專利名稱:一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對動(dòng)物源性食品中多粘菌素e殘留量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及動(dòng)物源性食品中多粘菌素E殘留量的測定方法,特別是涉及一種通過超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀對動(dòng)物源性食品中多粘菌素E的殘留量進(jìn)行檢測的方法。
背景技術(shù):
多粘菌素屬于多肽類抗生素,主要有A、B、C、D、E五種成分。獸醫(yī)臨床應(yīng)用的主要是多粘菌素B、多粘菌素E,其中以多粘菌素B,抗菌活性最強(qiáng),但其毒性較大。而多粘菌素E即粘桿菌素,具有較低的毒性及良好的抗菌活力。多粘菌素E是Koyama等從福島縣土壤中分離到一株多粘芽孢桿菌抗敵素變株培養(yǎng)液中產(chǎn)生的堿性多肽類抗生素。多粘菌素 E又名粘菌素、克利斯汀、粘桿菌素、抗敵素等,它是一種至少含有30多種不同成分的混和物,主要為多粘菌素El和多粘菌素E2的混合物,粘桿菌素A和粘桿菌素B的分子式分別為 C53H100N16O13和C52H98N16O1315近年來,一些國家出現(xiàn)假芽孢桿菌和不動(dòng)桿菌的多重耐藥性,多粘菌素治療此類細(xì)菌具有較好效果。但要盡量降低其毒副作用,充分利用其促生長和預(yù)防、 治療作用;避免隨意加大劑量或延長用藥時(shí)間而引起不必要的毒副作用;肌肉注射粘桿菌素后要有休藥期;嚴(yán)禁在畜禽產(chǎn)蛋期和產(chǎn)奶期使用粘桿菌素。因此建立一種快速、準(zhǔn)確、方便和經(jīng)濟(jì)的檢測方法,有利于監(jiān)控動(dòng)物源性食品中粘桿菌素的殘留量。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于,通過摸索提取液最佳配比,最佳的提取時(shí)間, 最佳的凈化條件和最佳色譜質(zhì)譜條件而提供動(dòng)物源性食品中多粘菌素E的殘留量測定方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采取以下設(shè)計(jì)方案本發(fā)明的動(dòng)物源性食品中多粘菌素E殘留量的測定方法包括如下步驟稱取已粉的試樣5. Og (精確至0. OOOlg)于50mL具塞離心管中,加入提取液25mL, 均質(zhì)anin后,4°C下10000r/min離心lOmin。轉(zhuǎn)移上清液至另一離心管中,殘?jiān)屑尤?0mL 提取液重復(fù)以上提取操作。合并2次提取上清液后,加入正己烷20mL渦旋2min,IOOOOr/ min離心lOmin,棄去上層液。下層液中再加入正己烷20mL重復(fù)以上脫脂操作,所得下層液待凈化。將上述所得試樣提取液轉(zhuǎn)移至Oasis HLB凈化柱(用甲醇和水各6mL預(yù)洗活化), 先用IOmL水洗滌,棄去流出液。再用3mL甲醇洗脫,收集洗脫液,于40°C水浴上氮?dú)饬飨聦⒂袡C(jī)相吹干。試樣用甲醇溶解并定容到1. OOmL后,混勻,經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾,得到試樣處理液。稱取多粘菌素E標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶解后作為儲(chǔ)備液,然后進(jìn)一步用甲醇稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液;利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀對標(biāo)準(zhǔn)液和試樣處理液進(jìn)行檢測;計(jì)算結(jié)果,試樣中多粘菌素E的計(jì)算公式為
權(quán)利要求
1.一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對動(dòng)物源性食品中多粘菌素E殘留量的測定方法,其特征在于所述測定方法包括如下步驟稱取已粉碎的試樣5. Og (精確至0. OOOlg)于50mL具塞離心管中,加入提取液25mL,均質(zhì)anin后,4°C下10000r/min離心lOmin。轉(zhuǎn)移上清液至另一離心管中,殘?jiān)屑尤?0mL 提取液重復(fù)以上提取操作。合并2次提取上清液后,加入正己烷20mL渦旋2min,IOOOOr/ min離心lOmin,棄去上層液。下層液中再加入正己烷20mL重復(fù)以上脫脂操作,所得下層液待凈化。將上述所得試樣提取液轉(zhuǎn)移至Oasis HLB凈化柱(用甲醇和水各6mL預(yù)洗活化),先用IOmL水洗滌,棄去流出液。再用3mL甲醇洗脫,收集洗脫液,于40°C水浴上氮?dú)饬飨聦⒂袡C(jī)相吹干。試樣用甲醇溶解并定容到1. OOmL后,混勻,經(jīng)0. 22 μ m濾膜過濾,得到試樣處理液。稱取多粘菌素E標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶解后作為儲(chǔ)備液,然后進(jìn)一步用甲醇稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液;利用超高效液相色譜-串聯(lián)四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀對標(biāo)準(zhǔn)液和試樣處理液進(jìn)行檢測; 計(jì)算結(jié)果,試樣中多粘菌素E的計(jì)算公式為
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對動(dòng)物源性食品中多粘菌素 E殘留量的測定方法,其特征在于所述甲醇和甲酸水溶液(6+4)提取,理想的提取液配比, 很好的控制了雜質(zhì)的干擾,并保證了回收率。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對動(dòng)物源性食品中多粘菌素 E殘留量的測定方法,其特征在于均質(zhì)提取時(shí)間為2min,此條件下具有最好的混合提取效率。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對動(dòng)物源性食品中多粘菌素E 殘留量的測定方法,其特征在于4°C下離心lOmin,具有很好的分離效果。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對動(dòng)物源性食品中多粘菌素E 殘留量的測定方法,其特征在于采用HLB固相萃取柱凈化,具有很好的凈化效果。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對動(dòng)物源性食品中多粘菌素 E殘留量的測定方法,其特征在于所述利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀對試樣處理液進(jìn)行檢測的條件為液相色譜條件分析柱:Acquity BEH-C18,2. ImmX 50mm, 1. 7 μ m 流動(dòng)相乙腈+0. 甲酸水溶液=20+80 流速0. 2mL/min進(jìn)樣量10yL 質(zhì)譜條件離子源電噴霧離子源;掃描方式正離子掃描;檢測方式多反應(yīng)監(jiān)測;電噴霧電壓3. Okv ;離子源溫度110°C ;去溶劑溫度400°C ;離子對、錐孔電壓、碰撞能量見表1。表1粘桿菌素的離子對、錐孔電壓、碰撞能量
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對動(dòng)物源性食品中多粘菌素E 殘留量的測定方法,其特征在于利用較為先進(jìn)、靈敏度高的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀對動(dòng)物源性食品中多粘菌素E的殘留量進(jìn)行檢測。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種超高液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對動(dòng)物源性食品中多粘菌素E殘留量的測定方法。即待測試樣中加入提取液,充分渦動(dòng)提取,高速冷凍離心,然后過濾凈化獲得試樣液;稱取多粘菌素E標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶解后作為儲(chǔ)備液,然后進(jìn)一步用甲醇稀釋為具有濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)使用液;利用超高效液相色譜-串聯(lián)四級桿液質(zhì)聯(lián)用儀對試樣處理液進(jìn)行檢測;于標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出多粘菌素E的濃度值,然后計(jì)算出試樣中多粘菌素E的結(jié)果。采用本發(fā)明的方法檢測動(dòng)物源性食品中多粘菌素E的殘留量,快速有效,相對平均偏差小于10%。由此可見,本發(fā)明的方法,對于動(dòng)物源性食品中多粘菌素E殘留量的檢測,提供了一種可靠的便于實(shí)施的方法,能夠滿足研究和生產(chǎn)中的需要。
文檔編號(hào)G01N30/72GK102230920SQ20111007297
公開日2011年11月2日 申請日期2011年3月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月24日
發(fā)明者宋薇 申請人:深圳市譜尼測試科技有限公司