專利名稱：一種高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種色譜檢測方法，具體涉及一種高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法。
背景技術：
高效液相色譜法是儀器分析領域被普遍使用的方法，它通過被分析物和色譜填料的各種相互作用關系實現分離并利用被分析物的物理或化學性質實現高精度的定性定量分析。目前廣泛應用于化學、化工、高分子、生物、食品、醫藥等領域。抗壞血酸是一種水溶性維生素，水果和蔬菜中含量豐富。在氧化還原代謝反應中起調節作用，缺乏它可引起壞血病。但是抗壞血酸在水產品中含量的研究較少，有文獻用滴定法對其含量做了初步的探究。本發明以條斑紫菜為研究對象，利用高效液相色譜法準確快速測定其中的抗壞血酸的含量。
發明內容
本發明的目的在于提供了一種高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法，從而準確測定其含量，方法操作簡單、靈敏度高、重現性好。為了實現上述目的本發明采用如下技術方案高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法，其特征在于包括以下步驟(1)條斑紫菜中抗壞血酸的制備提取取新鮮的條斑紫菜若干，加入0. Olmol/L磷酸二氫鉀溶液，勻漿，0. 20-0. 24ym微孔濾膜過濾，待測；(2)配制抗壞血酸的標準溶液，并制作標準曲線；(3)高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量。所述的高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法，其特征在于所述的高效液相色譜法色譜條件為色譜柱AQ-C18，250X4. 6mm, 5 μ m ；流動相0. 01mol/L磷酸二氫鉀(PH2.5)-甲醇(95 5，V/V)；檢測器波長為265nm ；流速為lml/min，進樣體積為 2(^1^，柱溫251。本發明的有益效果方法簡單，檢測精確，尤其是所選色譜柱及流動相能實現樣品更好的分析效果。
圖1為抗壞血酸標準工作曲線。圖2為抗壞血酸標準品色譜圖。
具體實施例方式實施例1 高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法，其特征在于包括以下步驟(1)條斑紫菜中抗壞血酸的制備提取取新鮮的條斑紫菜若干，加入0. Olmol/L磷酸二氫鉀溶液，勻漿，0. 20-0. 24ym微孔濾膜過濾，待測；(2)配制抗壞血酸的標準溶液，并制作標準曲線；(3)高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量。所述的高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法，其特征在于所述的高效液相色譜法色譜條件為色譜柱AQ-C18，250X4. 6mm, 5 μ m ；流動相0. 01mol/L磷酸二氫鉀(PH2.5)-甲醇(95 5，V/V)；檢測器波長為265nm ；流速為lml/min，進樣體積為 2(^1^，柱溫251。實施例2 本發明的具體實驗方案1儀器與試劑1. 1 儀器皖儀LC3000B高效液相色譜儀，配備UV3000紫外檢測器和LCS3000Q液相色譜工作站；勻質器。AQ-C18，250X4. 6mm，5ym色譜柱。1. 2材料試劑抗壞血酸標準品(純度>98%)；新鮮條斑紫菜(采自黃海海域)；甲醇(HPLC 級)；超純水；磷酸二氫鉀(分析純)；0. 22 μ m微孔濾膜。流動相配制0. 01mol/L的磷酸二氫鉀溶液，并用磷酸調節pH至2. 5，按照95 5 的體積比將上述溶液與甲醇混合，制成流動相。抗壞血酸母液稱取50mg的抗壞血酸，用0. 01mol/L的磷酸二氫鉀溶液(pH2. 5) 溶解并定容至100ml容量瓶中，制成500μ g/ml的母液，放于冰箱中備用。2實驗步驟2. 1樣品制備取2g新鮮的條斑紫菜切碎，加0. 01mol/L的磷酸二氫鉀溶液(pH2. 5)適量，勻質， 最后定容至100ml容量瓶中，0. 22 μ m微孔濾膜過濾，待測。2. 2定性試驗利用相對保留時間以及標準物質添加法進行定性。比對標準溶液中標準品和樣品供試液在相同的色譜條件下的色譜圖和相對保留時間；在樣品中分別加入適量的標準物質，比較不加標準物質的色譜圖，變高的峰和標準品的位置是一致的。2. 3標準曲線制作分別取抗壞血酸母液0. 1、0· 2,0. 4,0. 6,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5、;3ml，用 0. 01mol/L 的磷酸二氫鉀溶液(PH2. 5)定容至25ml容量瓶中，制成濃度為2 μ g/ml、4 μ g/ml、8 μ g/ml、 12μ g/ml、20 μ g/ml、30 μ g/ml、40 μ g/ml、50 μ g/ml、60 μ g/ml 的一系列溶液，以上述色譜
條件檢測，依次按濃度由高到低的順序進樣(η = 6)，記錄數據。以抗壞血酸濃度為橫坐標， 以平均峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。線性回歸方程為y = 11514X+1858. 2，相關系數為 R2 = 0. 9997抗壞血酸在0. 4 μ g/ml-40 μ g/ml范圍內線性關系良好。2. 4樣品的測定及重復性試驗取上述經處理的樣品溶液，依照上述的色譜條件，分別進樣6次，記錄峰面積。實驗結果見下表
權利要求
1.一種高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法，其特征在于包括以下步驟(1)條斑紫菜中抗壞血酸的制備提取取新鮮的條斑紫菜l-3g，加入O.Olmol/L磷酸二氫鉀溶液(溶液多少ml )，勻漿，0. 20-0. 24ym微孔濾膜過濾，待測；(2)配制抗壞血酸的標準溶液，并制作標準曲線；(3)高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量。
2.根據權利要求1所述的高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法，其特征在于所述的高效液相色譜法色譜條件為色譜柱AQ-C18，250X4. 6mm，5ym ；流動相 0. Olmol/L磷酸二氫鉀-甲醇；檢測器波長為265nm ；流速為lml/min，進樣體積為20 μ L， 柱溫25°C。
全文摘要
本發明公開了一種高效液相色譜法測定條斑紫菜中抗壞血酸含量的方法，本方法采用反向高效液相色譜法，其色譜條件為所用的色譜柱為十八烷基鍵合硅膠為填料的親水柱(AQ),該色譜柱對極性較強的物質有很好的保留，且能用純水做為流動相；色譜流動相為0.01mol/L磷酸二氫鉀(pH2.5)-甲醇(955，V/V)；所用檢測器為紫外檢測器，檢測波長為265nm；流速為1ml/min，進樣體積為20μL，柱溫25℃。本方法可準確方便的測定條斑紫菜中抗壞血酸的含量，具有操作簡單、靈敏度高、重現性好的特點。
文檔編號G01N30/02GK102507757SQ201110310310
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月14日 優先權日2011年10月14日
發明者尹楊青, 裴波 申請人:安徽皖儀科技股份有限公司