專利名稱：一種甲型肝炎病毒IgM抗體膠體金法檢測試劑盒及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種抗體檢測試劑盒及其制備方法，具體涉及一種甲型肝炎病毒IgM 抗體膠體金法檢測試劑盒及其制備方法。
背景技術：
甲型肝炎(h印atitis A，簡稱HA)的病原體是甲型肝炎病毒(HAV)，為直徑27nm 的小RNA病毒(picornavirus)。病毒存在于病人的糞便、血清、膽汁與肝細胞漿中，在體外抵抗力強，60°C加熱4小時不死；能耐受pH 3. 0的環境；在低溫下能長期存活。常用的甲型肝炎血清抗體的檢查方法主要有血球凝集試驗、酶聯免疫試驗、放免試驗等，但由于血球凝集試驗操作復雜、放免具有放射污染等固有的缺陷，酶聯免疫現已成為臨床應用最廣的實驗室檢查方法之一。抗-HAV-IgM是甲肝早期診斷的主要指標。血清IgM的出現與臨床癥狀及生化指標異常的時間一致，1-2個月后抗體滴度和陽性率下降， 3-4個月基本消失。但ELISA法操作復雜、檢測時間長，需要對待測樣品進行稀釋、溫育、分離、洗滌和顯色等操作，大概需要用兩個小時以上。
發明內容
本發明的目的就是針對上述現有技術中的缺陷，提供了一種可以快速定性檢測血清樣本中的甲型肝炎病毒IgM抗體的甲型肝炎病毒IgM抗體膠體金法檢測試劑盒。為了實現上述目的，本發明提供的技術方案為一種甲型肝炎病毒IgM抗體膠體金法檢測試劑盒，包括硝酸纖維素膜檢測線包被的重組抗原HAV-Ag、質控線上包被的羊抗鼠IgG抗體和金標墊上包被的由膠體金標記的鼠抗人IgM單抗，所述重組甲型肝炎病毒抗原濃度大于ang/ml，用SDS-PAGE測定；所述羊抗鼠IgG抗體濃度大于％ig/ml ；所述鼠抗人IgM單抗濃度大于2mg/ml，用SDS-PAGE測定，上樣量在10 μ 1條件下為兩條帶。本發明的另一個目的是提供一種根據所述的甲型肝炎病毒IgM抗體膠體金法檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟(1)反應膜的制備用磷酸鹽緩沖液將重組HAV-Ag稀釋到包被濃度為1. Omg/ml, 將羊抗鼠IgG抗體稀釋成包被濃度為2. Omg/ml，將兩種包被液分別劃到硝酸纖維素膜上， 將已包被的硝酸纖維素膜干燥后保存；(2)鼠抗人IgM單抗金結合物墊的制備將標記濃度為10-23μ g/ml的鼠抗人IgM 單抗與膠體金進行偶聯制得膠體金標記鼠抗人IgM單抗溶液，以轉速為12000r/min離心 40min，棄上清，加入膠體金結合物稀釋液至原體積的1/2，然后用混合液浸泡金標墊，制備成HAV-IgM金結合物墊，將HAV-IgM金結合物墊干燥保存；(3)切割裝配在反應膜所在膠板的上部揭去1. 5cm寬的不干膠紙，粘貼上粗纖維濾紙，使紙的下部壓住反應膜，揭去反應膜下部的0. 9cm的不干膠紙，貼上HAV-IgM金結合物墊，并且金結合物墊的上部壓住反應膜1mm，再揭去金結合物墊下部的的不干膠紙，貼上樣品墊，樣品墊的上部壓住金結合物墊的下部1mm，制成反應板，再用切條機切成4mm試紙條，進行裝卡后，裝入鋁箔袋內制成產品。上述制備方法中，所述步驟⑴和O)的干燥條件為37°C干燥3小時。上述制備方法中，所述步驟O)的鼠抗人IgM單抗的標記濃度為15μ g/ml。。本發明的有益效果為甲型肝炎病毒IgM抗體檢測試劑盒具有快速、簡便、準確和靈敏度高的特點，整個操作時間僅需20分鐘就可以判讀結果。膠體金快速檢測試紙條，以多表位的重組抗原為原料，具有操作更加簡便，成本低廉，特異性好，靈敏度高的特點，可單份檢測，易于普及，對于甲型肝炎病毒IgM的檢測和控制效果明顯。
具體實施例方式一、生產工藝條件的確定1、反應膜包被條件的優化1. 1檢測線包被濃度和膠體金標記鼠抗人IgM稀釋比例的選擇按照確定好的標記條件進行標記，將其體積濃縮至原體積(原體積以膠體金體積計算)的1/10，再以不同的稀釋比例稀釋濃縮液，用稀釋液浸泡金標墊，1.5ml/條，干燥后與以不同檢測線包被濃度，0. 1 μ 1/mm的包被量包被好的HAV-IgM反應膜進行配對，檢測內控血清。實驗方案如表1，實驗結果如表2、3 表 權利要求
1.一種甲型肝炎病毒IgM抗體膠體金法檢測試劑盒，包括硝酸纖維素膜檢測線包被的重組抗原HAV-Ag、質控線上包被的羊抗鼠IgG抗體和金標墊上包被的由膠體金標記的鼠抗人IgM單抗，其特征在于所述重組甲型肝炎病毒抗原濃度大于2mg/ml，用SDS-PAGE測定；所述羊抗鼠IgG抗體濃度大于％ig/ml ；所述鼠抗人IgM單抗濃度大于2mg/ml，用SDS-PAGE測定，上樣量在10 μ 1條件下為兩條帶。
2.根據權利要求1所述的甲型肝炎病毒IgM抗體膠體金法檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)反應膜的制備用磷酸鹽緩沖液將重組HAV-Ag稀釋到包被濃度為1.Omg/ml，將羊抗鼠IgG抗體稀釋成包被濃度為2. Omg/ml，將兩種包被液分別劃到硝酸纖維素膜上，將已包被的硝酸纖維素膜干燥后保存；(2)鼠抗人IgM單抗金結合物墊的制備將標記濃度為10-23μ g/ml的鼠抗人IgM 單抗與膠體金進行偶聯制得膠體金標記鼠抗人IgM單抗溶液，以轉速為12000r/min離心 40min，棄上清，加入膠體金結合物稀釋液至原體積的1/2，然后用混合液浸泡金標墊，制備成HAV-IgM金結合物墊，將HAV-IgM金結合物墊干燥保存；(3)切割裝配在反應膜所在膠板的上部揭去1.5cm寬的不干膠紙，粘貼上粗纖維濾紙，使紙的下部壓住反應膜，揭去反應膜下部的0. 9cm的不干膠紙，貼上HAV-IgM金結合物墊，并且金結合物墊的上部壓住反應膜1mm，再揭去金結合物墊下部的的不干膠紙，貼上樣品墊，樣品墊的上部壓住金結合物墊的下部1mm，制成反應板，再用切條機切成4mm試紙條， 進行裝卡后，裝入鋁箔袋內制成產品。
3.根據權利要求2所述的甲型肝炎病毒IgM抗體膠體金法檢測試劑盒的制備方法，其特征在于所述步驟(1)和(2)的干燥條件為37°C干燥3小時。
4.根據權利要求2所述的甲型肝炎病毒IgM抗體膠體金法檢測試劑盒的制備方法，其特征在于所述步驟(2)的鼠抗人IgM單抗的標記濃度為15 μ g/ml。
全文摘要
本發明公開了一種甲型肝炎病毒IgM抗體膠體金法檢測試劑盒，包括硝酸纖維素膜檢測線包被的重組抗原HAV-Ag、質控線上包被的羊抗鼠IgG抗體和金標墊上包被的由膠體金標記的鼠抗人IgM單抗，所述重組甲型肝炎病毒抗原濃度大于2mg/ml，用SDS-PAGE測定；所述羊抗鼠IgG抗體濃度大于4mg/ml；所述鼠抗人IgM單抗濃度大于2mg/ml，用SDS-PAGE測定，上樣量在10μl條件下為兩條帶。本發明的有益效果為甲型肝炎病毒IgM抗體檢測試劑盒具有快速、簡便、準確和靈敏度高的特點，整個操作時間僅需20分鐘就可以判讀結果。膠體金快速檢測試紙條，以多表位的重組抗原為原料，具有操作更加簡便，成本低廉，特異性好，靈敏度高的特點，可單份檢測，易于普及，對于甲型肝炎病毒IgM的檢測和控制效果明顯。
文檔編號G01N33/531GK102288758SQ20111021723
公開日2011年12月21日 申請日期2011年7月29日 優先權日2011年7月29日
發明者李習榮 申請人:北京中檢安泰診斷科技有限公司