據權利要求1所述的試劑裝置，其特征在于:所述的試劑裝置中，輔劑孔、酶結合物孔、底物孔、終止液孔和稀釋液孔上覆蓋有密封薄膜。
3.根據權利要求1或2所述的試劑裝置，其特征在于:所述的手柄上粘貼有條形碼，該條形碼標識有抗心磷脂抗體檢測試劑及分析裝置的相關信息。
4.根據權利要求3所述的試劑裝置，其特征在于:所述的信息包括檢測項目代碼、檢測試劑生產批號、試劑有效期、定量檢測標準曲線參數、酶聯免疫反應類型、試劑及分析裝置的序列號。
5.根據權利要求1或2所述的試劑裝置，其特征在于:所述試劑裝置還包括若干個支撐柱，所述的支撐柱位于所述試劑裝置中基體的下面，相鄰支撐柱之間間隔有一個以上的孔位。
6.根據權利要求1或2所述的試劑裝置，其特征在于:所述試劑裝置中反應孔由外孔和內孔構成，外孔的底部開有底孔，內孔穿過底孔且與底孔緊配合，外孔和內孔之間留有防溢腔。
7.根據權利要求6所述的試劑裝置，其特征在于:所述試劑裝置中反應孔的內孔包被的心磷脂和人β 2糖蛋白I組成的抗原包括天然的心磷脂和人β 2糖蛋白I或重組的心磷脂和人β2糖蛋白I。
8.一種利用權利要求1-7所述的試劑裝置進行抗心磷脂抗體檢測的方法，其特征在于:所述的方法包括如下的步驟: 1)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本； 2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中； 3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔； 4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中,將樣本進行稀釋； 5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進行進一步的稀釋； 6)從稀釋孔中吸取液體加入反應孔中，25 37°C的條件下，孵育30 60min； 7)用洗滌液對反應孔進行3 5次洗滌后移除液體； 8)從酶結合物孔中吸取酶結合物溶液加入反應孔中，25 37°C的條件下，反應30 60min后移除液體； 9)重復步驟7)； 10)從底物孔中吸取底物溶液加入反應孔中，25 37°C的條件下，反應10 20min； 11)從終止液孔中吸取終止液加入反應孔中，I IOmin內于450nm讀取OD值，或選擇雙波長法測定，波長范圍在620nm 690nm。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟: 1)在所述的樣本孔中加入未稀釋的樣本，體積至少為樣本孔容量的1/4； 2)從稀釋液孔中吸取稀釋液加入稀釋孔中，吸取的量為孔內液體總量的7/10以上； 3)移除稀釋液孔中的剩余液體，根據預期稀釋倍數從稀釋孔中吸取部分液體回稀釋液孔； 4)從樣本孔中吸取樣本加入稀釋液孔中，將樣本進行稀釋，稀釋倍數為I 10倍； 5)從稀釋液孔中吸取液體加入稀釋孔中，將樣本進行進一步的稀釋，稀釋倍數為I 100 倍； 6)從稀釋孔中吸取液體加入反應孔中，25 37°C的條件下，孵育30 60min； 7)用洗滌液對反應孔進行3 5次洗滌后移除液體； 8)從酶結合物孔中吸取酶結合物溶液加入反應孔中，25 37°C的條件下，反應30 60min后移除液體； 9)重復步驟7)；10)從底物孔中吸取底物溶液加入反應孔中，25 37°C的條件下，反應10 20min； 11)從終止液孔中吸取終止液加入反應孔中，I IOmin內于450nm讀取OD值，或選擇雙波長法測定，波長范圍在620nm 690nm。
10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步驟: 1)在所述的樣本孔中加入樣本80 150μ L ; 2)用精密加液器從稀釋液孔中吸取360μ L液體到稀釋孔中； 3)移除稀釋液孔中的剩余液體，從稀釋孔中吸取ISOyL液體回稀釋液孔； 4)用精密加液器從樣本孔中吸取20μ L液體到稀釋液孔中，樣本10倍稀釋； 5)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體20yL到稀釋孔中，樣本100倍稀釋； 6)用精密加液器從稀釋液孔中吸取液體100μ L到反應孔中，25 37°C下，孵育60min后移除液體； 7)用洗滌液對反應孔進行3 5次洗滌后移除液體； 8)用精密加液器從酶結合物孔中吸取100μ L辣根過氧化物酶標記的抗體酶結合物溶液至反應孔進行反應，25 37°C下，反應30min后移除液體； 9)重復步驟7)； 10)用精密加液器從底物孔中吸取IOOyL的TMB底物溶液至反應孔中反應10 15min ； 11)用精密加液器從終止液孔中吸取100μ L的終止液加注至反應孔中，I IOmin內于450nm和630nm雙波長條件下進行檢測，讀取OD值。
全文摘要
本發明申請公開一種檢測抗心磷脂抗體的試劑裝置及其方法，所述的試劑裝置為長條狀，包括具有八個孔位的基體和位于基體一端的手柄，八個孔位的排列順序從近手柄端開始依次為樣本孔、輔劑孔、酶結合物孔、底物孔、終止液孔、稀釋液孔、反應孔和稀釋孔。本發明申請基于酶聯免疫檢測的原理，利用上述的試劑裝置對抗心磷脂抗體進行檢測，是一種獨立的、單人份的分析檢測方法，并且可以與相應的特定分析儀器配合使用，在檢測過程中，用全自動的精密加液器來加注檢測試劑或樣本，具有操作自動化，加量精確，檢測結果的準確度和精密度高的優點，具有廣闊的應用前景。
文檔編號G01N33/543GK103185785SQ20111045397
公開日2013年7月3日 申請日期2011年12月30日 優先權日2011年12月30日
發明者胡德明, 劉清波, 何林, 陽輝 申請人:深圳市亞輝龍生物科技有限公司