專利名稱：可重復使用的色譜設備的鑒定的制作方法
可重復使用的色譜設備的鑒定本文報道的方法屬于色譜領域，尤其是制備型柱色譜領域。本文報道了根據過程數據直接測定色譜柱的填料質量的方法。利用該方法，可實現節省處理時間和資源，因為其能夠省去僅用于柱完整性測定目的的額外的數據采集。
背景技術：
目前幾乎所有用于藥物的多肽都是通過重組方式制備的。由于嚴格的管理規范和要求，必須從治療性多肽制劑中盡可能多地除去副產物。因此，在重組生產后的粗的多肽原料的下游處理中會使用至少一個色譜步驟。由于與發酵方法的產量相關的色譜設備尺寸有限，尤其是色譜柱的分離能力有限，必須處理多個批次才能夠提供需要量的純化的治療性多肽。為了確保每個批次的純化的治療性多肽具有相同的藥學作用，每個批次都必須符合一系列的分析參數。如果純化過程的各步驟操作穩定而有效，則能達到這一點。但是，如果純化過程的一個步驟工作不正常，所得的產物將很有可能不能通過分析測試，而且在最壞的情況下，該批次將不能使用。因此，需要提供用于確定純化步驟的性能和功效的方法。Teeters, Μ. Α.和 Quinones-Garcia，I. (J. Chrom. A 1069(2005)53-64)報道了通過使用對來自示蹤試驗和過程轉變的基于電導率的脈沖和階躍輸入的響應、尤其是來自測量的滯留時間分布，評價和監測生產規模的色譜柱的填料性能。Norling等人 (Norling, L.等人，J. Chrom. A 1069 ^00 79-89)報道了陰離子交換色譜介質的多次重復使用對病毒去除的影響。Larson等人報道了使用過程數據來評價生產規模的蛋白純化柱的色譜性能(Larson，Τ. Μ.等人，Biotechnol. Prog. 19 0003)485-492)。Moscariello， J.等人，J. Chrom. A 908 (2001) 131-141報道了工業規模的柱的性能鑒定。Vink, H., J. Chrom. 69(1972)237-242 報道了色譜的拆分和柱效能。Sarker，Μ.和 Guiochon，G.， J. Chrom. A 702 (1995) 27-44報道了用于制備型色譜的軸向壓縮柱的填料性能研究。發明概述使用本文所報道的方法，能夠測定可重復使用的色譜柱填料的分離效能和/或填料質量的降低，而不需要在分離粗品多肽溶液前使用和注入另外的示蹤化合物來測定柱材料的完整性或者不需要該純化步驟的歷史數據。本文報道的第一方面是測定至少是在多肽純化的純化步驟中第二次使用的可重復使用的色譜柱填料是否降低了分離效能的方法，例如與其在同一多肽的相同純化的相同純化步驟中首次使用時的分離效能相比是否降低，該方法包括以下步驟a)鑒定和測定通過所述可重復使用的色譜柱填料的流動相的至少一種理化參數的惰性改變的實驗數據，b)通過擬合至少第二次使用的理化參數的惰性改變的實驗數據，確定式I的函數的參數，C)確定至少第二次使用的理化參數的惰性改變的實驗數據與具有步驟b)中確定的參數的式I的函數之間的差異，d)計算步驟C)中確定的差異的最大值和最小值之間的差異，并將所述差異標準化，e)當步驟d)中計算的差異的絕對值超過0. 1時，確定所述可重復使用的色譜柱填料的下降的分離效能，其中式I的函數是
權利要求
1.測定至少是在多肽純化的純化步驟中第二次使用的可重復使用的色譜柱填料是否在該多肽的所述純化的所述純化步驟中降低了分離效能的方法，其特征在于該方法包括以下步驟a)鑒定和測定通過至少第二次使用的所述可重復使用的色譜柱填料的流動相的至少一種理化參數的惰性改變的實驗數據，b)通過擬合所述至少第二次使用的理化參數的惰性改變的實驗數據，確定式I的函數的參數，c)確定所述至少第二次使用的理化參數的惰性改變的實驗數據與具有步驟b)中確定的參數的式I的函數之間的差異，d)計算步驟c)中確定的差異的最大值和最小值之間的差異，并將所述差異標準化，e)當步驟d)中計算的差異的絕對值超過0.1時，確定所述可重復使用的色譜柱填料的下降的分離效能，其中式I的函數是
2.多肽的色譜純化方法，其中包含至少一個使用可重復使用的色譜柱填料的色譜步驟，其特征在于該方法包括以下步驟a)鑒定和測定通過至少第二次使用的所述可重復使用的色譜柱填料的流動相的至少一種理化參數的惰性改變的實驗數據，b)通過擬合所述至少第二次使用的理化參數的惰性改變的實驗數據，確定式I的函數的參數，c)確定所述至少第二次使用的理化參數的惰性改變的實驗數據與具有步驟b)中確定的參數的式I的函數之間的差異，d)計算步驟c)中確定的差異的最大值和最小值之間的差異，并將所述差異標準化，其中式I的函數是
3.根據權利要求1或2的方法，其特征在于通過所述可重復使用的色譜柱填料的流動相的至少一種理化參數的所述惰性改變是由流動相中的不與所述可重復使用的柱填料相互作用的物質的濃度變化造成的改變。
4.根據上述權利要求任一項的方法，其特征在于所述惰性改變是電導率或在^Onm的吸收的改變。
5.根據上述權利要求任一項的方法，其特征在于通過所述可重復使用的色譜柱填料的流動相的至少一種理化參數的所述惰性改變是從含有變性劑的100%溶液到不含有所述變性劑的100%溶液的改變，或者反之亦然。
6.根據權利要求5的方法，其特征在于所述變性劑選自氫氧化鈉、胍氯化物、尿素或有機溶劑。
7.根據上述權利要求任一項的方法，其特征在于所述惰性改變是S形的變化。
8.根據上述權利要求任一項的方法，其特征在于所述惰性改變是隨時間的改變。
全文摘要
本文報道了測定至少是在多肽純化的純化步驟中第二次使用的可重復使用的色譜柱填料是否在該多肽的所述純化的所述純化步驟中降低了分離效能的方法。該方法包括以下步驟a)鑒定和測定通過所述可重復使用的色譜柱填料的流動相的至少一種理化參數的惰性改變的實驗數據，b)通過擬合所述至少第二次使用的理化參數的惰性改變的實驗數據，確定式I的函數的參數，c)確定所述至少第二次使用的理化參數的惰性改變的實驗數據與具有步驟b)中確定的參數的式I的函數之間的差異，d)計算步驟c)中確定的差異的最大值和最小值之間的差異，并將所述差異標準化，e)當步驟d)中計算的差異的絕對值超過0.1時，確定所述可重復使用的色譜柱填料的下降的分離效能，其中式I的函數具有振幅P1，起始值A0，平均值m，標準偏差s，以及其中erf是誤差函數。
文檔編號G01N30/86GK102460147SQ201080025101
公開日2012年5月16日 申請日期2010年6月22日 優先權日2009年6月24日
發明者A·別洛烏索夫, B·格瓦特, T·達姆斯 申請人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司