專利名稱：小分子雌二醇免疫測定標準品的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種小分子雌二醇免疫測定標準品的制備方法，屬于生物技術領域。
背景技術：
在抗體抗原反應測定未知待測物的過程中，通常必須要有一個系列的已知濃度的標準品(又可稱為質控品)一起進行反應測定。當反應結束之后，由已知的標準品濃度對照反應強度(相對光子單位或波長吸收值)可以得到一個相關標準曲線。而其他待測物含量可以通過各自的反應強度對比標準曲線得到相應的濃度含量。所以標準品是一個完整反應體系中不可缺少的一部分。通常標準品是由基質和已知濃度的測定物組成，一個良好的基質必須盡可能從生物特性上近似待測物的生物特性，這樣才能避免由于基質不一致造成的誤差，原理上基質可以是天然的血清/漿，也可以是人工勾兌的緩沖液加蛋白。但是它必須是不含或盡可能少含有測定物的物質。對于大分子測定物來講，得到一個不含測定物的基質相對容易，因為無論是天然的或者是人工勾兌的基質，都是比較容易將測定物從基質中清除。可是對于一些小分子測定物，比如分子量才300多的小分子激素類，得到一個干凈的“純”基質卻并不容易。由于小分子免疫反應易被干擾，雖然人工勾兌的基質可以做到完全不含小分子待測物，可是由于物理化學特征與待測樣本，通常是血清/漿基質的不同，造成很大偏差而不能被采用。目前業界常用的還是天然的血清/漿基質，幾乎所有的哺乳動物血清/漿基質內都含有小分子激素，并且具有相似性，所以必須將它們去除后才能使用。可是事實上它們極難被完全清除。這也是困惑業界多年的難題，也直接造就了一個共識小分子激素免疫測定存在一個系統誤差，特別是在低含量端，不能完全反應它們在體內的真實含量。而物化測定，如氣相色譜-質譜(GC-MQ，由于避免這些問題而成為測定小分子激素含量公認的‘金標準’。但是在具體的臨床應用中，由于成本及檢測速度上的問題，GC-MS還是非常不實用的一種手段，而免疫測定卻有著它特有的優勢。
發明內容
本發明提供一種小分子雌二醇免疫測定標準品的制備方法，目的是去除血清內的小分子物質，同時保留其它的血清物理化學特征，從而得到一個高質量的為雌二醇免疫檢測服務的標準品基質。為達到上述目的，本發明采用的技術方案是一種小分子雌二醇免疫測定標準品的制備方法，向血清或血漿加入活性炭，其中，每毫升血清或血漿中加入0. 8 0. 13克的活性炭；在2 8°C條件下，攪拌使所述活性炭充分吸附所述血清或血漿中的小分子物質；然后離心分離去除吸附有小分子物質的活性炭。上述技術方案中的有關內容解釋如下1、上述方案中，所述活性炭為中性制藥級脫色活性炭，可以購自Amend Drug and chemical Co.。活性炭是一種很細小的炭粒，有很大的表面積，而且炭粒中還有更細小的孔-毛細管，這種毛細管具有很強的吸附能力，因此可以與血清或血漿中的小分子物質充分接觸并吸附小分子物質。2、上述方案中，所述小分子物質是指分子量大于或等于150，且小于或等于500的物質。由于上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有下列優點和效果本發明在血清或血漿沒有進行前處理的前提下，用中性制藥級脫色活性炭對血清或血漿中的小分子物質進行吸附，去除血清或血漿內的小分子物質，同時保留其他的血清物理化學特征，從而得到一個高質量的為雌二醇免疫檢測服務的標準品基質。
附圖1為活性炭處理血清或血漿后，離心的時間與活性炭去除的關系示意圖。
具體實施例方式下面結合附圖及實施例對本發明作進一步描述實施例一種小分子雌二醇免疫測定標準品的制備方法一種小分子雌二醇免疫測定標準品的制備方法，取正常雄性馬血清，以1 10重量/體積比例(每毫升馬血清中加入0. 1克的活性炭)加入活性炭，攝氏4度環境下攪拌 12小時。攪拌使所述活性炭充分吸附所述血清或血漿中的小分子物質。然后將血清分成三組進行實驗。第一組、分別用180ml容量轉頭離心機在25000轉/分鐘(RPM，revolutions per minute)、50000轉/分鐘和0. 1微米過濾器加50000轉/分鐘過濾條件下離心0. 5 2小時，保留上清，去除吸附有小分子物質的活性炭沉淀。測定活性炭的質量，結果如附圖1所示附圖1中共有由上至下共有三條線，上面的線是25000轉/分鐘離心分離吸附有小分子物質的活性炭沉淀的重量；中間的線是50000轉/分鐘離心分離吸附有小分子物質的活性炭沉淀的重量；下面的線是先用0. 1微米過濾器過濾，再用50000轉/分鐘離心分離吸附有小分子物質的活性炭沉淀的重量。結果表明經過離心，活性炭可以被有效地與血清分離。而且離心速率和時間與活性炭去除的有效性沒有正比關系，即使經過預先過濾也是如此。25000轉/分鐘應該能有效地去除活性炭。第二組、以活性炭處理血清重復0 4次，然后用180ml容量轉頭離心機在25000 轉/分鐘離心1小時，各留上清樣本再進行GC-MS (氣質聯用)測定每個樣本的雌二醇含量。 結果如下表所示
權利要求
1.一種小分子雌二醇免疫測定標準品的制備方法，其特征在于向血清或血漿加入活性炭，其中，每毫升血清或血漿中加入0. 8 0. 13克的活性炭；在2 8°C條件下，攪拌使所述活性炭充分吸附所述血清或血漿中的小分子物質；然后離心分離去除吸附有小分子物質的活性炭。
2.根據權利要求1所述的小分子雌二醇免疫測定標準品的制備方法，其特征在于所述活性炭為中性制藥級脫色活性炭。
全文摘要
一種小分子雌二醇免疫測定標準品的制備方法，向血清或血漿加入活性炭，其中，每毫升血清或血漿中加入0.8～0.13克的活性炭；在2～8℃條件下，攪拌使所述活性炭充分吸附所述血清或血漿中的小分子物質；然后離心分離去除吸附有小分子物質的活性炭。本發明在血清或血漿沒有進行前處理的前提下，用中性制藥級脫色活性炭對血清或血漿中的小分子物質進行吸附，去除血清或血漿內的小分子物質，同時保留其他的血清物理化學特征，從而得到一個高質量的為雌二醇免疫檢測服務的標準品基質。
文檔編號G01N33/531GK102253196SQ201110100019
公開日2011年11月23日 申請日期2011年4月21日 優先權日2011年4月21日
發明者徐德鳴, 王智聯, 范寶臣 申請人:江蘇昶迅生物科技有限公司