專利名稱：一種快速測定曲或酒醅或發酵醪中氨基甲酸乙酯的方法
技術領域：
一種針對固態發酵物曲或酒醅或發酵醪中氨基甲酸乙酯的快速檢測方法。具體步驟涉及應用超聲萃取及頂空固相微萃取與氣相色譜-質譜聯用技術檢測固態發酵物中氨基甲酸乙酯的方法，屬于分析檢測技術領域。
背景技術：
存在于固態發酵物中的氨基甲酸乙酯(Ethyl carbamate，簡稱EC)含量甚微，大多在幾十μ g/L到幾百μ g/L。在有關白酒酒曲和酒醅的處理方法中，預處理方法都是采用超聲萃取，本發明將傳統的預處理方法與最先進的頂空固相微萃取與氣相色譜-質譜檢測用于固態發酵物的定量分析。
發明內容
本發明的目的是提供一種簡單快速測定固態發酵物中EC的方法。本發明的技術方案一種快速測定固態發酵物曲、酒醅或發酵醪中氨基甲酸乙酯 EC的方法，對固態發酵物進行超聲萃取，離心取上清液置于頂空瓶中，加入內標溶液PC，再加入氯化鈉飽和，旋緊瓶蓋，插入萃取頭攪拌吸附，萃取富集EC，再用氣相色譜-質譜聯用技術進行定量分析；步驟為
(1)超聲萃取取10g固態發酵物，加入20 mL實驗專用水，浸泡30 min，超聲萃取30 min,離心取上清；
(2)頂空固相微卒取吸取上述超聲卒取后上清液8mL直于20 mL的頂空瓶中，加入 5 μ L乙醇配制的內標溶液PC，加入3 g氯化鈉，旋緊瓶蓋，插入萃取頭，在50-70°C下250 rpm恒溫攪拌萃取30-60 min ；
(3)氣相色譜-質譜聯用檢測萃取完畢后將萃取頭取出，插入氣相色譜進樣口250°C 熱解吸5 min,毛細管柱為DB-WAX或HP-5，載氣為He，流速2 mL/min ;不分流進樣；程序升溫50°C恒溫2 min,以5°C /min的速度升溫至170°C，再以10°C /min的速度升溫至 230°C，保持5 min ;MS條件為EI電離源，電子能量70 eV，離子源溫度230 ° C，掃描范圍 35. 00^350. 00 amu, SIM模式特征離子62 ;通過將樣品和標準品的保留時間對比來確認目標物EC以及內標物PC峰；
DB-WAX 毛細管柱為60 或 30 mXO. 25 mm i. d. XO. 25 μ m ;
HP-5 毛細管柱為60 或 30mX0. 25 mm i. d. XO. 25 μ m ;
(4)標準曲線的建立制作標準曲線所用的一系列EC濃度的溶液，先用EC標準品和色譜純無水乙醇配制而成的高濃度EC溶液作為儲藏液，其他濃度梯度EC溶液均用儲藏液逐步稀釋所得；將上述稀釋后的EC溶液加入到實驗專用水中，加入內標溶液PC，頂空固相微萃取富集，最后進行GC-MS定量檢測，以EC與PC峰面積之比為橫坐標，EC與PC的濃度比為縱坐標,繪制標準曲線；各項參數見表I。清液，然后用頂空固相微萃取技術富集上清液中的EC，再用氣相色譜-質譜聯用進行定性定量分析，根據樣品中EC/PC的面積比，對照標準曲線計算樣品中EC的含量。所述萃取頭為PDMS、PA、PDMS/DVB、或 DVB/CAR/PDMS。表I EC定量方法的線性及檢測限
權利要求
1.一種快速測定固態發酵物曲、酒醅或發酵醪中氨基甲酸乙酯EC的方法，其特征在于對固態發酵物進行超聲萃取，離心取上清液置于頂空瓶中，加入內標溶液氨基甲酸丙酯PC， 再加入氯化鈉飽和，旋緊瓶蓋，插入萃取頭攪拌吸附，萃取富集EC，再用氣相色譜-質譜聯用技術進行定量分析；步驟為(1)超聲萃取取10g固態發酵物，加入20 mL實驗專用水，浸泡30 min，超聲萃取30 min,離心取上清；所述實驗專用水為超純水煮沸5-10min冷卻；(2)頂空固相微卒取吸取上述超聲卒取后上清液8mL直于20 mL的頂空瓶中，加入 5 μ L乙醇配制的內標溶液PC，加入3 g氯化鈉，旋緊瓶蓋，插入萃取頭，在50-70°C下250 rpm恒溫攪拌萃取30-60 min ；(3)氣相色譜-質譜聯用檢測萃取完畢后將萃取頭取出，插入氣相色譜進樣口250°C 熱解吸5 min,毛細管柱為DB-WAX或HP-5，載氣為He，流速2 mL/min ;不分流進樣；程序升溫50°C恒溫2 min,以5°C /min的速度升溫至170°C，再以10°C /min的速度升溫至 230°C，保持5 min ;MS條件為EI電離源，電子能量70 eV，離子源溫度230 ° C，掃描范圍 35. 00^350. 00 amu, SIM模式特征離子62 ;通過將樣品和標準品的保留時間對比來確認目標物EC以及內標物PC峰；DB-WAX 毛細管柱為60 或 30 mXO. 25 mm i. d. XO. 25 μ m ;HP-5 毛細管柱為60 或 30mX0. 25 mm i. d. XO. 25 μ m ;(4)標準曲線的建立制作標準曲線所用的一系列EC濃度的溶液，先用EC標準品和色譜純無水乙醇配制而成的高濃度EC溶液作為儲藏液，其他濃度梯度EC溶液均用儲藏液逐步稀釋所得；將上述稀釋后的EC溶液加入到實驗專用水中，加入內標溶液PC，頂空固相微萃取富集，最后進行GC-MS定量檢測，以EC與PC峰面積之比為橫坐標，EC與PC的濃度比為縱坐標,繪制標準曲線；(5)酒曲、酒醅或發酵醪樣品測定對樣品采用浸泡、超聲萃取預處理，離心后取上清液，然后用頂空固相微萃取技術富集上清液中的EC，再用氣相色譜-質譜聯用進行定性定量分析，根據樣品中EC/PC的面積比，對照標準曲線計算樣品中EC的含量。
2.根據權利要求I所述的方法，其特征在于所述萃取頭為PDMS、PA、PDMS/DVB、或DVB/ CAR/PDMS。
全文摘要
本發明公開了一種快速測定固態發酵物(曲或者酒醅或發酵醪)中氨基甲酸乙酯EC的方法，采用超聲萃取，頂空-固相微萃取技術富集固態發酵物中的氨基甲酸乙酯，無需繁瑣的預處理過程及有機溶劑，再用氣相色譜-質譜聯用技術進行定量檢測，對照標準曲線計算固態發酵物中的EC含量。本發明建立的方法能夠快速檢測并定量固態發酵物中的氨基甲酸乙酯，檢測限低至1.16μg/L，線性相關系數大于0.99，回收率為77%-119%，相對標準偏差0.91%-13.63%。本方法采用以往白酒酒曲和酒醅的常用處理方法——超聲萃取，結合先進的定量檢測技術HS-SPME，用于固態發酵物中氨基甲酸乙酯的定量檢測分析。
文檔編號G01N30/02GK102608226SQ20111042738
公開日2012年7月25日 申請日期2011年12月20日 優先權日2011年12月20日
發明者徐巖, 范文來 申請人:江南大學