專利名稱：藏降脂制劑的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及藏降脂制劑，特別是藏降脂膠囊的質量控制方法。
背景技術：
高脂血癥是心腦血管疾病的基本因素，也是高血壓、冠心病、動脈粥樣硬化等病癥明確的一環因素，嚴重威脅人類的健康。降脂藥物的研發一直是醫藥行業的重要課題。高脂血癥主要與膽固醇、動物脂肪攝入過多和脂肪代謝紊亂有關，目前，高脂血癥主要采取飲食療法，以低脂肪低糖食物為主，無效時加用降脂藥治療。藏降脂膠囊記載于國家藥品標準，標準編號WS-10864(ZD-0864)-2002。藏醫認為藏降脂膠囊具有通道血脈，行氣涼血的作用，用于血熱引起的高脂血癥；中醫認為藏降脂膠囊具有活血化痰的作用，用于痰瘀血阻引起的高脂血癥。藏降脂膠囊源于著名藏醫藥學家帝瑪·丹增彭措(1673—？)的《醫著選集》，藏文名為“居日尼阿”，至今已有300余年的臨床應用史，是藏醫用于清血除脂的代表性藥方。《四部醫典》(秘訣部)記載“瘦比肥胖好、滋補要適度，一切內科疾病由消化不良而生”。青海省藏醫藥研究所在原方“居日尼阿”的基礎上，根據《四部醫典》所載原方，科學配伍，不斷改進和完善，研制成藏降脂膠囊，經長期臨床試驗證明藏降脂膠囊組方科學，療效顯著。如今，藏降脂已被認證為青海省高新技術產品。藏降脂膠囊為青海金訶藏藥藥業股份有限公司產品，在原質量標準基礎上增加了薄層色譜法定性鑒別產品中甘青青蘭，該法簡單、方便，專屬性較強，并將原質量標準中薄層掃描含量測定法修訂為高相液相色譜法測含量；增加了大黃中4種主要成分的含量測定，該方法同時測定大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種主要成分。通過改進質量標準，對本品的工藝要求更嚴格，同時質量標準更嚴謹，科學。這些質量控制方法不僅適用于藏降脂膠囊，而且適用于以藏降脂的處方制備的其他劑型的藏降脂類制劑。
發明內容
本發明的目的在于，克服現有技術的不足，提供了一種藏降脂類制劑，尤其是藏降脂膠囊的新的質量檢測方法。其內容如下
本發明藏降脂制劑處方組成藏錦雞兒39.3g、余甘子31.48、短管兔耳草23.58、 紫檀香23. 5g、印度獐牙菜23.5g、訶子23.5g、沙棘膏23.5g、大黃23. 5g、塞北紫堇 23. 5g、甘青青蘭23. 5g、干姜15. 8g。本發明的藏降脂制劑可以為上述處方藥材直接粉碎制成或經提取加工后制成的膠囊劑、顆料劑、濃縮丸、散劑或片劑等劑型，本發明的檢測方法適用于上述但不限于上述藏降脂制劑。本發明膠囊制劑為藏錦雞兒39.3g、余甘子31. 4g、短管兔耳草23. 5g、紫檀香 23. 5g、印度獐牙菜23.5g、訶子23.5g、沙棘膏23. 5g、大黃23. 5g、塞北紫堇23. 5g、甘青青蘭23.5g、干姜15. 8g，以上十一味，粉碎成細粉，混勻，裝入膠囊，制成1000粒，即得。
甘青青蘭的定性鑒別
取產品內容物粉末2、g，加乙醚30ml，超聲處理30min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇 5ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘青青蘭對照藥材0. 5g，加乙醚30ml，超聲處理30min， 濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為甘青青蘭對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述2種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(6(T90°C )-醋酸乙酯-甲醇為展開劑，石油醚(6(T90°C )-醋酸乙酯-甲醇體積份數比為疒10:廣3 :0. 5 1.5展開，取出，晾干，噴以體積份數比為10% 硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。齊墩果酸的定性鑒別
取產品內容物粉末2、g，加甲醇40ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇 5ml溶解，作為供試品溶液。另取齊墩果酸對照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述2種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸為展開劑， 甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸體積份數比為6 18 2^6 0. 25、. 75，展開，取出，晾干，噴以體積份數比為體積份數比為10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中， 在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點。大黃的定性鑒別
取產品內容物粉末廣5g，加甲醇20ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水IOml 溶解，再加鹽酸lml，置水浴中加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20ml， 合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對照藥材0. lg，同法制成對照藥材溶液。再取大黃酸對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液。 照薄層色譜法(《中華人民共和國藥典》2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述3種溶液各6μ1，分別點于同一硅膠H薄層板上，以石油醚(60°C -900C)-甲酸乙酯-甲酸為展開劑， 甲酸乙酯-甲酸體積份數比為疒22 :2 8:0. 5 1.5展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的5個橙黃色熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點；置氨蒸氣熏后，日光下檢視，斑點變為紅色。本發明還提供了通過測定藏降脂制劑中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚，來測定大黃的含量的方法，控制藏降脂制劑的質量。藏降脂膠囊中大黃的含量是采用高效液相色譜法測定大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量確定。大黃的測定方法為
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-體積份數比為0. 1%的磷酸為流動相；甲醇-1%磷酸水溶液體積份數比為80-90:10-20，檢測波長為 430nm。理論板數按大黃素峰計算應不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、 大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、各80ug，大黃素甲醚40ug的溶液，分別精密量取
5上述對照品溶液各anl，混勻，即得(即每Iml中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各 16ug，含大黃素甲醚8ug)。供試品溶液的制備本品研細后，取粉末2g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲20-40 min,放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過， 精密量取取續濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶劑，加體積百分比為8%鹽酸水溶液IOml，超聲2 分鐘，再加三氯甲烷10ml，加熱回流1小時，放冷，置分液漏斗內，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次IOml，合并三氯甲烷液，減壓回收溶液至干，殘渣加甲醇使溶解， 轉移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每粒含大黃以蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚總量計不得少于0. 3mgoHPLC法測定藏降脂膠囊中大黃的含量 1.儀器、試藥和供試樣品
儀器高效液相色譜儀日立L-2100泵，日立檢測器L-MOO檢測器；島津AUW220D電子天平
對照品蘆薈大黃素對照品(批號110795-201007)、大黃酸對照品(批號 110757-200206)、大黃素對照品(110756-200100)、大黃酚對照品(110796-201017)、大黃素甲醚對照品(110758-201013)購自中國藥品生物制品檢定所。樣品藏降脂膠囊(青海金訶藏藥藥業股份有限公司)，生產批號090501、090502、 090503。2.色譜條件選擇
按文獻及藥典中大黃中測定方法，均無法同時測定藏降脂中大黃的5個蒽醌類成分， 單純改變流動相及提取方法均不能達到要求。改用大黃蒽醌類特征吸收峰430nm后，發現藏降脂中大黃的5個蒽醌類成分均得到很好色譜分離，且陰性樣品無干擾。以甲醇-體積百分比為0. 1%的磷酸水溶液為流動相，甲醇-體積百分比為0. 1% 的磷酸水溶液在90:10到70:30均能達到含量檢查要求。3.對照品制備
精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照、 大黃酚對照品各80ug，大黃素甲醚40ug的溶液，分別精密量取上述對照品溶液各anl，混勻，即得。4.供試品制備
本品研細后，取粉末2g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取取續濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶劑，加體積百分比為8%的鹽酸水溶液10ml，超聲2分鐘，再加三氯甲烷10ml， 加熱回流1小時，放冷，置分液漏斗內，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次 10ml，合并三氯甲烷液，減壓回收溶液至干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
5.系統適用性試驗及陰性干擾的考察
在上述色譜條件下，分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照溶液各10 μ 1， 注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果表明，供試品色譜中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚與其相鄰色譜峰的分離度大于1. 5，且陰性對照無干擾。見附
圖1。6.標準曲線的制備和線性關系的考察
精密量取對照品貯備液溶液(蘆薈大黃素；34. 5ug/ml、大黃酸33. 2mg/ml、大黃素 32. 4mg/ml、大黃酚各33. 6ug/ml，含大黃素甲醚 17. 8ug/ml)lml、3 ml,5 ml、8ml、10ml，分別置IOml容量瓶中，無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進樣10 μ 1，以峰面積(A)對對照品濃度(C)進行線性回歸，見表1 表5。表1蘆薈大黃素標準曲線結果
權利要求
1.一種藏降脂制劑的質量檢測方法，其特征在于通過甘青青蘭的定性鑒別、齊墩果酸的定性鑒別、大黃的定性鑒別，及同時測定藏降脂制劑大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量的方法，控制藏降脂制劑的質量。
2.根據權利要求1所述的一種藏降脂制劑的質量檢測方法，其特征在于該方法采用高效液相色譜法，測定大黃中蘆薈大黃素的含量，測定大黃中大黃酸的含量，測定大黃中大黃素的含量，測定大黃中大黃酚的含量，測定大黃中大黃素甲醚的含量。
3.根據權利要求2所述的一種藏降脂制劑的質量檢測方法，其特征在于測定大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的樣品處理方法為a.對照品溶液的制備精密稱取蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品、大黃素甲醚對照品適量，加甲醇分別制成每Iml含蘆薈大黃素對照品、大黃酸對照品、大黃素對照品、大黃酚對照品各80ug，大黃素甲醚40ug的溶液，分別精密量取上述對照品溶液各anl，混勻，即得對照品溶液，其中每Iml中含蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚各16ug，含大黃素甲醚Sug ；b.供試品溶液的制備本品或本品內容物研細后，取粉末1 3g，精密稱定，置具塞的錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5ml，置燒瓶中，揮去溶劑，加體積百分比為8%鹽酸水溶液 10ml，超聲2分鐘，再加三氯甲烷10ml，加熱回流1小時，放冷，置分液漏斗內，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次IOml，合并三氯甲烷液，減壓回收溶液至干，殘渣加甲醇使溶解，轉移至IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
4.根據權利要求1或2所述的一種藏降脂制劑的質量檢測方法，其特征在于測定大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的色譜操作條件為a.色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-體積百分比為0. 1%的磷酸水溶液為流動相，甲醇-體積百分比0. 1%磷酸水溶液的體積份數比為 80-90:10-20 ；檢測波長為430nm ；理論塔板數按大黃素峰計算應不低于3000 ；b.測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定， 即得。
5.根據權利要求1所述的一種藏降脂制劑的質量檢測方法，其特征在于包括下列一種或幾種定性鑒別方法a.甘青青蘭的定性鑒別取產品或產品內容物2 8g，加乙醚30ml，密塞，超聲處理30min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為供試品溶液；另取甘青青蘭對照藥材0. 5g，加乙醚30ml，密塞， 超聲處理30min，濾過，濾液揮干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為甘青青蘭對照藥材溶液；照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VI B試驗薄層色譜法，吸取上述2種溶液各5ul， 分別點于同一硅膠G薄層板上，以沸程6(T90°C石油醚-醋酸乙酯-甲醇為展開劑，沸程 60 90°C石油醚-醋酸乙酯-甲醇的體積份數比為7 10:1 3 :0. 5 1.5展開，取出， 晾干，噴以體積百分比為10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點；b.齊墩果酸的定性鑒別取產品或產品內容物2 8g，加甲醇40ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5ml溶解，作為供試品溶液；另取齊墩果酸對照品，加甲醇制成每Iml含2mg的溶液，作為對照品溶液；照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VI B試驗薄層色譜法，吸取上述 2種溶液各10ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸為展開劑，甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸體積份數比為6 18 :2 6 0. 25 0. 75展開，取出，晾干，噴以體積百分比為10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點；c.大黃的定性鑒別取產品或產品內容物1 5g，加甲醇20ml，超聲處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水IOml溶解，再加鹽酸1ml，置水浴中加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對照藥材 0. lg，同法制成對照藥材溶液；再取大黃酸對照品，加甲醇制成每Iml含Img的溶液，作為對照品溶液；照中華人民共和國藥典2010年版一部附錄VI B試驗薄層色譜法，吸取上述3種溶液各6μ1，分別點于同一硅膠H薄層板上，以沸程60°C -90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸為展開劑，沸程60°C -90°C石油醚-甲酸乙酯-甲酸體積份數比為7 22 =2^8:0. 5 1. 5 ；展開， 取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的5個橙黃色熒光斑點；在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點；置氨蒸氣熏后，日光下檢視，斑點變為紅色。
全文摘要
本發明公開了一種關于藏降脂制劑的質量檢測方法，特別是藏降脂膠囊的質量檢測方法。在原質量標準基礎上增加了薄層色譜法定性鑒別產品中的甘青青蘭這個專屬性較強的鑒別方法，并將原質量標準中薄層掃描法測定大黃酚含量修訂為高相液相色譜法測定總蒽醌含量；該方法同時測定大黃中蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚5種主要成分。經過試驗研究，本發明質量檢測方法中的鑒別方法在樣品的供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，均顯相同顏色的斑點；陰性對照無干擾。用本發明所述的含量測定方法測定藏降脂制劑中的蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量，結果表明，該方法線性關系良好，回收率試驗準確度較高，具有極好的重復性和穩定性，可以準確、嚴密地控制藏降脂制劑的質量。
文檔編號G01N30/90GK102397517SQ20111018860
公開日2012年4月4日 申請日期2011年7月5日 優先權日2011年7月5日
發明者劉玉芹, 宋洋, 張義智, 李麗, 邵成雷, 高英涵 申請人:山東阿如拉藥物研究開發有限公司