專利名稱：糖化血紅蛋白分析儀四梯度洗脫分析法的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種離子交換層析法檢測糖化血紅蛋白濃度的糖化血紅蛋白分析儀四梯度洗脫分析法。
背景技術：
人體血液中糖化血紅蛋白的濃度是糖尿病診斷的重要臨床指標。正常血紅蛋白 (Hb)被糖化后會形成多種亞組分，但最主要的亞組分為HbA1。，其形成后結構穩定，有90 120天的生命周期。通過檢測該指標，可反映糖尿病人三個月的平均血糖水平。因此，臨床上一般以該指標作為糖尿病人的篩查、診斷、治療的重要依據。現在糖化血紅蛋白的測定方法有離子交換層析法、電泳法、免疫比濁法和親和層析法。最主要的方法為離子交換層析法。采用離子交換層析法是基于血紅蛋白糖化后會導致血紅蛋白分子表面陽離子丟失。當含有糖化血紅蛋白的樣本經過陽離子交換層析柱時，糖化血紅蛋白和非糖化血紅蛋白均被陽離子交換樹脂所吸附。因不同亞組分的糖化血紅蛋白和非糖化血紅蛋白分子表面所帶正電荷各不相同，所以與陽離子交換樹脂的吸附力也各不相同。用不同離子濃度的洗脫液，采取由低到高的梯度洗脫方法，可以逐次洗脫出不同亞組分的糖化血紅蛋白和非糖化血紅蛋白。目前臨床上采用離子交換液相層析法來分離糖化血紅蛋白的方法，其中又分為離子交換高效液相色譜分析法(HPLC)和離子交換低壓液相色譜分析法(LPLC)。其中，離子交換高效液相色譜分析法(HPLC)為糖化血紅蛋白HbAlc國際公認的金標準分析方法。上述兩種方法為能分離出多種糖化血紅蛋白亞組分，均只采用兩種離子濃度的洗脫液，即一種高離子濃度洗脫液和一種低離子濃度洗脫液。在使用時，是通過機內設置一個機械式的六通旋轉分配閥來配比生成不同離子濃度的洗脫液，以對樣本進行洗脫。理論上講，配比出的離子濃度種類越多，能洗脫的亞組分越多。高壓液相層析法由于采用能耐受近180個大氣壓的離子交換層析柱，因此，一般可以層析出多達十幾種糖化血紅蛋白的亞組分。而低壓液相層析法的儀器，雖壓力為常壓，但也能分離出近2-3種糖化血紅蛋白亞組分。而臨床實踐中，真正具有指導意義的指標只有HbA1。，其他亞組分對臨床上糖尿病的篩查、治療效果的檢查沒有太大的實際意義，一般只能用于研究或特殊病例。因而分離出的大多數結果對臨床的指導意義并不大。但由于采用機內配比不同濃度洗脫液，必然帶來儀器的復雜程度增高、 故障率增加，洗脫液的交叉污染嚴重，儀器的制造、維修、使用的成本也高。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是，提供一種在準確檢測糖化血紅蛋白濃度同時，可簡化檢測設備結構和檢測程序、提高設備運行可靠性、降低設備成本，同時可減少洗脫液交叉污染的糖化血紅蛋白分析儀四梯度洗脫分析法。本發明的方法是設置四種固定濃度的洗脫液，使其分別對吸附有待測樣本的陽離子交換樹脂進行洗脫，并對洗脫后的液體進行色譜分析，確定洗脫成份的含量，進而確定糖化血紅蛋白濃度；所述的四種洗脫液分別為A洗脫液，用于陽離子交換樹脂清洗、平衡；其組成成份及重量百分比為=NaH2PO4 0. 146 0. 166 Na2HPO4 0. 035 0. 055 NaCl 0. 022 0. 024 KCl 0. 032 0. 034%, NaN3 0. 019 0. 021%、去離子水余量；B洗脫液，用于洗脫糖化血紅蛋白其他亞組分HbAla、HbAlb;其組成成份及重量比百分比為NaH2PO4 0. 124 0. 144%,Na2HPO4 0. 043 0. 063%,NaCl 0. 341 0. 361%,KCl 0. 034 0. 036%, NaN3 0. 019 0. 021%、去離子水余量；C洗脫液，用于洗脫糖化血紅蛋白HbA1。亞組分；其組成成份及重量比百分比為 NaH2PO4 0. 118 0. 138%、Na2HP04 0 . 0 39 0. 041 %、NaC10. 688 0. 708%、KC1 0. 072 0. 074%, NaN3 0. 019 0. 021%、去離子水余量；D洗脫液用于洗脫非糖化血紅蛋白及再生陽離子交換樹脂；其組成成份及重量比百分比為NaH2PO4 0. 1 0. 12%、Na2HPO4 0. 064 0. 074%、NaCl 1. 605 1. 805%、 NaN3 0. 019 0. 021%、去離子水余量；采用本發明方法的儀器也只需采用普通的電磁閥和簡單的流路系統在常壓的條件下就能實現只有高效液相層析法在高壓條件下才能實現的糖化血紅蛋白HbAle的分離精度，也避免了為配比多種離子濃度洗脫液而必須采用的結構復雜的六通旋轉分配閥，消除了不同濃度洗脫液之間的交叉污染影響，可使洗脫液的離子濃度更精確可靠，糖化血紅蛋白HbAle亞組分的分離精度更高。由于人體血液中的糖化血紅蛋白的濃度是診斷糖尿病的重要臨床指標。人體血液中正常血紅蛋白(Hb)由三種血紅蛋白亞組分組成血紅蛋白A(HbA)，血紅蛋白F(HbF)，血紅蛋白A2 (HbA2)。成人血紅蛋白中主要含有血紅蛋白A (HbA)，約占整個血紅蛋白的95 % 97%。而血紅蛋白A(HbA)又由兩種亞組分組成糖化血紅蛋白(HbAl) (5% 7% )和非糖化血紅蛋白(HbAO) (90%)。糖化血紅蛋白(HbAl)是血紅蛋白(Hb)與糖類(如葡萄糖、 6-磷酸葡萄糖或1.6-二磷酸果糖)經非酶促結合而成的。在糖化血紅蛋白(HbAl)中，除存在少量其他不同變異體外，主要亦有三種亞組分，分別為HbAla、HbAlb和HbAlc。其中， HbAlc約占HbAl的75% 80%，且結構穩定。因此，通過本發明的方法對糖化血紅蛋白 (HbAl)的各亞組分及非糖化血紅蛋白(HbAO)進行精確的洗脫分離就可以通過理論推導獲得糖化血紅蛋白的濃度。經試驗對比，本發明方法的檢測結果能夠完全滿足臨床診斷的需要。
圖1是本發明方法實施例所采用的檢測設備原理圖。
具體實施例方式在圖1所示的檢測設備中，設置四種獨立的洗脫液，即A洗脫液1、B洗脫液2、C 洗脫液3、D洗脫液4，四種洗脫液容器的出口管路分別由各自的電磁閥控制，并可分別在蠕動泵5的作用下經過吸附了待測樣本的陽離子交換樹脂6，洗脫后進入比色池進行色譜分析。洗脫液的具體實施例如下實施例一
序號名稱化學名磷酸二氫鈉磷酸氫二鈉氯化鈉氯化鉀疊氮鈉去離子水NaH2PO4Na2HPO4NaClKClNaN3H2O1A洗脫液0. 1460. 0350. 0220. 0320. 01999.7462B洗脫液0. 1240. 0430. 3410. 0340. 01999.4393C洗脫液0. 1180. 0390. 6880. 0720. 01999. 0644D洗脫液0. 10. 0641. 605-0. 01998.212實施例
序號名稱化學名磷酸二氫鈉磷酸氫二鈉氯化鈉氯化鉀疊氮鈉去離子水NaH2PO4Na2HPO4NaClKClNaN3H2O1A洗脫液0. 1560. 0450. 0230. 0330. 02099. 7232B洗脫液0. 1340. 0530. 3510. 0350. 02099.4073C洗脫液0. 1280. 0400. 6980. 0730. 02099. 0414D洗脫液0. 110. 0691. 705-0. 02098. 096實施例三
序號名稱化學名磷酸二氫鈉磷酸氫二鈉氯化鈉氯化鉀疊氮鈉去離子水NaH2PO4Na2HPO4NaClKClNaN3H2O1A洗脫液0. 1660. 0550. 0240. 0340. 02199. 72B洗脫液0. 1440. 0630. 3610. 0360. 02199. 3753C洗脫液0. 1380. 0410. 7080. 0740. 02199. 0644D洗脫液0. 120. 0741. 805-0. 02197. 98將上述實施例的洗脫液用于糖化血紅蛋白分析儀中，進行四梯度洗脫分析，對其精密度和準確度進行試驗，結果如下1.精密度試驗
權利要求
1. 一種糖化血紅蛋白分析儀四梯度洗脫分析法，其特征是設置四種固定濃度的洗脫液，使其分別對吸附有待測樣本的陽離子交換樹脂進行洗脫，并對洗脫后的液體進行色譜分析，確定洗脫成份的含量，進而確定糖化血紅蛋白濃度； 所述的四種洗脫液分別為A洗脫液，用于陽離子交換樹脂清洗、平衡；其組成成份及重量比百分比為=NaH2PO4 0. 146 0. 166%、Na2HPO4 0. 035 0. 055%、NaCl 0. 022 0. 024%、KCl 0. 032 0. 034%、 NaN3 0. 019 0. 021%、去離子水余量；B洗脫液，用于洗脫糖化血紅蛋白其他亞組分HbAla、HbAlb;其組成成份及重量比百分比為=NaH2PO4 0. 124 0. 144%,Na2HP04 0 . 043 0. 063%,NaCl 0. 341 0. 361%,KCl 0. 034 0. 036%、NaN3 0. 019 0. 021%、去離子水余量；C洗脫液，用于洗脫糖化血紅蛋白HbA1。亞組分；其組成成份及重量比百分比為 NaH2PO4 0. 118 0. 138%、Na2HPO4 0. 039 0. 041%、NaCl 0. 688 0. 708%、KCl 0. 072 0. 074%、NaN3 0. 019 0. 021%、去離子水余量；D洗脫液用于洗脫非糖化血紅蛋白及再生陽離子交換樹脂；其組成成份及重量比百分比為NaH2PO4 0. 1 0. 12%、Na2HPO4 0. 064 0. 074%、NaCl 1. 605 1. 805%、NaN3 0. 019 0. 021%、去離子水余量。
全文摘要
本發明涉及一種離子交換層析法檢測糖化血紅蛋白濃度的糖化血紅蛋白分析儀四梯度洗脫分析法。本發明的方法是設置四種固定濃度的洗脫液，使其分別對吸附有待測樣本的陽離子交換樹脂進行洗脫，并對洗脫后的液體進行色譜分析，確定洗脫成份的含量，進而確定血糖濃度；所述的四種洗脫液分別為A洗脫液，用于陽離子交換樹脂清洗、平衡；B洗脫液，用于洗脫糖化血紅蛋白其他亞組分HbA1a、HbA1b；C洗脫液，用于洗脫糖化血紅蛋白HbA1c亞組分；D洗脫液:用于洗脫非糖化血紅蛋白及再生陽離子交換樹脂。本發明在準確檢測糖化血紅蛋濃度同時，可簡化檢測設備結構和檢測程序、提高設備運行可靠性、降低設備成本，同時可減少洗脫液交叉污染。
文檔編號G01N30/34GK102226788SQ20111008478
公開日2011年10月26日 申請日期2011年4月6日 優先權日2011年4月6日
發明者莊東寧 申請人:江蘇奧迪康醫學科技有限公司