專利名稱：一種用于藥物研究的小鼠模型的構建方法
技術領域：
本發明涉及一種小鼠模型的構建方法，特別涉及一種用于藥物研究的小鼠模型的構建方法，本發明尤其適用于帶有放射性標記藥物研究的小鼠模型的構建。
背景技術：
在現代的各種基礎醫學研究中，為了觀察藥物、新的化合物等的藥效毒理或在疾病發生的病因、病機以及病理的研究中，為了觀察動物機體功能、代謝及形態的變化，通常都需要對實驗動物采用一定的給藥方式，而目前使用最多的是對小鼠進行注射的方法，常見的有小鼠腹腔注射、小鼠靜脈注射、皮下注射給藥、皮內注射給藥、肌肉注射給藥等。其中，腹腔注射是常見的給藥方式，尤其是在麻醉時，其優點是操作簡單，但藥物吸收較慢，易流失；皮下注射給藥、皮內注射給藥藥物吸收速度相對腹腔注射慢，且注射時容易導致藥物外漏；小鼠血管內藥物注射通常通過靜脈進行，小鼠尾靜脈注射是靜脈注射經常使用的一種手段，但尾靜脈較細，注射藥物往往會由于操作的原因不能進入血管或從其中溢出，造成環境的污染，因此該方法對于操作者的技能程度、熟練程度均要求較高，操作繁瑣，而且尾靜脈屬末梢循環，循環較慢，藥物注射入動物體內后分散時間也較慢，不利于藥物的擴散； 肌肉注射給藥的方法，由于小鼠體積小，肌肉較少，因此并不適于對小鼠的注射。另外，為了便于對藥效、毒理或病理的研究，觀察藥物作用的靶點，經常采用放射性同位素對藥物進行標記后，再用于小鼠的注射。由于采用了放射性標記的藥物，對于操作者來說，迫切需要找到一種方法，該方法操作簡便容易，藥物吸收快，且可有效防止藥物的外露，避免對操作者造成危害。
發明內容
為了解決上述技術問題，發明人在積累了大量的經驗基礎上，并結合創造性勞動， 提出了一種用于藥物研究的小鼠模型的構建方法，本發明的一種用于藥物研究的小鼠模型的構建方法，其特征在于，在小鼠麻醉狀態下，采用小鼠體內的下腔靜脈作為給藥部位， 30-60分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進行藥物含量的檢測。具體的包括以下步驟(1)使用麻醉劑將小鼠麻醉；(2)將麻醉好的小鼠固定，沿小鼠腹中線，腹部下剪開表皮0. 5-0. 7公分的開口并向下剪開腹壁；(3)拉開切口并輕輕的將腹腔內的腸道撥向兩側，暴露出脊柱及脊柱旁的下腔靜脈；(4)將所需注射的藥物吸入注射器中，用針頭刺破下腔靜脈緩慢將藥物注射進入下腔靜脈中；(5) 30-60分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進行藥物含量的檢測。
其中，優選的，在步驟(1)中采用腹腔注射的方法注射0. 戊巴比妥鈉0. 1毫升， 20分鐘后將小鼠麻醉；其中，優選的，在步驟O)中沿小鼠腹中線，于腹部下1/3處剪開表皮；其中，優選的，在步驟O)中剪開表皮0.6公分的開口 ；其中，優選的，在步驟中每只小鼠注射藥物總量不超過0. 2毫升；其中，優選的，在步驟中所述的藥物可為放射性標記的藥物；使用本發明方法進行注射40分鐘后，注射藥物便會分散至小鼠全身或要檢測的靶位點。按照以上所述的構建方法得到的小鼠模型在藥物研究中的應用。相較于現有方法，本發明的技術優勢有1、小鼠血管內藥物注射通常通過尾靜脈進行。但尾靜脈較細，難于操作，本發明方法采用小鼠腔靜脈進行注射，相比尾靜脈注射，血管相對較粗，對操作者的操作技能要求相對降低，更容易將藥物注射入小鼠的體內；2、小鼠尾靜脈注射需要對小鼠尾部反復揉搓或者用溫水浸泡使血管充盈，這樣不可避免的對小鼠造成應激性刺激。本發明方法藥物注射在小鼠麻醉狀態下進行，對實驗動物刺激小，能夠避免對實驗動物的應激性刺激，以便于得到穩定的結果；3、小鼠下腔靜脈血管較粗血流量較大，藥物注入后能夠更快的分布于全身各個臟器。傳統的尾靜脈注射末梢循環較慢，藥物注射入動物體內后分散時間也較慢；4、放射性藥物往往具有污染性，小鼠麻醉后下腔靜脈注射能夠保證藥物全部進入血液，在實驗動物體內分布造成的環境污染小。傳統的尾靜脈注射由于血管較細，注射藥物往往會由于操作的原因不能進入血管或從其中溢出，造成環境的污染。本發明通過采用上述方法向小鼠體內注射氚標記脫氧葡萄糖 [3H]-2-DeOXy-glUCOSe，進一步說明了本發明方法的可行性，以及注射效果。氚標記脫氧葡萄糖[3H]-2-DeOXy-gluCOSe，即應用氚替代了脫氧葡萄糖2位點上的氫原子，從而使葡萄糖帶上標記，在組織攝取葡萄糖合成糖原后氚標記的葡萄糖就會留存于組織細胞當中，分離細胞中的氚標記物，并通過液體閃爍儀即可以檢測放射性物質在單位組織中的含量。具體實施方法下面通過具體實施例對本發明做進一步說明，應該理解的是，這些實施例僅用于例證的目的，決不限制本發明的保護范圍。實施例1實驗材料試驗用小鼠品系為ICR品系雌性小鼠，購自黑龍江中醫藥大學實驗動物中心；試驗用戊巴比妥鈉為美國SIGMA公司產品，商品名PENTOBARBITAL SODIUM，貨號 Cat. No. P3761，哈爾濱同城生物試劑公司協助購買；胰島素為生物合成胰島素注射液諾和靈R，購自黑龍江中醫藥大學附屬第一醫院；BD注射器由美國BD公司生產，是一種專門用于胰島素注射的注射器。BD胰島素注射器的特點1.針頭特別幼細；注射無痛，皮膚損傷小 2.直接讀數，刻度準確；避免換算，劑量準確3.固定針頭，沒有死腔，哈爾濱同城生物試劑公司協助購買；氚標記脫氧葡萄糖由PerKin Elmer公司生產的1450型液體閃爍計數器進行測定，貨號是NET 328A001MC,中國同位素公司協助購買。
構建方法小鼠腹腔注射0. 戊巴比妥鈉0. 1毫升，20分鐘后動物麻醉。將麻醉好的小鼠固定于操作臺上。用眼科剪刀，沿小鼠腹中線，腹部下1/3處剪開表皮約0.6公分開口并向下剪開腹壁。用解剖鑷拉開切口并輕輕的將腹腔內的腸道撥向兩側，暴露出脊柱及脊柱旁的下腔靜脈。將15uCi氚標記脫氧葡萄糖([3H]-2-DeOXy-glUCOSe)約15微升， 2IU胰島素體積50微升，兩種藥物混合后加生理鹽水稀釋至100微升，用BD注射器針頭刺破下腔靜脈緩慢將藥物注射進入下腔靜脈中。40分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進行放射性標記物含量的檢測。各組織器官葡萄糖攝取量檢測結果，如表1所示，DPMI值為放射性葡萄糖檢測值， 其余為儀器數據。檢測結果說明，放射性葡萄糖注射后在不同小鼠的各個組織器官中都能夠檢測到，說明此構建方法可行。表1小鼠各個器官組織的放射性葡萄糖檢測值
權利要求
1.一種用于藥物研究的小鼠模型的構建方法，其特征在于，在小鼠麻醉狀態下，采用小鼠的下腔靜脈作為給藥部位，30-60分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后， 進行藥物含量的檢測。
2.按照權利要求1所述的構建方法，其特征在于，具體的包括以下步驟(1)使用麻醉劑將小鼠麻醉；(2)將麻醉好的小鼠固定，沿小鼠腹中線，腹部下剪開表皮0.5-0. 7公分的開口并向下剪開腹壁；(3)拉開切口并輕輕的將腹腔內的腸道撥向兩側，暴露出脊柱及脊柱旁的下腔靜脈；(4)將所需注射的藥物吸入注射器中，用針頭刺破下腔靜脈緩慢將藥物注射進入下腔靜脈中；(5)30-60分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進行藥物含量的檢測。
3.按照權利要求2所述的構建方法，其特征在于步驟(1)中采用腹腔注射的方法注射0. 戊巴比妥鈉0. 1毫升，20分鐘后將小鼠麻醉。
4.按照權利要求2所述的構建方法，其特征在于步驟O)中沿小鼠腹中線，于腹部下 1/3處剪開表皮。
5.按照權利要求2或4所述的構建方法，其特征在于步驟O)中剪開表皮0.6公分的開口。
6.按照權利要求2所述的構建方法，其特征在于步驟中每只小鼠注射藥物總量不超過0.2毫升。
7.按照權利要求2或6所述的構建方法，其特征在于步驟(4)所述的藥物為放射性標記的藥物。
8.按照權利要求2所述的構建方法，其特征在于40分鐘后，將小鼠斷頸處死，取得小鼠各組織器官稱重后，進行藥物含量的檢測。
9.按照1-9任一項權利要求所述的構建方法得到的小鼠模型在藥物研究中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種用于藥物研究的小鼠模型的構建方法，本發明尤其適用于帶有放射性標記藥物研究的小鼠模型的構建。本發明的構建方法，其特征在于，在小鼠麻醉狀態下，采用小鼠下腔靜脈作為給藥部位。本發明的方法具有操作簡便容易，藥物吸收快，可有效防止藥物外露等優點，且給藥30min-60min后，藥物便會分散至小鼠全身或要檢測的靶位點。
文檔編號G01N23/00GK102346155SQ20111019745
公開日2012年2月8日 申請日期2011年7月14日 優先權日2011年7月14日
發明者吳效科, 李威 申請人:吳效科