專利名稱：一種鹽酸美克洛嗪片有關物質的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種鹽酸美克洛嗪片有關物質的測定方法，屬于藥物分析技術領域。
背景技術：
有關物質檢查是藥品質量控制的重要指標。建立起準確測定雜質的檢驗方法尤其重要，要對有關物質進行嚴格的控制，就離不開專屬性強、靈敏度高的分析方法，及其對分析方法的篩選與驗證。鹽酸美克洛嗪片在美國藥典32版有收錄。美國藥典32版中收載此品種，制劑中有關物質檢測方法主要存在以下兩個問題I.在流動相比例發生微小改變時，該活性成分保留時間相對變化較大；2.該方法中設置流速為2.0ml/min，樣品溶液濃度較大，對儀器，色譜柱損害較大且需要流動相的量很大
發明內容
本發明的目的是提供一種鹽酸美克洛嗪片有關物質的測定方法。本發明鹽酸美克洛嗪片有關物質的測定方法是采用高效液相色譜法，其色譜條件為色譜柱為苯基柱，規格為250 mmX 4. 6 mm，5 Mm ;流動相A為甲醇，B為pH 7. 0的磷酸氫二銨溶液；梯度洗脫程序為0 — 5. Omin, A為80% ；5. 0 — 35. Omin, A由80%變為95% ；35. 0 — 35. Olmin, A 由 95% 變為 80% ;35. 01 — 45. Omin, A 為 80% ;流速 I. 0 ml/min ;檢測波長225 nm ;柱溫為30°C ;理論板數以鹽酸美克洛嗪計應不低于2000 ；
測定方法本品10片，研細，取相當于鹽酸美克洛嗪50mg的粉末，精密稱定，置50ml容量瓶中，以流動相A和B混合溶液為稀釋劑，其中A為60-90%，用稀釋劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，靜置取上層液體濾過，取續濾液作為供試品溶液；精密稱取鹽酸美克洛嗪對照品，力口稀釋劑溶解制成Iml中含10 ii g鹽酸美克洛嗪的溶液，作為對照溶液；取對照溶液20 iil，注入高效液相色譜儀，調節儀器靈敏度，使主成分峰高為記錄儀滿量程的20% 30%，取供試品溶液20 u 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單個雜質峰面積不得大于對照溶液中主峰峰面積的一半，各雜質峰面積之和不得大于對照溶液中主峰峰面積。本發明中所使用色譜柱可以為通用的苯基柱，優選為型號為Kromasil 100-5Phenyl的色譜柱。本發明中樣品溶液配制過程中用到的稀釋劑為流動相A和B混合溶液，其中A為60-90%, A的比例優選為80%。本發明所述梯度洗脫中流動相的百分比和稀釋劑中的百分比均為常溫下的體積比。為證實該方法準確可靠，重復性好，能夠用于控制鹽酸美克洛嗪片的有關物質，進行如下方法學驗證
I.儀器與試藥
I.I儀器高效液相色譜儀，Shimadzu LC-20AT ;色譜工作站，Shimadzu LC Solution ;分析天平，梅特勒托利多；PH計，梅特勒托利多。I. 2 試藥
鹽酸美克洛嗪片，自制，制劑配方為鹽酸美克洛嗪50. 0g、微晶纖維素PH102 40. 0g、乳糖FlowlaclOO :320g、預交化淀粉:20g、磷酸氫鈣:50g、PEG6000 :7. 5g、硬脂酸鎂7. 5g、微粉硅膠5. 0g，工藝采用粉末直接壓片法；鹽酸美克洛嗪對照品，USP ;甲醇，色譜純；其它均為分析純。2.方法
2.I檢測波長的選擇
經二極管陣列檢測器采集光譜圖分析，可顯示各主要峰在200 400 nm之間吸收光 譜，選擇各雜質峰及主峰均有較強吸收的波長作為檢測波長。2. 2流動相條件考察
實驗中分別以甲醇-磷酸鹽緩沖溶液、甲醇-乙腈-磷酸鹽緩沖溶液等不同濃度、不同比例的流動相系統進行等度和梯度洗脫試驗，比較上述各條件下的色譜圖，選擇分離效果最佳、時間盡可能短的流動相條件。2. 3色譜柱的選擇
選擇十八燒基鍵合娃膠為填料(LI)的型號為Phenomenex Gemini C18和苯基鍵合娃膠為填料(Lll)的型號為Kromasil 100-5 Phenyl的色譜柱,按照確定的色譜條件分別進行試驗。以主峰與雜質峰及主要雜質間分離狀況為指標，考察不同類型的色譜柱對分離效果的影響。2. 4專屬性試驗
專屬性試驗
酸破壞取本品細粉適量(約相當于鹽酸美克洛嗪約50 mg)，置50ml容量瓶中，加15ml稀釋劑超聲IOmin后加lmol/L鹽酸10ml，放置80°C水浴中2小時，取出并冷至室溫，用lmol/L氫氧化鈉溶液中和，加稀釋劑至刻度，搖勻，經0. 45 ii m濾膜濾過，取續濾液20 yl，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。堿破壞取本品細粉適量(約相當于鹽酸美克洛嗪約50mg)，置50ml容量瓶中，力口15ml稀釋劑超聲IOmin后加lmol/L氫氧化鈉10ml，放置60°C水浴中2小時，取出并冷至室溫，用lmol/L鹽酸溶液中和，加稀釋劑至刻度，搖勻，經0. 45 y m濾膜濾過，取續濾液20 U 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。光照破壞取本品細粉適量置扁稱量瓶中，于強光(照度45001x±5001x)下照射10天。取細粉適量(約相當于鹽酸美克洛嗪約50mg)，置50ml容量瓶中，加15ml稀釋劑超聲lOmin，冷至室溫后加稀釋劑至刻度，搖勻，經0. 45 ii m濾膜濾過，取續濾液20 U 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。高溫破壞取本品細粉適量置扁稱量瓶中，于60°C烘箱中放置10天。取細粉適量(約相當于鹽酸美克洛嗪約50mg)，置50ml容量瓶中，加15ml稀釋劑超聲IOmin,冷至室溫后加稀釋劑至刻度，搖勻，經0. 45 y m濾膜濾過，取續濾液20 Ul，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。氧化破壞取本品細粉適量(約相當于鹽酸美克洛嗪約50mg)，置50ml容量瓶中，加15ml稀釋劑超聲lOmin，加H2O2 (3%) 10ml，于室溫放置24小時，加稀釋劑至刻度，搖勻，經
0.45 um濾膜濾過，取續濾液20 ill，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。高濕破壞取本品細粉適量(約相當于鹽酸美克洛嗪約50mg)置50ml容量瓶中，于濕度為75%±5%的環境中放置10天。加15ml稀釋劑超聲lOmin，冷至室溫后加稀釋劑至刻度，搖勻，經0. 45 ii m濾膜濾過，取續濾液20 ill，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。輔料干擾試驗取按處方配比不含鹽酸美克洛嗪的細粉適量(約相當于鹽酸美克洛嗪約50mg)，置50ml容量瓶中，加適量稀釋劑超聲lOmin，冷至室溫后加稀釋劑至刻度，搖勻，經0. 45 ii m濾膜濾過，取續濾液20 ill，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。2. 5檢測限
取對照品溶液，采用逐級稀釋法，依次進樣。當信噪比(S/N)約為3時，此對應的鹽酸美克洛嗪的量為檢測限。 2. 6溶液穩定性試驗
依法配制的供試品溶液和對照品溶液，在O、2、4、6、8、12、24h時測定，分別計算相對標準偏差，考察其穩定性。2. 7重復性
取同一批鹽酸美克洛嗪片制備6份供試品溶液，分別進樣測定并記錄色譜圖及峰面積，計算相對標準偏差。2. 8耐用性試驗
緩沖鹽的PH值變化將緩沖鹽溶液的pH分別調為6. 8,7. 0,7. 2，依法測定同一溶液。柱溫變化將柱溫分別設置為28°C、30°C、32°C，依法測定同一溶液。流速變化將流速分別設置為0. 9ml/min、l. Oml/min、l. lml/min,依法測定同一溶液。2. 9樣品測定
取本品依法測定有關物質，記錄色譜圖。2. 10與美國藥典方法對比試驗
分別采用美國藥典描述的方法和本發明提供的方法，測定同一溶液(以酸破壞、堿破壞、氧化破壞后鹽酸美克洛嗪樣品溶液為例)記錄色譜圖。3.結果
3. I經二極管陣列檢測器采集紫外-可見光譜圖分析，雜質峰在225 nm均有較強吸收，故檢測波長選為225 nm。參見圖I-圖9。3. 2根據不同流動相條件下色譜圖分析，確定甲醇-磷酸鹽緩沖溶液為流動相的梯度洗脫條件。不同流動相的色譜圖見
圖10-圖14。3. 3以主峰與雜質峰及主要雜質間分離狀況為指標，根據不同類型的色譜柱對分離效果，選擇Kromasil 100-5 Phenyl色譜柱。色譜圖見圖14-圖15。 3.4酸破壞、堿破壞、氧化破壞、高溫破壞、光照破壞、高濕破壞、輔料干擾試驗色譜圖見圖16-圖22。破壞性試驗圖譜表明，本方法可有效分離鹽酸美克洛嗪的各種雜質，且輔料沒有干擾。3. 5當信噪比(S/N)約為3時，鹽酸美克洛嗪的最低檢出限為0. 65ng，色譜圖見圖23。3. 6溶液穩定性結果見表1，可見樣品溶液和對照溶液在24h內的穩定。表I溶液穩定性實驗結果
權利要求
1.一種鹽酸美克洛嗪片有關物質的測定方法，該方法采用高效液相色譜法，其特征在于所述高效液相色譜法的色譜條件為色譜柱為苯基柱，規格為250 mmX4. 6 mm, 5 Mm ；流動相A為甲醇，B為pH7. 0的磷酸氫二銨溶液；梯度洗脫程序為0 — 5. Omin, A為80% ；5.0 — 35. Omin, A 由 80% 變為 95% ；35. 0 — 35. Olmin, A 由 95% 變為 80% ；35. 01 — 45. Omin,A為80% ;流速I. Oml/min ;檢測波長225 nm ;柱溫為30°C ;理論板數以鹽酸美克洛嗪計應不低于2000 ； 測定方法本品10片，研細，取相當于鹽酸美克洛嗪50mg的粉末，精密稱定，置50ml容量瓶中，以流動相A和B混合溶液為稀釋劑，其中A為60-90%，用稀釋劑超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，靜置取上層液體濾過，取續濾液作為供試品溶液；精密稱取鹽酸美克洛嗪對照品，加稀釋劑溶解制成Iml中含IOii g鹽酸美克洛嗪的溶液，作為對照溶液；取對照溶液20 iil，注入高效液相色譜儀，調節儀器靈敏度，使主成分峰高為記錄儀滿量程的20% 30 %，取供試品溶液20 ill，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單個雜質峰面積不得大于對照溶液中主峰峰面積的一半，各雜質峰面積之和不得大于對照溶液中主峰峰面積。
2.根據權利要求I所述的測定方法，其特征在于色譜柱為Kromasil100-5苯基色譜柱。
3.根據權利要求I或2任一項所述的測定方法，其特征在于所述稀釋劑為流動相A和B混合溶液，其中A為80%。
全文摘要
本發明提供了一種測定鹽酸美克洛嗪片有關物質的穩定性指示性分析方法。鹽酸美克洛嗪為第一代哌嗪類抗組胺劑，適用于暈動癥引起惡心、嘔吐、頭暈的治療和預防并對前庭疾病引起的眩暈也有效。本發明采用高效液相色譜法對鹽酸美克洛嗪片有關物質進行測定，可用于鹽酸美克洛嗪片的質量控制。
文檔編號G01N30/02GK102778514SQ20111012021
公開日2012年11月14日 申請日期2011年5月11日 優先權日2011年5月11日
發明者張梅華, 楊超, 郝褔, 馬靜 申請人:北京以嶺生物工程技術有限公司