專利名稱：氧化酶活性和氧化酶底物濃度的檢測方法
技術領域：
本發明涉及生物技術 領域，特別涉及氧化酶活性和氧化酶底物濃度的檢測方法。
背景技術：
氧化酶是直接以分子氧作為電子受體生成水，催化底物氧化的酶。常見的氧化酶有葡萄糖氧化酶、尿酸氧化酶、乳酸氧化酶和單胺氧化酶等。氧化酶是大部分生物體內不可或缺的物質，決定了生物體內的氧化代謝進程和次生代謝產物的產生于消除，以保證生物體在不同的生長環境下具有不同的適應狀態，其活性對于維持生物體正常代謝具有重要作用。因此，氧化酶活性和氧化酶底物含量的檢測在生物分析和臨床測定中都具有重要意義。酶活性是其對酶底物催化反應能力的表征，酶活性單位為IU，簡寫為U,其定義為=Imin能轉化1 μ mol底物的酶量，即IIU = 1 μ mol/min。申請號為200710067620. 7的中國專利公開了一種單胺氧化酶活性的熒光檢測方法，該方法是以單胺氧化酶水解探針形成熒光物質，測定熒光強度，獲得單胺氧化酶活性數據。但是采用此種方法對其他種類的氧化酶進行測定需要制備不同種類的熒光探針，通用性較低。各種氧化酶雖然作用于不同的底物，但其公共特征為氧化酶氧化底物的同時將氧還原成過氧化氫(H2O2)。根據這一特征，現有的氧化酶活性及氧化酶底物的檢測有采用分光光度法測得，如申請號為200810107036. 4的中國專利公開了一種生成物為H2O2的氧化酶活性檢測方法，其是將氧化酶提取液和顯色液在緩沖溶液中混合，然向混合溶液中加入氧化酶底物，一段時間后采用分光光度法測定波長550nm處光密度值，由此測得氧化酶的濃度。此種方法的通用性雖有所提高，但是分光光度法檢測操作繁瑣且靈敏度不高，由此也影響了測試結果的精準度。
發明內容
本發明解決的技術問題在于提供一種操作簡單、檢測靈敏度高的氧化酶活性檢測方法和氧化酶底物濃度的檢測方法。有鑒于此，本發明提供一種氧化酶活性的檢測方法，包括al)、將待測溶液與氧化酶底物和芳基硼化合物混合，得到含有酚類化合物的中間待測溶液；a2)、采用電化學檢測法檢測所述中間待測溶液中酚類化合物的濃度，根據酚類化合物的濃度計算出待測溶液中氧化酶的活性。優選的，所述芳基硼化合物為式(I)結構的化合物，式(I)中R1為氨基或羥基，R2
為硼酸基或硼酸頻那醇酯基；
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優選的，所述電化學檢測法為伏安分析法。
優選的，所述伏安分析法為循環伏安法，電壓掃描范圍為0 0. 4V，掃描速度為 0.03V/s 0. lV/s。本發明還提供一種氧化酶底物濃度的檢測方法，包括bl)、將待測溶液與氧化酶和芳基硼化合物混合，得到含有酚類化合物的中間待測溶液；1^2)、采用電化學檢測法檢測所述中間待測溶液中酚類化合物的濃度，根據酚類化合物的濃度計算出所述待測溶液中氧化酶底物的濃度。優選的，所述芳基硼化合物為式(I)結構的化合物，式(I)中R1為氨基或羥基，R2
為硼酸基或硼酸頻那醇酯基；
權利要求
1.一種氧化酶活性的檢測方法，包括al)、將待測溶液與氧化酶底物和芳基硼化合物混合，得到含有酚類化合物的中間待測溶液；a2)、采用電化學檢測法檢測所述中間待測溶液中酚類化合物的濃度，根據酚類化合物的濃度計算出待測溶液中氧化酶的活性。
2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述芳基硼化合物為式(I)結構的化合物，式(I)中隊為氨基或羥基，R2為硼酸基或硼酸頻那醇酯基；
3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述電化學檢測法為伏安分析法。
4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述伏安分析法為循環伏安法，電壓掃描范圍為0 0. 4V，掃描速度為0. 03V/s 0. lV/s。
5.一種氧化酶底物濃度的檢測方法，包括bl)、將待測溶液與氧化酶和芳基硼化合物混合，得到含有酚類化合物的中間待測溶液；1^2)、采用電化學檢測法檢測所述中間待測溶液中酚類化合物的濃度，根據酚類化合物的濃度計算出所述待測溶液中氧化酶底物的濃度。
6.根據權利要求5所述的檢測方法，其特征在于，所述芳基硼化合物為式(I)結構的化合物，式(I)中R1為氨基或羥基，R2為硼酸基或硼酸頻那醇酯基；
7.一種氧化酶底物濃度的檢測方法，包括以芳基硼化合物和氧化酶修飾的碳糊電極作為工作電極，采用電化學檢測法檢測待測溶液中酚類化合物的濃度，根據酚類化合物的濃度計算出待測溶液中氧化酶底物的濃度。
8.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述芳基硼化合物為式(I)結構的化合物，式(I)中隊為氨基或羥基，R2為硼酸基或硼酸頻那醇酯基；
9.根據權利要求7所述的檢測方法，其特征在于，所述電化學檢測法為恒電位掃描法， 掃描電位為0. 08V 0. 15V，掃描時間為IOs 18s。
10.一種氧化酶底物濃度的檢測方法，包括cl)、將待測溶液與芳基硼化合物混合，得到中間待測溶液；c2)、以氧化酶修飾的碳糊電解作為工作電極，采用電化學檢測法檢測所述中間待測溶液中酚類化合物的濃度，根據酚類化合物的濃度計算出待測溶液中氧化酶底物的濃度。
全文摘要
本發明提供一種氧化酶活性的檢測方法，包括將待測溶液與氧化酶底物和芳基硼化合物混合，得到含有酚類化合物的中間待測溶液；采用電化學檢測法檢測所述中間待測溶液中酚類化合物的濃度，根據酚類化合物的濃度計算出待測溶液中氧化酶的活性。本發明是基于電化學檢測酚類化合物濃度來間接檢測出氧化酶的活性，由于酚類化合物具有氧化電位低的特點，因此易于進電化學檢測，同時由于電化學檢測法具有操作簡單、靈敏度高的特點，由此使得本發明提供的方法具有操作簡便，靈敏度和檢測準確度高的特點。本發明還提供三種氧化酶底物濃度的檢測方法，這三種檢測方法的檢測思路與上述檢測方法相同，該方法易于操作，靈敏度和檢測準確度較高。
文檔編號G01N27/48GK102353713SQ20111018845
公開日2012年2月15日 申請日期2011年7月6日 優先權日2011年7月6日
發明者徐國寶, 胡連哲 申請人:中國科學院長春應用化學研究所