專利名稱：一種注射用益氣復(fù)脈中10種人參皂苷的含量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物的檢測方法，特別涉及一種注射用益氣復(fù)脈制劑中10種人參皂苷的含量檢測方法。
背景技術(shù)：
注射用益氣復(fù)脈(凍干)是由紅參、麥冬、五味子制成的用于靜脈滴注的中藥復(fù)方制劑，具有益氣復(fù)脈，養(yǎng)陰生津的療效。主要用于冠心病勞累性心絞痛氣陰兩虛證，癥見胸痹心痛，心悸氣短、倦怠懶言、頭暈?zāi)啃?、面色少華、舌淡、少苔或剝苔，脈細(xì)弱或結(jié)代；冠心病所致慢性左心功能不全I(xiàn)I、III級氣陰兩虛證，癥見心悸、氣短甚則氣急喘促，胸悶隱痛，時作時止，倦怠乏力，面色蒼白，動則汗出，舌淡、少苔或剝苔，脈細(xì)弱或結(jié)代。
注射用益氣復(fù)脈(凍干)性狀本品為淺黃色的疏松塊狀物；有引濕性。取I瓶內(nèi)容物,加水2 3ml溶解后，為棕紅色澄明液體。用法用量靜脈滴注。每日I次，每次8瓶，用250ml 500ml 5%葡萄糖注射液或生理鹽水稀釋后靜脈滴注。每分鐘約40滴。療程2周。已經(jīng)報道了用近紅外光譜法快速測定注射用益氣復(fù)脈(凍干)中人參總皂苷的含量的方法，由于總皂苷基礎(chǔ)測量的方法欠佳，導(dǎo)致模型的預(yù)測能力不理想。本發(fā)明在前研究的基礎(chǔ)上對注射用益氣復(fù)脈(凍干)中總皂苷的含量的測定進(jìn)行進(jìn)一步改進(jìn)，采用HPLC方法分析測得10種含量較高的人參皂苷的和(人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rg2、Rbl、Rb2、Rb3、Rd、Rg3、Re)來表征總皂苷含量，據(jù)研究，10種人參皂苷的含量之和能占到總皂苷測定值的60%，能間接地反映出樣品中總皂苷的含量，且由于HPLC方法準(zhǔn)確度較高，使得基礎(chǔ)測量的數(shù)據(jù)更合理，此校正模型取得了較好的結(jié)果。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所述的檢測注射用益氣復(fù)脈中10種含量較高的人參皂苷的和的方法，包括以下步驟I)對照品的制備分別精密稱取10種人參皂苷對照品，分別為人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rg2、Rbl、Rb2、Rb3、Rd、Rg3、Re，加甲醇溶解，制得溶液。2)供試品溶液的制備取注射用益氣復(fù)脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水沖洗后，以甲醇洗脫，洗脫液過濾，制得溶液。3)測定方法分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液注入高效液相色譜，記錄色譜圖，測定樣品中10種人參皂苷的含量，計算其總和。優(yōu)選的檢測方法，包括以下步驟I)對照品的制備
分別精密稱取10種人參皂苷對照品，置于50ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，制得每Iml各含約0. Img的溶液。2)供試品溶液的制備取注射用益氣復(fù)脈粉I. 2g，精密稱定，置燒杯中，用水IOmL溶解，上已處理好的Strata -X商品樹脂柱(內(nèi)徑Icm,樹脂床高約2cm ；300 u m),流速約I. OmL mirT1,棄去流出液，待流至樹脂層液面時，以0. 5mol !/1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分兩次沖洗后，繼以用20 %甲醇沖洗后，最后以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOmL量瓶中至刻度，搖勻，過0. 45 y m
膜，即可。3)測定方法
分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液注入高效液相色譜，記錄色譜圖。分別測定樣品中10種人參皂苷的含量，計算其總和。其中的色譜條件如下色譜柱WatersSymmetry C18 柱(4. 6mmX 250mm, 5 u m),流動相 A 為 0. 05%憐酸、B為乙腈組成，按下表進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長203nm ;流速1. OmL mirT1 ;柱溫30°C。表IHPLC梯度洗脫程序
時間(min) A (%) B (%)
07723
327723
427030
675446
744555本發(fā)明方法的建立I儀器與材料Matrix-F (SFDA版)型傅里葉變換近紅外漫反射光譜儀(德國布魯克公司)，光纖探頭掃描，定量分析軟件為0PUS6. 5 ；waters2695高效液相色譜儀,waters2998 二極管陣列檢測器(美國waters公司)；Mettler XS105電子天平(瑞士梅特勒公司)；人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rg2、Rbl、Rb2、Rb3、Rd、Rg3、Rc對照品(中國藥品生物制品檢定所提供)；試劑均為分析純，水為超純水；注射用益氣復(fù)脈(凍干)樣品(天津天士力之驕藥業(yè)有限公司提供，科研用樣品，60批,分別編號為I 60)。2 方法2. I注射用益氣復(fù)脈凍干中10種人參皂苷的HPLC分析2. I. I色譜條件色譜柱WatersSymmetry C18 柱(4. 6mmX 250mm, 5 u m),流動相 A 為 0. 05%憐酸、B為乙腈組成，按下表進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長203nm ;流速1. OmL mirT1 ;柱溫30°C。表IHPLC梯度洗脫程序
權(quán)利要求
1.一種注射用益氣復(fù)脈中10種人參皂苷的含量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟 1)對照品的制備 分別精密稱取10種人參皂苷對照品，分別為人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rg2、Rb I、Rb2、Rb3、Rd、Rg3、Re，加甲醇溶解，制得溶液； 2)供試品溶液的制備 取注射用益氣復(fù)脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水沖洗后，以 甲醇洗脫，洗脫液過濾，制得溶液； 3)測定方法 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液注入高效液相色譜，記錄色譜圖，測定樣品中10種人參皂苷的含量，計算其總和。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟 1)對照品的制備 分別精密稱取10種人參皂苷對照品，置于50ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，制得每Iml各含約0. Img的溶液； 2)供試品溶液的制備 取注射用益氣復(fù)脈粉1. 2 g，精密稱定，置燒杯中，用水I OmL溶解，上已處理好的Strata -X商品樹脂柱(內(nèi)徑Icm,樹脂床高約2cm ；300 u m)，流速約I. OmL mirT1,棄去流出液，待流至樹脂層液面時，以0. 5mol !/1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分兩次沖洗后，繼以用20 %甲醇沖洗后，最后以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOmL量瓶中至刻度，搖勻，過0. 45 y m膜，即可； 3)測定方法 分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液注入高效液相色譜，記錄色譜圖。分別測定樣品中10種人參皂苷的含量，計算其總和。
3.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，其中的色譜條件如下 色譜柱Waters Symmetry C18 柱(4. 6mmX 250mm, 5 u m),流動相 A 為 0. 05%憐酸、B 為乙腈組成，按下表進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長203nm ;流速1. OmL mirT1 ；柱溫30°C。
表IHPLC梯度洗脫程序
4.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，各進(jìn)樣IOyL。
5.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，該條件下，樣品分離良好，陰性對照無干擾。
6.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，取同一樣品，擦拭干凈西林瓶，重復(fù)掃描5次，用模型預(yù)測其含量，結(jié)果之間的RSD為I. 2%，表明方法的精密度良好。
7.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，分別取同一批號的樣品5瓶，分別掃描其NIR圖譜，用模型預(yù)測其含量，結(jié)果之間的RSD為I. 5%，表明該方法的重復(fù)性良好。
8.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，取同一批號的同一瓶樣品，在同一實驗場所，每天掃描一次，共5天，用模型預(yù)測其含量，結(jié)果之間的RSD為I. 9%，表明該方模型的穩(wěn)健性較好。
9.根據(jù)權(quán)利要求I的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟 對照品溶液的制備 分別精密稱取10種人參皂苷對照品，分別為人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rg2、Rb I、Rb2、Rb3、Rd、Rg3、Re，置于50ml量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，制得每Iml各含約0. Img的溶液； 供試品溶液的制備 取注射用益氣復(fù)脈凍干粉I. 2g，精密稱定，置燒杯中，用水IOmL溶解，上已處理好的Strata -X商品樹脂柱，內(nèi)徑Icm,樹脂床高約2cm ；300 u m,流速約I. OmL mirT1,棄去流出液，待流至樹脂層液面時，以0. 5mol -L^1NaOH甲醇-水=2 8，5mL分兩次沖洗后，繼以用20%甲醇沖洗后，最后以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOmL量瓶中至刻度，搖勻，過0. 45 u mil,即可； 在此分析條件下各IOy L進(jìn)樣。對照品溶液，樣品溶液的色譜圖見圖I ; 用歸一化法計算各人參皂苷的含量，他們的和即為10種人參皂苷含量之和。10、根據(jù)權(quán)利要求I的測定方法，其特征在于，近紅外光譜在4246. 8 4424. 2cm^\5774. 2 .6102. IcnT1 和 7498. 4 9747. IcnT1 范圍內(nèi)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種注射用益氣復(fù)脈中10種人參皂苷的含量檢測方法，包括以下步驟1)對照品的制備分別精密稱取10種人參皂苷對照品，分別為人參皂苷Rg1、Re、Rf、Rg2、Rb1、Rb2、Rb3、Rd、Rg3、Rc，加甲醇溶解，制得溶液，2)供試品溶液的制備取注射用益氣復(fù)脈藥物粉末，精密稱定，用水溶解，過上樹脂柱，以甲醇-水沖洗后，以甲醇洗脫，洗脫液過濾，制得溶液，3)測定方法分別精密吸取供試品溶液和對照品溶液注入高效液相色譜，記錄色譜圖，測定樣品中10種人參皂苷的含量，計算其總和。
文檔編號G01N1/28GK102759591SQ201110109129
公開日2012年10月31日 申請日期2011年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月28日
發(fā)明者葉正良, 周大錚, 李德坤, 韓曉萍 申請人:天津天士力之驕藥業(yè)有限公司