專利名稱：葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒及制備方法
技術領域：
本發明生物工程領域，尤其涉及一種試劑盒及其制備方法，特別是一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒及制備方法。
背景技術：
類風濕性關節炎(RA)是一種最常見的自身免疫性疾病，在全世界大約有1. 0%的人患有此病。其特征為對稱性的大小關節滑膜的炎癥。起初的癥狀包括批關節腫脹疼痛， 并且在關節部位有晨僵，繼而引起骨質破壞。因而，RA的早期診斷和及時開始合適的治療對控制該病的病情非常重要。中小型醫院的類風濕關節炎(RA)患者就診人數量少，檢測樣品少，檢測報告周期長，容易延誤患者明確診斷和用藥治療。類風濕性關節炎(RA)患者和約64%的健康人群與類風濕關節炎未控制的患者在血清中和關節腔積液內存在葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)。主要有體內T細胞系統和B淋巴細胞系統產生，分泌大量GPI抗原進入血清和關節腔內，使得血清中和關節腔內GPI濃度升高，是類風濕關節炎獨特的自身免疫生理功能。在RA患者有高效價的GPI存在，常伴有嚴重的關節功能受限。提示預后不良或治療過程中藥物沒有起到一定作用，當RA患者用藥物治療好轉，血清和關節腔積液中GPI降低，關節腫痛減輕。從2001年Nature Immunology 雜志首次發表文章，從鼠自然生成類風濕關節炎的k/BxNT細胞神經未稍細胞基因中得到 GPI，然后從人類類風濕關節炎(RA)中也得到相同的GPI，而且在類風濕關節炎所含高濃度抗原都是一致，幾乎完全為GPI同一酵素酶。
發明內容
本發明的目的在于提供一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒及制備方法，所述的這種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒及制備方法是采用膠體金滲濾法和層析法原理來檢測人血清中的GPI濃度，解決了現有技術中檢測血清中的GPI濃度的時間較長，程序復雜的技術問題。本發明提供了一種葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)抗原體外檢測試劑盒，包括檢測板、羊抗GPI抗體、由膠體金標記的羊抗GPI抗體結合物、封閉液、洗滌液、陽性參考品和陰性參考品。進一步的，所述的檢測板由一個塑料盒底盒，所述的塑料盒底盒中設置有一層吸水層，所述的吸水層上設置有一層硝酸纖維素膜，所述的硝酸纖維素膜上設置有一個塑料盒面蓋，所述的塑料盒面蓋中央設置有一個檢測反應孔，在檢測反應孔對應的硝酸纖維素膜上點加羊抗GPI抗體。進一步的，所述的檢測反應孔為圓形或者其它形狀。進一步的，所述的封閉液是含有牛血清白蛋白的磷酸鹽溶液，磷酸鹽溶液的 pH7. 0 7. 5之間，牛血清白蛋白在磷酸鹽溶液中的重量百分比為1. 0%。進一步的，所述的洗滌液是含有Tween-20的Tris-HCl溶液，Tris-HCl溶液的pH7. 0 7. 5之間，Tween-20在Tris-HCl溶液中的重量百分比為0. 05% 0進一步的，在每毫升膠體金結合物中，羊抗GPI抗體的質量為0. 025毫克。進一步的，所述的陽性參考品為濃度大于0. 2mg/L的GPI抗原。進一步的，所述的陰性參考品小于0. 2mg/L的GPI抗原。本發明還提供了上述的一種葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)抗原體外檢測試劑盒的制備方法，包括一個配制羊抗GPI抗體溶液的步驟，一個制備檢測板的步驟，一個制備膠體金標記的羊抗GPI抗體結合物的步驟，一個配制封閉液的步驟，一個配制洗滌液的步驟，一個制備陽性參考品的步驟和一個制備陰性參考品的步驟。本發明的工作原理是本試劑盒采用雙抗體夾心免疫吸附法原理、及膠體金滲濾、 膠體金層析檢測技術檢測人血清中的GPI抗原，將羊抗GPI抗體包被于硝酸纖維素膜，制成固相抗體，用以捕獲人血清中可能存在的GPI抗原，再將羊抗GPI抗體標記于膠體金，形成膠體金結合物作為示蹤物。如被測人血清中含有GPI抗原，則形成固相羊抗GPI抗體-GPI 抗原-膠體金結合物，呈紅色斑點反應，其顏色深淺與被測血清中含有的GPI抗原的濃度有關，但不呈比例關系。本發明和已有技術相比，其技術進步是顯著的。本發明可以用于檢測人血清樣本中葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)抗原，作為類風濕性關節炎輔助診斷使用。采用本發明的試劑盒當天能收到檢測報告，檢測結果準確而且方便。
圖1顯示了檢測板反應孔中心檢測點有紅色斑點，為陽性結果。圖2顯示了檢測板反應孔中心檢測點無紅色斑點，為陰性結果。
具體實施例方式實施例1.膠體金制備條件選擇1. 10. 05%氯化金溶液300毫升，加熱至沸；1.2加入5.0%檸檬酸三鈉3. 6毫升；1. 3繼續加熱煮沸15分鐘，停止加熱，待冷至室溫，用蒸餾水恢復至原體積；1. 4實驗結果波長λ 540 535 530 525 520 510nm。ABS 值:0. 528 0. 715 1. 481 0. 902 0. 699 0. 601目測膠體金溶液顏色紅色透明。實施例2.膠體金結合物制備條件選擇2. 1膠體金標記羊抗GPI抗體pH值的選擇選擇膠體金標記羊抗GPI抗體的適宜pH值，使用1. 0%無水碳酸鈉溶液調節膠體金標記PH值，通過檢測靈敏度比較膠體金標記羊抗GPI抗體的合適pH值范圍。實驗結果
權利要求
1.一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒，其特征在于包括檢測板、羊抗 GPI抗體、由膠體金標記的羊抗GPI抗體結合物、封閉液、洗滌液、陽性參考品和陰性參考品。
2.如權利要求1所述的一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒，其特征在于 所述的檢測板由一個塑料盒底盒，所述的塑料盒底盒中設置有一層吸水層，所述的吸水層上設置有一層硝酸纖維素膜，所述的硝酸纖維素膜上設置有一個塑料盒面蓋，所述的塑料盒面蓋中央設置有一個檢測反應孔，在檢測反應孔對應的硝酸纖維素膜上點加羊抗GPI抗體。
3.如權利要求1所述的一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒，其特征在于 所述的封閉液是含有牛血清白蛋白的磷酸鹽溶液，磷酸鹽溶液的PH7. 0 7. 5之間，牛血清白蛋白在磷酸鹽溶液中的重量百分比為1.0%。
4.如權利要求1所述的一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒，其特征在于 所述的洗滌液是含有Tween-20的Tris-HCl溶液，Tris-HCl溶液的pH在7. 0 7. 5之間， Tween-20在iTris-HCl溶液中的重量百分比為0. 05%。
5.如權利要求1所述的一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒，其特征在于 在每毫升膠體金結合物中，羊抗GPI抗體的質量為0. 025毫克。
6.如權利要求1所述的一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒，其特征在于 所述的陽性參考品為濃度大于0. 2 mg/L的GPI抗原。
7.如權利要求1所述的一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒，其特征在于 所述的陰性參考品為濃度小于0. 2 mg/L的GPI抗原。
8.權利要求1所述的一種葡萄糖-6-磷酸異構酶抗原體外檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括一個配制羊抗GPI抗體溶液的步驟，一個制備檢測板的步驟，一個制備膠體金標記的羊抗GPI抗體結合物的步驟，一個配制封閉液的步驟，一個配制洗滌液的步驟，一個制備陽性參考品的步驟和一個制備陰性參考品的步驟。
全文摘要
本發明屬于生物工程領域，提供了一種葡萄糖-6-磷酸異構酶(GPI)抗原體外檢測試劑盒，包括檢測板、羊抗GPI抗體、膠體金結合物、封閉液、洗滌液、陽性參考品和陰性參考品。本發明還提供了上述的GPI抗原體外檢測試劑盒的制備方法。本發明采用雙抗體夾心膠體金免疫吸附法原理檢測人血清中的GPI抗原，將羊抗GPI抗體包被于硝酸纖維素膜，制成固相抗體，用以捕獲人外周血清中可能存在的GPI抗原。再將膠體金標記于羊抗GPI抗體，形成膠體金結合物作為示蹤物，如被測人血清中含有GPI抗原，則形成固相羊抗GPI抗體-GPI抗原-膠體金結合物。本發明可應用于類風濕性關節炎輔助診斷。
文檔編號G01N33/532GK102323401SQ20111014221
公開日2012年1月18日 申請日期2011年5月30日 優先權日2011年5月30日
發明者劉中令, 劉穎冰, 陸梅生 申請人:上海北加生化試劑有限公司