專利名稱：一種快速判斷人參是否經過硫磺熏蒸的鑒定方法
一種快速判斷人參是否經過硫磺熏蒸的鑒定方法
技術領域：
本發明屬于中藥材及飲片真偽優劣鑒定領域，尤其是使用特征化學成分判定中藥材及飲片質量優劣的鑒別方法。
背景技術：
硫磺熏蒸作為一種傳統的中藥材養護方法，具有增白、防蟲、防腐和防霉變等作用，在中藥材及飲片的加工貯藏過程中應用普遍。然而近年來的研究發現，中藥材及飲片經硫磺熏蒸后會殘留毒性二氧化硫，且固有生物活性成分會發生量或質的改變，造成藥材和飲片質量改變，藥理功效下降，甚至毒性增大。國家食品藥品監督管理局在2004年已將硫磺熏蒸后的藥材視為劣藥。2005年版《中國藥典》(一部)取消了山藥、葛根等中藥材的硫熏工藝。在2010版《中國藥典》附錄中增加了二氧化硫殘留量的檢測方法。這表明，國家對于中藥材及飲片的加工貯藏已不再允許使用硫磺熏蒸的方法。人參是一種臨床常用貴重中藥材，部分不法商販為降低生產成本，達到增白、防蟲、防腐和防霉變的目的，在人參藥材初加工時，仍會采用硫磺熏蒸的方法。因此，建立人參是否為硫磺熏蒸品的檢測方法不但是確保人參療效和臨床用藥安全的需要，也是打擊不法商販的重要技術手段。目前人們判斷人參是否經過硫磺熏蒸的方法主要靠觀察外觀顏色，品嘗氣味，主觀性強，缺乏客觀依據。2010版《中國藥典》附錄IXU 二氧化硫殘留量測定法中采用滴定法測定，靈敏度低，樣品取樣數量也較大(10克)。另外，人參藥材經硫磺熏蒸后，隨著存放時間的延長，氣體揮散后有可能檢測不到二氧化硫成分，出現假陰性結果。
發明內容本發明所要解決的技術問題是運用現代分析檢測技術，使用特定的鑒別方法，判斷人參是否經過硫磺熏蒸。本發明基本原理我們對經硫磺熏蒸前后的人參樣品進行對比研究發現，人參經硫磺熏蒸后，會產生兩個新的化學成分，這兩個新成分在反相液相色譜上表現出比原人參皂苷類成分更短的保留時間，見圖1-1、圖1-2。質譜數據顯示，這兩個新成分的去質子準分子離子質荷比分別為897和1043，見圖 2-1、圖 2-2。
本發明即是通過測定這兩個特征化學成分，判定人參是否經過硫磺熏蒸。本發明技術方案采用50 %甲醇超聲波提取人參樣品，提取液用聚四氟乙烯微孔濾膜過濾，濾液采用反相液相色譜-質譜聯用分析技術測定，記錄色譜圖和質譜圖，其特征為通過觀察人參樣品色譜圖中是否存在去質子準分子離子質荷比為897和1043的兩個色譜峰來判斷人參是否采用硫磺熏蒸。如存在此兩種去質子準分子離子的色譜峰，說明該人參樣品已經硫磺熏蒸；如未出現，則可判斷該人參未經硫磺熏蒸。本發明與現有的判斷人參藥材是否經過硫磺熏蒸的檢測方法相比較，具有取樣量小(0.1克)、專屬性強、樣品處理簡單和結果準確度高等優點，是一種靈敏和專屬的鑒別方法。
圖1-1未經硫磺熏蒸人參樣品HPLC-ESI (-)-MS色譜圖
圖1-2硫磺熏蒸人參樣品HPLC-ESI (-)-MS色譜圖，其中1，2為兩個新產生的特征成分色譜峰
圖2-1新產生的特征成分1質譜2-2新產生的特征成分2質譜圖
圖3-1實施例1中未經硫磺熏蒸人參樣品HPLC-ESI (-)-MS色譜3-2實施例1中硫磺熏蒸人參樣品HPLC-ESI (_)-MS色譜圖，其中的特征成分色譜峰
圖4-1實施例2中未經硫磺熏蒸人參樣品HPLC-ESI (-)-MS色譜4-2實施例2中硫磺熏蒸人參樣品HPLC-ESI (-)-MS色譜圖，其中的特征成分色譜峰
圖5-1實施例3中未經硫磺熏蒸人參樣品HPLC-ESI (-)-MS色譜5-2實施例3中硫磺熏蒸人參樣品HPLC-ESI (-)-MS色譜圖，其中的特征成分色譜峰具體實施方式實施例一1.色譜系統Waters ACQUITY UPLC-PDA 系統。色譜柱=Waters ACQUITY HSS T3 (2. IXlOOmm, 1.8μπι)。流動相組成為0. 甲酸水與0. 甲酸乙腈。梯度洗脫見表1。洗脫流速為 0. 6ml/min。柱溫箱及樣品室溫度分別為35°C及10°C。樣品進樣量均為2 μ 1。表1梯度洗脫表
1，2為兩個新產生 1，2為兩個新產生 1，2為兩個新產生2 3-245%95 2.質譜條件Waters Q-TOF Premier質譜儀；ESF離子源；噴霧氣流速設為700I/h，溫度 300°C。錐孔氣流設為ΙΟΙ/h ；毛細管電壓與錐孔電壓分別設為3500V及45V。Q-TOF掃描速度為0.2s，掃描延遲間隔時間為0.02s;碰撞氣體(氬氣)壓力為7.066X10_3!^。碰撞 (CID)能量分別設為5、4kV。3.人參樣品測定溶液制備及檢測人參樣品0. lg，加50%甲醇5ml，室溫超聲提取60min，提取液經0. 2 μ m聚四氟乙烯膜過濾，進樣，記錄色譜圖。4.色譜圖見圖3-1、圖3-2，未經硫磺熏蒸人參樣品色譜峰中不存在去質子準分子離子質荷比為897和1043的兩個色譜峰，而經硫磺熏蒸人參樣品色譜峰中存在這兩個色譜峰。實施例二1.色譜系統Waters ACQUITY UPLC-PDA 系統。色譜柱Waters ACQUITY BEHC18(2. IX 100mm, 1.7μπι)。流動相組成為0.2%甲酸水與0.2%甲酸乙腈。梯度洗脫見表2。洗脫流速為 0. 6ml/min。柱溫箱及樣品室溫度分別為35°C及10°C。樣品進樣量均為2 μ 1。表2梯度洗脫表
2.質譜條件Waters Q-TOF Premier質譜儀；ESF離子源；噴霧氣流速設為700I/h，溫度 300°C。錐孔氣流設為ΙΟΙ/h ；毛細管電壓與錐孔電壓分別設為3500V及45V。Q-TOF掃描速度為0.2s，掃描延遲間隔時間為0.02s;碰撞氣體(氬氣)壓力為7.066X10_3!^。碰撞 (CID)能量分別設為5、4kV。3.人參樣品測定溶液制備及檢測人參樣品0. lg，加50%甲醇5ml，室溫超聲提取60min，提取液經0. 2 μ m聚四氟乙烯膜過濾，進樣，記錄色譜圖。4.譜圖見圖4-1、圖4-2，未經硫磺熏蒸人參樣品色譜峰中不存在去質子準分子離子質荷比為897和1043的兩個色譜峰，而經硫磺熏蒸人參樣品色譜峰中存在這兩個色譜峰。實施例三1.色譜系統Waters ACQUITY UPLC-PDA 系統。色譜柱Waters ACQUITY BEHC8 (2. 1 X 100mm, 1. 7 μ m)。流動相組成為水與甲醇。梯度洗脫見表3。洗脫流速為0. 6ml/min。柱溫箱及樣品室溫度分別為35°C及10°C。樣品進樣量均為2 μ 1。表3梯度洗脫表
權利要求
1.一種快速判斷人參是否經過硫磺熏蒸的鑒定方法，采用50%甲醇超聲波提取人參樣品，提取液用聚四氟乙烯微孔濾膜過濾，濾液采用反相液相色譜-質譜聯用分析技術測定，記錄色譜圖和質譜圖，其特征為通過觀察人參樣品色譜圖中是否存在去質子準分子離子質荷比為897和1043的兩個色譜峰來判斷人參是否采用硫磺熏蒸。
2.如權利要求1所述的一種快速判斷人參是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為反相液相色譜方法的色譜柱填料為碳十八或碳八鍵合硅膠。
3.如權利要求1所述的一種快速判斷人參是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為反相液相色譜流動相為水相與乙腈有機相，或水相與甲醇有機相。
4.如權利要求3所述的一種快速判斷人參是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為反相液相色譜流動相中含有0-1 %的甲酸或乙酸。
5.如權利要求3所述的一種快速判斷人參是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為反相液相色譜流動相水相和有機相進行梯度洗脫，方法為水相的變化范圍為95% -5%。
6.如權利要求1所述的一種快速判斷人參是否采用硫磺熏蒸的鑒定方法，其特征為質譜離子化方式為電噴霧，掃描模式為負離子掃描。
全文摘要
本發明屬于中藥材及飲片真偽優劣鑒定領域，尤其是使用特征化學成分判定中藥材及飲片質量優劣的鑒別方法。硫磺熏蒸人參的不法行為時有發生，急需快速的鑒定方法。本發明基于人參經過硫磺熏蒸后產生兩個新的分子量分別為898和1044的特征成分，采用50％甲醇超聲波提取人參樣品，采用反相液相色譜-質譜聯用分析技術進行測定，通過觀察人參樣品色譜圖中是否存在去質子準分子離子質荷比為897和1043的兩個色譜峰來判斷人參是否采用硫磺熏蒸。本發明可以快速判斷人參是否經過硫磺熏蒸，保證臨床用藥的安全和有效。
文檔編號G01N30/89GK102323370SQ20111013140
公開日2012年1月18日 申請日期2011年5月20日 優先權日2011年5月20日
發明者朱玲英, 李松林, 沈紅, 賈曉斌 申請人:江蘇省中醫藥研究院