專利名稱：動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種動物性食品中獸藥殘留量的測定方法，特別是涉及一種測定動物 性食品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺二甲氧基嘧啶五種 磺胺類藥物殘留量的液相色譜法。
背景技術：
磺胺類藥物在畜牧生產中的應用十分廣泛，在降低動物發病率、死亡率方面的作 用非常顯著；還可以顯著改善水產動物的品質。但如果長期食用含有磺胺類藥物殘留的動 物性食品，殘留的藥物能造成中毒；破壞人的造血系統，造成溶血性貧血癥、粒細胞缺乏癥、 血小板減少等癥；甚至可影響中樞神經系統。磺胺類藥物的殘留不僅給人類的健康帶來極 大的危害，而且嚴重影響我國動物性食品的出口，造成巨大的經濟損失，因此研究磺胺類藥 物在動物性食品中的殘留量是十分必要的。中國發明專利CN 100376893C公布了一種測 定魚肉中磺胺甲惡唑的液相色譜法，在該方法的樣品前處理時，樣品先要與鹽酸混合靜置1 小時、然后用3 1比例的二氯甲烷/丙酮混合液作為提取液提取，加入提取液后，仍需要 在4°C冰箱內靜置8-12小時，還需用高速均質器均質并多次離心，步驟繁雜，耗時，不能自 動化。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種操作簡單，快速，自動化程度高，萃取效率 高，回收率和重復性好的動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法。本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，包括以下步驟a、樣品制備將樣品絞碎，冷凍保存；b、樣品前處理準確稱取樣品，與硅藻土混和均勻至樣品沒有結塊，轉移至底部放 一層纖維濾紙的萃取池中，將萃取池放置于快速溶劑萃取儀上進行萃取，所得到的提取液 中加入正己烷去除脂類雜質，劇烈振蕩后靜止分層，棄去正己烷層，再加入正己烷重復操作 兩次，下層溶液轉入濃縮瓶中，在水浴40°C的旋轉蒸發儀中減壓旋蒸至干，以流動相溶解殘 渣，溶液經濾膜過濾供HPLC分析；C、標準溶液的配制分別準確稱取磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺 胺甲惡唑、磺胺二甲氧基嘧啶標準品，溶于乙腈中，配制成同時含有上述四種標準品且其濃 度均為200mg/L的混合標準儲備液，冷凍保存；臨用前，準確量取上述混合標準儲備液，用 流動相稀釋成系列梯度的標準工作液，低溫條件下避光保存，當天使用；d、高效液相色譜測定吸取配制好的不同濃度的標準工作液，注入配有UV檢測器 的高效液相色譜儀；e、殘留量測定結果的計算以保留時間進行磺胺類藥物的定性分析，以峰面積進 行磺胺類藥物的定量分析，用外標法計算結果；所述流動相的配制取乙腈、乙酸、水按體積比25 2 73配制流動相。
本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，其中所述步驟a與步驟 c中的冷凍保存條件是_18°C。本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，其中所述步驟b中的樣 品前處理，硅藻土與樣品的質量比例是(1 3) 1 ；正己烷濃度為每克樣品中加入5 IOml正己烷；快速溶劑萃取儀參數設置為萃取溶劑乙腈，溫度120°C，壓力10. OMPa, 加熱時間5min，靜態時間5min，沖洗體積萃取池體積的40%，氮氣吹掃時間60s，靜態 循環次數1次；減壓旋蒸時真空度為-0. 096Mpa ；濾膜孔徑為0. 45 μ m。本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，其中所述步驟c中系列 梯度的標準工作液為0. 05,0. 1,0. 2,0. 5、1和5mg/L。本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，其中所述步驟d中 采用的高效液相色譜條件為基質為B型超高純球形硅膠的C18液相色譜柱，規格為 4. 6_\250_父5“111，硅膠純度> 99. 999%，柱溫30°C ；流動相流速為1. OmL/min，進樣量 SlOyL,紫外檢測波長為268nm。本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，其中所述快速溶劑萃取 儀選用北京吉天儀器有限公司APLE2000快速溶劑萃取儀。本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法利用快速溶劑萃取儀在 高溫高壓下萃取動物性食品中磺胺類藥物，萃取液經凈化進高效液相色譜進行分析測定。 快速溶劑萃取法萃取溶劑用量少，操作簡單，自動化程度高，萃取效率高，回收率和重復性 好。
圖1是五種磺胺類藥物的標準色譜圖。其中(1)代表磺胺嘧啶，⑵代表磺胺甲基嘧啶，(3)代表磺胺二甲基嘧啶，⑷代 表磺胺甲惡唑，(5)代表磺胺二甲氧基嘧啶。
具體實施例方式本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法包括以下步驟標準溶液的配制分別準確稱取磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺 甲惡唑、磺胺二甲氧基嘧啶標準品，溶于乙腈中，配制成同時含有上述四種標準品且其濃度 均為200mg/L的混合標準儲備液，_18°C條件下保存(有效期為1個月)；臨用前，準確量取 上述混合標準儲備液，用流動相稀釋成0. 05,0. 1,0. 2,0. 5、1和5mg/L系列梯度的標準工作 液，4°C條件下避光保存，當天使用；流動相的配制取乙腈、乙酸、水按體積比25 2 73 配制流動相。高效液相色譜測定吸取配制好的不同濃度的標準工作液，注入配有UV檢測器的 高效液相色譜儀，采用的高效液相色譜條件為基質為B型超高純球形硅膠的C18液相色譜 柱，規格為4. 6_\250_父5“111，硅膠純度> 99. 999%，柱溫30°C ；流動相流速為LOmL/ min，進樣量為10 μ L，紫外檢測波長為^8nm。殘留量測定實施例1 測定5個雞肉樣品，將樣品絞碎，_18°C條件下冷凍保存；
樣品前處理準確稱取Ig樣品，與2g硅藻土混和均勻至樣品沒有結塊，轉移至底 部放一層纖維濾紙的萃取池中，將萃取池放置于快速溶劑萃取儀上進行萃取，萃取溶劑乙 腈，溫度:120°C，壓力10. OMPa，加熱時間5min，靜態時間5min，沖洗體積萃取池體積的 40%，氮氣吹掃時間60s，靜態循環次數1次，用乙腈快速沖洗樣品，氮氣吹掃收集全部提 取液。所得到的提取液中加入5ml正己烷去除脂類雜質，劇烈振蕩后靜止分層，棄去正己烷 層，再加入5ml正己烷重復操作兩次，下層溶液轉入濃縮瓶中，在水浴40°C的旋轉蒸發儀中 減壓旋蒸至干，減壓旋蒸時真空度為-0. 096Mpa。以流動相溶解殘渣，并準確定容lmL，溶液 經0. 45 μ m濾膜過濾供HPLC分析；快速溶劑萃取儀選用北京吉天儀器有限公司APLE2000 快速溶劑萃取儀。殘留量測定結果的計算以保留時間進行磺胺類藥物的定性分析，以峰面積進行磺胺類藥物的定量分析， 用外標法計算結果，結果在三個雞肉樣品中檢測到磺胺類藥物，結果見表1。表1實際樣品中磺胺類獸藥的含量
權利要求
1.一種動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，包括以下步驟a、樣品制備將樣品絞碎，冷凍保存；b、樣品前處理準確稱取樣品，與硅藻土混和均勻至樣品沒有結塊，轉移至底部放一 層纖維濾紙的萃取池中，將萃取池放置于快速溶劑萃取儀上進行萃取，所得到的提取液中 加入正己烷去除脂類雜質，劇烈振蕩后靜止分層，棄去正己烷層，再加入正己烷重復操作兩 次，下層溶液轉入濃縮瓶中，在水浴40°C的旋轉蒸發儀中減壓旋蒸至干，以流動相溶解殘 渣，溶液經濾膜過濾供HPLC分析；C、標準溶液的配制分別準確稱取磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲 惡唑、磺胺二甲氧基嘧啶標準品，溶于乙腈中，配制成同時含有上述四種標準品且其濃度均 為200mg/L的混合標準儲備液，冷凍保存；臨用前，準確量取上述混合標準儲備液，用流動 相稀釋成系列梯度的標準工作液，低溫條件下避光保存，當天使用；d、高效液相色譜測定吸取配制好的不同濃度的標準工作液，注入配有UV檢測器的高 效液相色譜儀；e、殘留量測定結果的計算以保留時間進行磺胺類藥物的定性分析，以峰面積進行磺 胺類藥物的定量分析，用外標法計算結果；所述流動相的配制取乙腈、乙酸、水按體積比25 2 73配制流動相。
2.根據權利要求1所述的動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，其特征在 于所述步驟a與步驟c中的冷凍保存條件是_18°C。
3.根據權利要求1所述的動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，其特征 在于所述步驟b中的樣品前處理，硅藻土與樣品的質量比例是(1 幻1;正己烷濃度 為每克樣品中加入5 IOml正己烷；快速溶劑萃取儀參數設置為萃取溶劑乙腈，溫度 120°C，壓力10. OMPa，加熱時間5min，靜態時間5min，沖洗體積萃取池體積的40 %， 氮氣吹掃時間60s，靜態循環次數1次；減壓旋蒸時真空度為-0. 096Mpa ；濾膜孔徑為 0. 45 μ m0
4.根據權利要求1所述的動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，其特征在 于所述步驟c中系列梯度的標準工作液為0. 05,0. 1,0. 2,0. 5、1和5mg/L。
5.根據權利要求1所述的動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法，其特征在 于所述步驟d中采用的高效液相色譜條件為基質為B型超高純球形硅膠的C18液相色譜 柱，規格為4. 6_\250_父5“111，硅膠純度> 99. 999%，柱溫30°C ；流動相流速為LOmL/ min，進樣量為10 μ L，紫外檢測波長為^8nm。
6.根據權利要求1至5所述之一的動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法， 其特征在于所述快速溶劑萃取儀選用北京吉天儀器有限公司APLE2000快速溶劑萃取儀。
全文摘要
本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法涉及一種測定動物性食品中藥物殘留量的液相色譜法。其目的是為了提供一種操作簡單，快速，自動化程度高，萃取效率高，回收率和重復性好的測定方法。本發明動物性食品中五種磺胺類藥物殘留量的測定方法包括以下步驟樣品制備；樣品前處理稱取樣品，與硅藻土混和均勻，轉移至萃取池中，將萃取池放置于快速溶劑萃取儀上進行萃取，所得到的提取液中加入正己烷去除脂類雜質，劇烈振蕩后靜止分層，棄去正己烷層，再加入正己烷重復操作兩次，下層溶液轉入濃縮瓶中，在旋轉蒸發儀中減壓旋蒸至干，以流動相溶解殘渣，溶液經濾膜過濾供HPLC分析；標準溶液的配制；高效液相色譜測定。
文檔編號G01N30/06GK102081077SQ20111004540
公開日2011年6月1日 申請日期2011年2月24日 優先權日2011年2月24日
發明者于輝, 趙萍 申請人:北京吉天儀器有限公司