專利名稱：測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷d的方法
技術領域：
本發明涉及測定卷煙及主流煙氣粒相物中中藥有效成分的方法，具體涉及一種測定卷煙及主流煙氣粒相物中中藥桔梗提取物有效成分的方法。
背景技術：
隨著全球性控煙運動的不斷推進，社會公眾對于吸煙與健康問題日益關注。桔梗具有宣肺、祛痰、利咽、排膿的作用，目前，部分卷煙已通過添加中藥桔梗提取物來降低吸煙引起的危害。而中藥功效與其主要的有效成分密切相關，中藥桔梗的有效成分是桔梗皂苷D，該有效成分的含量很低，尤其是在燃燒之后，這些有效成分可能經熱裂解、化學反應等產生變化，使卷煙主流煙氣中的含量更低，故對中藥材有效成分的進行檢測有一定意義。現有的桔梗皂苷D的分析方法主要是高效液相色譜法，高效液相色譜法檢測器靈敏度低、自身抗干擾能力弱，在分析低含量樣品時，易出現定量不準確或無法定量的問題，人們希望能有一種靈敏度高、抗干擾能力強的測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法。
發明內容
本發明的目的是針對現有技術中存在的不足之處，提供一種靈敏度高、抗干擾能力強，能快速、準確定量分析桔梗皂苷D的測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法。本發明的目的是通過以下技術方案予以實現的。一種測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:包括以下步驟:
(1)對于卷煙:將卷煙在22±1°C、相對濕度60±2%的條件下平衡48小時后，測定50支經過平衡卷煙的平均質量和平均吸阻，按照平均質量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支；
(2)卷煙煙絲中桔梗皂苷D的提取:取按步驟(I)挑選出的5-20支卷煙煙絲于玻璃容器中，加入50ml-150ml的醇作為提取溶劑，對整個容器稱重，提取出桔梗皂苷D，用醇補足重量，過濾后即可進樣分析；
(3)卷煙主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的提取:在吸煙機上，使用92mm的玻璃纖維濾片，捕集按步驟(I)挑選出的10-20支卷煙主流煙氣的粒相物，放置3-5min后取出濾片，將濾片置于玻璃容器中，加入50-150ml的醇作為提取溶劑，對整個容器稱重，提取出桔梗皂苷D，用醇補足重量，過濾后即可進樣分析；
(4)對步驟(2)和步驟(3)所得樣品進行超高效液相色譜-串聯質譜分析。步驟(4)所述超高效液相色譜-串聯質譜分析中，色譜條件:分析柱=WatersAcquity UPLC BEH C18 (1.7um,2.1 X 100mm);流動相:A 相為添加了 0.1%-0.3% 有機酸 I的水溶液，B相為乙腈，梯度洗脫；流速:0.25ml/min ;柱溫30°C ；
質譜條件:根據桔梗皂苷D的質譜碎裂規律，選擇串聯質譜的特定掃描模式進行分析，具體參數如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:6000C ;離子噴霧電壓:_4200V。步驟(2)和步驟(3)所述提取過程為超聲波提取，震蕩提取或浸泡提取。步驟(2)和步驟(3)所述提取溶劑中的醇為包括一個、二個或三個碳原子的一元
醇或多元醇。所述色譜條件中流動相所用的有機酸I為包括一個、二個或三個碳原子的一元有機酸或多元有機酸；所述的質譜條件中特定掃描模式為全掃描模式、中性丟失掃描模式、多反應監測掃描模式。本發明的有益效果是:本發明能夠有效地將卷煙煙絲及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D完全提取，然后經過超高效液相色譜分析，串聯質譜的特定掃描模式分析，從而實現桔梗皂苷D的快速、準確定量分析。本發明的方法不僅可以測定諸如卷煙煙絲及主流煙氣粒相物這樣的復雜體系中桔梗皂苷D含量，而且靈敏度高、選擇性強、準確性好、操作簡便快速。
具體實施例方式以下將結合具體的優選實施例對本發明作進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限于這些說明。對于本發明所屬技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下做出若干替代或明顯變型，而且性能或用途相同，都應當視為屬于本發明的保護范圍。實施例1。a、對于卷煙:將卷煙在(22±1) °C、相對濕度(60±2)%的條件下平衡48小時后，測定50支經過平衡卷煙的平均質量和平均吸阻，按照平均質量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支。b、卷煙煙絲中桔梗皂苷D的提取:取10支卷煙煙絲于250ml的具塞錐形瓶中，用移液管準確加入IOOml甲醇，對整個容器稱重，在常溫下，在超聲功率350W和超聲波頻率為70KHz下超聲30min，靜置5min，用甲醇補足重量，搖勻后過濾待測。C、對所得樣品進行超高效液相色譜-串聯質譜分析:
1.色譜條件:分析柱:ffaters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 u m, 2.1 X 100mm);流動相:A相為0.2%的乙酸水溶液，B相為乙腈，梯度條件:0min，A: B (85%: 15%) ；4min, A: B(75%: 25%) ；10min, A: B (60%: 40%) ；10.lmin, A: B (0%: 100%) ；12min, A: B(0%: 100%)； 12.lmin,A: B (85%: 15%)；15min,A: B (85%: 15%);流速:0.25ml/min ;柱溫30°C。2.質譜條件:采用多反應監測掃描模式進行定量分析，具體參數如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:600°C ;離子噴霧電壓:-4200V。桔梗皂苷D的特征母離子-子離子對如表I所示。實施例2。a、對于卷煙:將卷煙在(22±1) °C、相對濕度(60±2)%的條件下平衡48小時后，測定50支經過平衡卷煙的平均質量和平均吸阻，按照平均質量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支。b、卷煙及主流煙氣粒相物的捕集與處理:使用一張92mm的玻璃纖維濾片，在(22±1) °C、相對濕度(60±2)%條件下，用RM200 二十孔道轉盤式吸煙機捕集20支卷煙主流煙氣。抽吸結束后，空吸2 口，取出捕集器，放置3min后取出濾片，移至250ml錐形瓶中，用移液管準確加入IOOml甲醇溶液，對整個容器稱重，超聲萃取30min，靜置2min，用甲醇補
足重量。C、對所得樣品進行超高效液相色譜-串聯質譜分析。1.色譜條件:分析柱:Waters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 U m, 2.1 X 100mm);流動相:A相為0.2%乙酸水溶液，B相為乙腈，梯度條件:0min，A: B (85%: 15%) ；4min,A: B (75%: 25%)；10min,A: B (60%: 40%)；10.lmin,A: B (0%: 100%)；12min,A: B(0%: 100%)； 12.lmin,A: B (85%: 15%)；15min,A: B (85%: 15%);流速:0.25ml/min ;柱溫30°C ；
2.質譜條件:采用多反應監測掃描模式進行定量分析，具體參數如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:6000C ;離子噴霧電壓:-4200V。桔梗皂苷D的特征母離子-子離子對如表I所示。實施例3。a、對于卷煙:將卷煙在(22±1) °C、相對濕度(60±2)%的條件下平衡48小時后，測定50支經過平衡卷煙的平均質量和平均吸阻，按照平均質量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支。b、卷煙煙絲中桔梗皂苷D的提取:取10支卷煙煙絲于250ml的具塞錐形瓶中，用移液管準確加入IOOml異丙醇，以150轉/分震蕩30分鐘，靜置5min后取續濾液待測。C、對所得樣品進行超高效液相色譜-串聯質譜分析:
1.色譜條件:分析柱:ffaters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 u m, 2.1 X 100mm);流動相:A相為0.2%的乙酸水溶液，B相為乙腈，梯度條件:0min，A: B (85%: 15%) ；4min, A: B(75%: 25%) ；10min, A: B (60%: 40%) ; 10.lmin, A: B (0%: 100%) ；12min, A: B(0%: 100%)； 12.lmin,A: B (85%: 15%)；15min,A: B (85%: 15%);流速:0.25ml/min ;柱溫30°C。2.質譜條件:采用多反應監測掃描模式進行定量分析，具體參數如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:600°C ;離子噴霧電壓:-4200V。桔梗皂苷D的特征母離子-子離子對如表I所示。實施例4。a、對于卷煙:將卷煙在(22±1) °C、相對濕度(60±2)%的條件下平衡48小時后，測定50支經過平衡卷煙的平均質量和平均吸阻，按照平均質量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支。b、卷煙及主流煙氣粒相物的捕集與處理:使用一張92mm的玻璃纖維濾片，在(22±1) °C、相對濕度(60±2)%條件下，用RM200 二十孔道轉盤式吸煙機捕集20支卷煙主流煙氣。抽吸結束后，空吸2 口，取出捕集器，放置3min后取出濾片，移至250ml錐形瓶中，用移液管準確加入IOOml異丙醇，以150轉/分震蕩30分鐘，靜置2min后取續濾液待測。C、對所得樣品進行超高效液相色譜-串聯質譜分析。1.色譜條件:分析柱:Waters Acquity UPLC BEH C18 (1.7 U m, 2.1 X 100mm);流動相:A相為0.2%乙酸水溶液，B相為乙腈，梯度條件:0min，A: B (85%: 15%) ；4min,A: B (75%: 25%)；10min,A: B (60%: 40%)；10.lmin,A: B (0%: 100%)；12min,A: B(0%: 100%)； 12.lmin,A: B (85%: 15%)；15min,A: B (85%: 15%);流速:0.25ml/min ;柱溫30°C ；
2.質譜條件:采用多反應監測掃描模式進行定量分析，具體參數如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:6000C ;離子噴霧電壓:-4200V。桔梗皂苷D的特征母離子-子離子對如表I所示。表1:桔梗皂苷D在MRM模式下質譜分析參數。
權利要求
1.一種測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)對于卷煙:將卷煙在22±1°C、相對濕度60±2%的條件下平衡48小時后，測定50支經過平衡卷煙的平均質量和平均吸阻，按照平均質量±0.0lg和平均吸阻±49Pa挑選煙支； (2)卷煙煙絲中桔梗皂苷D的提取:取按步驟(I)挑選出的5-20支卷煙煙絲于玻璃容器中，加入50ml-150ml的醇作為提取溶劑，對整個容器稱重，提取出桔梗皂苷D，用醇補足重量，過濾后即可進樣分析； (3)對步驟(2)所得樣品進行超高效液相色譜-串聯質譜分析。
2.根據權利要求1所述的一種測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:所述步驟(2)為卷煙主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的提取:在吸煙機上，使用92mm的玻璃纖維濾片，捕集按步驟(I)挑選出的10-20支卷煙主流煙氣的粒相物，放置3-5min后取出濾片，將濾片置于玻璃容器中，加入50-150ml的醇作為提取溶劑，對整個容器稱重，提取出桔梗皂苷D，用醇補足重量，過濾后即可進樣分析。
3.根據權利要求1所述的一種測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:步驟(4)所述超高效液相色譜-串聯質譜分析中，色譜條件:分析柱:WatersAcquity UPLC BEH C18 (1.7um,2.1 X 100mm);流動相:A 相為添加了 0.l%-0.3% 有機酸 I的水溶液，B相為乙腈，梯度洗脫；流速:0.25ml/min ;柱溫30°C ； 質譜條件:根據桔梗皂苷D的質譜碎裂規律，選擇串聯質譜的特定掃描模式進行分析，具體參數如下:氣簾氣:10ml/min ;碰撞氣:中；離子源氣1:60ml/min ;離子源氣2:50ml/min ;接口加熱器:開；溫度:6000C ;離子噴霧電壓:_4200V。
4.根據權利要求1或2所述的一種測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:步驟(2)所述提取過程為超聲波提取，震蕩提取或浸泡提取。
5.根據權利要求1或2所述的一種測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:步驟(2)所述提取溶劑中的醇為包括一個、二個或三個碳原子的一元醇或多元醇。
6.根據權利要求3所述的一種測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法，其特征在于:所述色譜條件中流動相所用的有機酸I為包括一個、二個或三個碳原子的一元有機酸或多元有機酸；所述的質譜條件中特定掃描模式為全掃描模式、中性丟失掃描模式、多反應監測掃描模式。
全文摘要
測定卷煙及主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的方法，涉及測定卷煙及主流煙氣粒相物中中藥有效成分的方法。包括以下步驟(1)按平均質量和平均吸阻挑選卷煙；(2)卷煙煙絲中桔梗皂苷D的提取；(3)卷煙主流煙氣粒相物中桔梗皂苷D的提取；(4)對步驟(2)和步驟(3)所得樣品進行超高效液相色譜-串聯質譜分析。本發明的有益效果是本發明的方法不僅可以測定諸如卷煙煙絲及主流煙氣粒相物這樣的復雜體系中桔梗皂苷D含量，而且靈敏度高、選擇性強、準確性好、操作簡便快速。
文檔編號G01N30/88GK103163262SQ20111042669
公開日2013年6月19日 申請日期2011年12月19日 優先權日2011年12月19日
發明者郭磊, 索衛國, 蔡繼寶, 黃衛東, 李福龍 申請人:江西中煙工業有限責任公司