專利名稱:一種研究與食道癌組織分化程度相關的基因p21的分期分級微陣列組織芯片的制作方法
技術領域:
本發明屬于生物技術領域,更具體地,涉及在片基上固定有組織芯片。
背景技術:
隨著組織學、病理學的發展,人們對人體或其他動植物的認識,從解剖學上的器官水平向組織、細胞水平發展。但由于完整的器官很難用顯微鏡觀察,因此需要把器官切成很薄的切片進行染色觀察,為了解決這個問題,出現了組織學技術。該方法的原理是通過把器官切成小塊組織,用福爾馬林固定后,利用酒精脫去該組織中的水分,再浸入二甲苯或苯溶液脫去酒精,最后組織塊浸入熔化石蠟溶液中脫去二甲苯,放入模具內用石蠟溶液進行包埋,冷卻后形成石蠟塊。該石蠟塊利用切片機進行切片,把蠟片裱于玻璃片上再進行烤片、脫蠟,染色、封片后就可以用顯微鏡進行觀察研究。目前,組織學技術不僅是單純染色顯微 鏡觀察,還出現了各種特殊染色、免疫組織化學技術、原位雜交技術、原位PCR技術。近年來隨著基因組學、蛋白組學研究發展,人們研究的生理和疾病已逐步從分子水平向細胞水平及組織水平發展,因此,如何利用組織開展研究,是目前研究中所要解決問題之一。采用傳統組織技術的織開展研究,是目前研究中所要解決問題之一。采用傳統組織技術的研究方法,由于組織標本需要量大,實驗工作量大,難以適應研究的學要。近年來,出現了組織微陣列芯片技術,解決了上述問題。該技術將數十個、數百個乃至上千個小的組織片整齊地排列在某一載體上(通常是載玻片)而制作成微縮組織切片,其基本操作程序(如圖I所示)包括設計并擬定組織芯片的分類系列、核對組織或有關疾病的病理診斷、組織定位、陣列蠟塊的制作、再從源蠟塊上鉆取組織并轉移到空白石蠟塊的相應位置、組織芯片切片。組織芯片的特點有體積小、信息含量大、高通量;減少或避免了對原始組織蠟塊的破壞;組織樣本的定位準確,減少無效組織;批量制作及可能的結果分析自動化;不同來源的病例的處理、染色和分析條件相同。人體的不同器官腫瘤組織,不同的分化程度在病理組織形態教學實驗,抗體的表達篩選,腫瘤的組織來源研究,疾病的發生等領域有重要的研究價值。過去只能使用單一器官腫瘤組織制作成病理蠟塊,單個腫瘤進行研究,很難平行比較,工作量大,標本獲取困難。因此,本領域迫切需要建立起一種高通量,平行化實驗,使用方便的工具以解決上述問題。
發明內容
本發明的目的是提供一種高效、簡便和低成本的腫瘤組織微陣列組織芯片,從而可以在分子、細胞、組織水平上研究腫瘤組織。該芯片亦可篩選出特異性、有意義的基因和及其表達的蛋白質。該微陣列芯片,包括片基、片基上連接有特異性組織點。片基可以是玻璃、生物膜、硅芯片、聚二氟乙烯膜或硝酸纖維膜。片基上組織點所需不同大小直徑可為0. 7mm, I. 0mm,
I.5mm, 2. 0mm, 2. 5mm, 3. 0mm, 3. 5mm, 4. 0mm, 4. 5mm, 5. 0mm, 5. 5mm, 6. Omm 等。密度為 500 個點/平方厘米 I個點/平方厘米,每張片基上可有1000點 10點不等。可以矩陣列方式、園形方式或其他形狀排列。所述組織點選自以下食道癌腫瘤組織,癌旁組織。下面結合實施例具體闡述本
發明內容
I. 90點I種腫瘤組織分化I級,,II級,III級的微陣列芯片90點I種腫瘤組織分化I級,II級,III級以及相對應的癌旁組織的微陣列芯片中每個點的組織類型信息如表格一所示,排列后形成的組織芯片效果圖如圖2所示1為經過防脫片處理的在玻片,2為排列的組織樣本。點的直徑為I. 5mm,點之間的間距為2mm。共有組織樣本90個點,每行15個點,共6行。下面結合表格一詳敘陣列中排列點的組織類型從芯片左上角開始第一行的第1,2, 3,4, 5,6, 7,8,9,10,11,12,13,14,15點分別為食道癌患者I,食道癌患者2,食道癌患者3,食道癌患者4,食道癌患者5,食道癌患者6,食道癌患者7,食道癌患者8,食道癌患者9,食道癌患者10,食道癌患者11,食道癌患者12,食道癌患者13,食道癌患者14,食道癌患者15組織;第二行的第16,17,18,19,20,21,22,23,24, 25,26,27,28,29,30點分別為食道癌患者I癌旁組織,食道癌患者2癌旁組織,食道癌患者3癌旁組織,食道癌患者4癌旁組織,食道癌患者5癌旁組織,食道癌患者6癌旁組織,食道癌患者7癌旁組織,食道癌患者8癌旁組織,食道癌患者9癌旁組織,食道癌患者10癌旁組織,食道癌患者11癌旁組織,食道癌患者12癌旁組織,食道癌患者13癌旁組織,食道癌患者14癌旁組織,食道癌患者15癌旁組織組織;第三行的第31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45點分別為食道癌患者16,食道癌患者17,食道癌患者18,食道癌患者19,食道癌患者20,食道癌患者21,食道癌患者22,食道癌患者23,食道癌患者24,食道癌患者25,食道癌患者26,食道癌患者27,食道癌患者28,食道癌患者29,食道癌患者30組織;第四行的第 45,46,47,48,49,50,51,52,53,54,55,56,57,58,59,60 點分別為食道癌患者16癌旁組織,食道癌患者17癌旁組織,食道癌患者18癌旁組織,食道癌患者19癌旁組織,食道癌患者20癌旁組織,食道癌患者21癌旁組織,食道癌患者22癌旁組織,食道癌患者23癌旁組織,食道癌患者24癌旁組織,食道癌患者25癌旁組織,食道癌患者26癌旁組織,食道癌患者27癌旁組織,食道癌患者28癌旁組織,食道癌患者29癌旁組織,食道癌患者 30 癌旁組織;第五行的第 61,62,63,64,65,66,67,68,69,70,71,72,73,74,75 點分別為食道癌患者31,食道癌患者32,食道癌患者33,食道癌患者34,食道癌患者35,食道癌患者36,食道癌患者37,食道癌患者38,食道癌患者39,食道癌患者40,食道癌患者41,食道癌患者42,食道癌患者43,食道癌患者44,食道癌患者45組織;第六行的第76,77,78,79,80,81,82,83,84,85,86,87,88,89,90,91點分別為食道癌患者31癌旁組織,食道癌患者32癌旁組織,食道癌患者33癌旁組織,食道癌患者34癌旁組織,食道癌患者35癌旁組織,食道癌患者36癌旁組織,食道癌患者37癌旁組織,食道癌患者38癌旁組織,食道癌患者39癌旁組織,食道癌患者40癌旁組織,食道癌患者41癌旁組織,食道癌患者42癌旁組織,食道癌患者43癌旁組織,食道癌患者44癌旁組織,食道癌患者45癌旁組織;這一張90點I種腫瘤組織分化I級,II級,III級的微陣列芯片用于組織形態學教學實驗,免疫組化,原位雜交,免疫熒光等不同試驗研究。表格一
I一行 I I丨食道癌患者I丨病理類型食道鱗狀細胞癌I級,P21(+)
權利要求
1.一種組織微陣列芯片,包括片基和組織點,組織點以點陣方式排列并附于片基之上,其特征在于所述組織點由人類腫瘤組織構成。
2.根據權利要求I所述的一種組織微陣列芯片,其特征在于所述片基可以是玻璃、膠片、生物膜、硅芯片、聚二氟乙烯膜或硝酸纖維膜。
3.根據權利要求2所述的一種組織微陣列芯片,其特征在于所述片基可以是經過防脫片處理。
4.根據權利要求I所述的一種組織微陣列芯片,其特征在于,所述組織點直徑為,0. 7mm, I. 0mm, I. 5mm, 2. 0mm, 2. 5mm, 3. 0mm, 3. 5mm, 4. 0mm, 4. 5mm, 5. 0mm, 5. 5mm 或 6. Omnin
5.根據權利要求I所述的一種組織微陣列芯片,其特征在于所述點陣方式可以為矩陣列方式或園形方式排列,密度為500至I個點/平方厘米,數量為1000點至10點。
6.根據權利要求I所述的一種組織微陣列芯片,其特征在于所述及的人類腫瘤組織為食道鱗狀細胞癌,分化程度為I至III級。
7.根據權利要求6所述的一種組織微陣列芯片,其特征在于所述及的人類腫瘤組織相關的分子指標為P21 (+)、P21 (-)
8.根據權利要求6所述的一種組織微陣列芯片,其特征在于所述及的人類腫瘤組織數量為90點,按點矩陣列方式排列,每行15個點,共6行,點的直徑為I. 5mm,點之間的間距為0. Smnin
全文摘要
本發明公開了一種組織微陣列芯片,該芯片上組織點由人食道癌組織和癌旁組織構成,從而可以在分子、細胞、組織水平上研究不同分化程度的腫瘤組織和癌旁組織之間關系。該芯片亦可篩選出特異性、有意義的基因和及其表達的蛋白質。
文檔編號G01N33/574GK102735837SQ201110091930
公開日2012年10月17日 申請日期2011年4月13日 優先權日2011年4月13日
發明者周瓊, 郜恒駿 申請人:上海芯超生物科技有限公司