專利名稱：一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法
技術領域：
本發明涉及中藥成分的檢測方法，具體涉及一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法。
背景技術：
中藥護骨膠囊由何首烏、淫羊藿苷、熟地、龜甲、巴戟天、杜仲、續斷、骨碎補、當歸、 山藥等中藥材制成，具有補腎益精之功。護骨膠囊用于治療中老年人腎精虧虛證所出現的腰脊疼痛、酥軟無力、不能持重、下肢痿弱、步履艱難，或足跟痛、面色黯淡、發脫、性欲減退、 頭暈耳鳴、舌淡紅苔薄白、舌紅苔薄白；而骨質疏松患者通常出現上述癥狀。護骨膠囊為中藥復方制劑，關于有效成分檢測的原標準僅分別檢測何首烏、淫羊藿苷、熟地等單一成分。 而且在了解護骨膠囊的制備工藝的過程中，我們發現護骨膠囊現有質量標準檢測有效成分不全面，且操作繁瑣，不能滿足質量監控的要求。
發明內容
本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，本發明所提供的護骨膠囊的有效成分的檢測方法能同時對護骨膠囊的多種中藥成分進行定量檢測，檢測成分全，操作簡單，能滿足質量監控的要求。為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案
一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，所述護骨膠囊的中藥組方為何首烏、淫羊藿、熟地黃、龜甲、巴戟天、杜仲、續斷、骨碎補、當歸和山藥，其特征在于所述護骨膠囊的有效成分的檢測方法是利用多波長的高效液相色譜法檢測護骨膠囊中的各種有效成分，具體的步驟是
a、配制待檢樣品溶液取護骨膠囊內容物，用溶劑配制成含藥物％ig/ml 20mg/ml的待檢樣品溶液；
b、配制混合對照品溶液取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、阿魏酸、 淫羊藿苷、綠原酸、柚皮苷混合后用溶劑配制成各成分濃度均為1 μ g/ml 200 μ g/ml的對照品溶液；
C、然后將待檢樣品溶液和混合對照品溶液分別按以下方法進行高效液相色譜檢測 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱填料，按進樣量為1 μ L 20 μ L進樣，柱溫為 10°C 40°C，用由F相、G相和H相組成的流動相以0. 3ml/min 1. 5ml/min的流速并按表 1的配比進行梯度洗脫，同時采用檢測波長為沈7歷 273nm、280 ^6nm、317nm 323nm 和322nm MSnm的紫外光多波長檢測，獲得待檢樣品溶液和混合對照品溶液的高效液相色譜表1流動相中F相、G相和H相的配比表
權利要求
1.一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，所述護骨膠囊的中藥組方為何首烏、淫羊藿、熟地黃、龜甲、巴戟天、杜仲、續斷、骨碎補、當歸和山藥，其特征在于所述護骨膠囊的有效成分的檢測方法是利用多波長的高效液相色譜法檢測護骨膠囊中的各種有效成分，具體的步驟是a、配制待檢樣品溶液取護骨膠囊內容物，用溶劑配制成含藥物％ig/ml 20mg/ml的待檢樣品溶液；b、配制混合對照品溶液取2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、阿魏酸、 淫羊藿苷、綠原酸、柚皮苷混合后用溶劑配制成各成分濃度均為1 μ g/ml 200 μ g/ml的對照品溶液；C、然后將待檢樣品溶液和混合對照品溶液分別按以下方法進行高效液相色譜檢測以十八烷基硅烷鍵合硅膠為色譜柱填料，按進樣量為1 μ L 20 μ L進樣，柱溫為 IO0C- 40°C，用由F相、G相和H相組成的流動相以0. 3ml/min 1. 5ml/min的流速進行梯度洗脫，同時采用檢測波長為267nm 273nm、280 ^6nm、317nm 323nm和322nm 328nm的紫外光多波長檢測，獲得待檢樣品溶液和混合對照品溶液的高效液相色譜圖；d、將待檢樣品溶液的高效液相色譜圖與混合對照品溶液的高效液相色譜圖比較，與混合對照品溶液的高效液相色譜圖中相應成分的保留時間相同的峰即是與該成分相同物質的特征峰，并根據峰面積按外標法計算含量；其中，所述梯度洗脫步驟為0分鐘，流動相中F相的體積百分比為5% 20%，流動相中 G相的體積百分比為90% 60%，流動相中H相的體積百分比為5% 20% ；2分鐘 7分鐘， F相為5% 20%，G相為90% 60%，H相為5% 20% ；5分鐘 14分鐘，F相為7% 30%，G 相為86% 40%, H相為7% 30% ； 10分鐘 23分鐘，F相為11% 35%, G相為78% 30%, H相為11% 35% ；15分鐘 35分鐘，F相為15% 40%, G相為70% 20%, H相為15% 40% ；20分鐘 55分鐘，F相為20% 45%，G相為60% 10%，H相為20% 45% ；其中，以上百分比均為體積百分比；其中，所述混合對照品溶液的高效液相色譜圖中各峰依次為綠原酸、2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷、阿魏酸、柚皮苷、淫羊藿苷的特征峰。
2.根據權利要求1所述的一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，其特征在于所述配制待檢樣品溶液和混合對照品溶液所用的溶劑可為10% 95%的乙醇、 10% 100%的甲醇或者是與流動相相同的溶劑。
3.根據權利要求1所述的一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法， 其特征在于所述流動相的F相是甲醇；所述流動相的H相是乙腈；所述流動相的G相是 0. 1% 2%的醋酸。
4.根據權利要求3所述的一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，其特征在于所述G相的制備方法是往分析純的冰醋酸中加入水配制成ο. 1% m的醋酸。
5.根據權利要求1所述的一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，其特征在于所述梯度洗脫步驟為0分鐘，流動相中F相的體積百分比為7% 15%，流動相中 G相的體積百分比為86% 70%，流動相中H相的體積百分比為7% 15% ；3分鐘 6分鐘， F相為7% 15%，G相為86% 70%，H相為7% 15% ；6分鐘 12分鐘，F相為9% 20%，G 相為82% 60%, H相為9% 20% ；12分鐘 20分鐘，F相為14% 25%, G相為72% 50%,H相為14% 25% ；20分鐘 30分鐘，F相為20% 30%，G相為60% 40%，H相為20% 30% ；30分鐘 45分鐘，F相為25% ；35%，G相為50% 30%，H相為25% ；35% ；其中，以上百分比均為體積百分比。
6.根據權利要求5所述的一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，其特征在于所述梯度洗脫步驟為0分鐘，流動相中F相的體積百分比為10%，流動相中G相的體積百分比為80%，流動相中H相的體積百分比為10% ；5分鐘，F相為10%，G相為80%，H 相為10% ；8分鐘，F相為13%，G相為74%，H相為13% ；15分鐘，F相為17%，G相為66%，H相為17% ；25分鐘，F相為25%, G相為50%, H相為25% ；35分鐘，F相為30%, G相為40%, H相為30% ；其中，以上百分比均為體積百分比。
7.根據權利要求1所述的一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，其特征在于所述紫外光多波長檢測的檢測波長為270nm、283nm、320nm、325nm。
8.根據權利要求1所述的一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，其特征在于所述流動相的流速為0. 8 ml/min。
9.根據權利要求1所述的一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，其特征在于所述色譜柱柱溫為30°C。
全文摘要
本發明涉及中藥成分的檢測方法，具體涉及一種防治骨質疏松中藥護骨膠囊的有效成分的檢測方法，其是利用多波長的高效液相色譜法檢測護骨膠囊中的有效成分，具體步驟是a、配制待檢樣品溶液；b、配制混合對照品溶液；c、將待檢樣品溶液和混合對照品溶液分別進行高效液相色譜檢測；d、比較待檢樣品溶液的高效液相色譜圖與混合對照品溶液的高效液相色譜圖。本發明的檢測方法可以同時檢測出護骨膠囊中綠原酸、2,3,5,4’-四羥基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、阿魏酸、柚皮苷、淫羊藿苷這五種有效成分及其含量；本發明在檢測護骨膠囊的有效成分時，不需制備以上五種成分的各標準品的高效液相色譜圖，可節省時間和試劑；本發明的方法簡便、精密度高、重現性好。
文檔編號G01N30/88GK102507825SQ20111033977
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月1日 優先權日2011年11月1日
發明者宋麗軍, 曾昭利, 趙文昌 申請人:東莞萬成制藥有限公司, 廣東醫學院