專利名稱：使用內標物質的測定方法
技術領域：
本發明涉及使用內標物質的測定對象物質的測定方法。
背景技術：
在毛細管電泳法中，以往進行的是使用1種內標物質，將其峰作為先端標記，來確定測定對象物質的大致位置(專利文獻1)。但是，僅使用1種內標物質的情況下，受測定條件或試樣中的夾雜物的影響，內標物質與測定對象物質的峰的位置關系發生變動。因此，在精度良好地確定測定對象物質的位置的情況下，使用分子量標記。測定對象物質為DNA或RNA的情況下，也已知使用高分子量側與低分子量側的2 種分子量標記來進行測定的情況。這種情況下使用的分子量標記為DNA或RNA，以其堿基數為基礎進行設定。S卩，在進行DNA或RNA的電泳的情況下，通過精確設定分子量標記的位置，可以根據與2個分子量標記的位置關系來求出分子量。但是，此處使用的分子量標記為利用嵌入劑進行了標識的DNA或RNA等，具有穩定性差、在使用血清試樣的情況下與試樣中的物質反應、背景提高、分子量標記的峰變寬等問題。另一方面，在測定對象物質為蛋白質或化合物的情況下，根據測定對象物質的分子量或電荷的不同，其遷移度不同，因而通常僅使用1種內標物質，其使用目的也是為了確定測定對象物質的大致位置。因此，在進行這樣的蛋白質或化合物的測定的情況下，目前希望開發出不具有上述DNA或RNA在測定時的問題、能夠精度良好地鑒定蛋白質或化合物的測定方法。特別是在微芯片電泳這樣的使用微細毛細管進行電泳的情況下，由于微細，因而即使在相同條件下進行，若進行芯片的替換，則物質的移動時間也有時會發生變化。因此， 難以確定目的峰的情況也是常見的。進一步地，在這樣的測定法的情況下，為了能夠進行高靈敏度測定，必須要使用不會對測定帶來影響且能夠靈敏度良好地進行測定的內標物質。 因此，也希望開發出在上述這樣的條件下對測定物質的峰進行鑒定的測定方法。現有技術文獻專利文獻專利文獻1 日本特開平2007-24610號公報
發明內容
發明所要解決的課題本發明的課題在于提供在測定對象物質為蛋白質或化合物的電泳法中使用內標物質的測定方法。用于解決課題的手段鑒于上述狀況，本發明人對于測定對象物質為蛋白質或化合物的情況下的利用使用內標物質的毛細管電泳法進行的測定方法的開發進行了深入研究，結果發現，作為內標物質，通過使用在分子內具有3個以上陰離子基團的化合物與該化合物的陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物的組合、或在分子內具有3個以上的陽離子基團的化合物與該化合物的陽離子基團的1 3個被取代為陰離子基團的化合物的組合來作為內標物質，即使測定對象物質為蛋白質或化合物，也能夠容易地確定測定對象物質的峰。即，在由負朝向正方向泳動的毛細管電泳法中，由于在分子內具有3個以上陰離子基團的化合物在較早的時間被檢測到峰、在分子內具有陽離子基團的化合物在較晚的時間被檢測到峰， 因而通過使用在分子內具有3個以上陰離子基團的化合物與使該化合物的陰離子基團或陽離子基團的1 3個呈相反電荷的物質，能夠將測定對象物質調整在2個內標物質之間， 由此能夠容易地鑒定測定對象物質的峰，從而完成了本發明。SP，本發明涉及“一種基于毛細管電泳法的測定對象物質的測定方法，該測定方法的特征在于將下述(1)或( 用作內標物質，對測定對象物質的峰進行鑒定(1)在分子內具有3個以上陰離子基團的化合物和該化合物的陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物的組合，(2)在分子內具有3個以上陽離子基團的化合物和該化合物的陽離子基團的1 3個被取代為陰離子基團的化合物的組合”。發明效果根據本發明，即使存在相鄰的2個以上的峰，也能夠容易地且精度良好地確定測定對象物質。另外，此處使用的標識物質不與試樣中的物質發生反應，不會帶來提高背景等的影響，因而即使在微量成分的分析中也能夠精度良好地進行測定。
圖1為示出實施例1中的DNA標識抗體的制備方法的圖。圖2為示出實施例1中的毛細管芯片的布置的圖。圖3為示意性示出實施例1中的毛細管芯片的泳動用試樣與試液的配置關系的圖。圖4為實施例1中利用本發明的方法測定AFP時的電泳圖譜。圖5為實施例1中利用本發明的方法測定PIVKA II時的電泳圖譜。
具體實施例方式[本發明的在分子內具有3個以上陰離子基團的化合物(下面有時簡稱為本發明的含有陰離子基團的化合物。)]作為本發明的含有陰離子基團的化合物，在其分子內陰離子基團通常具有3 10 個、優選具有5 8個、更優選具有5 6個、特別優選具有5個。上述這樣的化合物在由負朝向正的方向進行電泳的情況下，由于泳動速度變快，因而通常在早于任何測定對象物質的時間被檢測到峰，可以作為有用的內標物質來使用。作為上述陰離子基團，可以舉出例如-HP(V、-N0”-ci(V、-c0(r、-s(V，其中優選-cocr、-s(V。-cocr由于反應性高，因而適于將陽離子基團導入；-SO3-由于可以提高熒光強度，因而在對上述本發明的含有陰離子基團的化合物進行熒光檢測時優選具有該基團。需要說明的是，對于上述陰離子基團的具體例， 只要是在電泳時(溶解于電泳溶液中時)成為陰離子基團的物質即可，可以為與氫離子鍵合了的酸、或堿金屬鹽(例如鋰鹽、鈉鹽、鉀鹽、銣鹽)、銨鹽、有機銨鹽(例如三甲基銨鹽、三乙基銨鹽、三丙基銨鹽)等鹽。作為本發明的含有陰離子基團的化合物的具體例，可以舉出例如通式[1]所示的化合物或其鹽[式中，R1 R6各自獨立地表示可以具有酰胺鍵的、具有-C00—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基；R7 Rki各自獨立地表示烷基、炔基、芳基、烷氧基、芳氧基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、取代氨基、-coo—、-so”鹵原子、氫原子、羥基、氰基或者硝基；R11表示氫原子、烷基、炔基或者芳基；η表示0 3的整數。其中，R1 R11中的3個基團為_C00_、-S03_，或者為具有這些基團作為取代基的基
團。]。上述通式[1]所示的化合物或其鹽為在635nm附近具有激發波長的熒光物質，并且在毛細管電泳中泳動的情況下峰形狀呈尖峰，成為利用熒光檢測的毛細管電泳測定中特別有用的內標物質。對于通式[1]中的作為R1 R6所示烷基的取代基的-C00—或_S03_以及R7 Riq 所示的-C00-或-SO3-來說，只要是在電泳時(溶解于電泳溶液中時)成為陰離子基團的物質即可，可以為與氫離子鍵合了的羧酸(-C00H)或磺酸(-SO3H)等酸；堿金屬鹽(例如鋰鹽、 鈉鹽、鉀鹽、銣鹽)、銨鹽、有機銨鹽(例如三甲基銨鹽、三乙基銨鹽、三丙基銨鹽)等鹽。對于通式[1]中的R1 R6所示的可以具有酰胺鍵的、具有_C00_或_S03_作為取代基的或無取代的烷基中的烷基來說，其可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種，優選為直鏈狀，可以舉出碳原子數通常為1 10、優選為1 6、更優選為1 5的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、 異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、正庚基、異庚基、 仲庚基、叔庚基、新庚基、正辛基、異辛基、仲辛基、叔辛基、新辛基、正壬基、異壬基、仲壬基、 叔壬基、新壬基、正癸基、異癸基、仲癸基、叔癸基、新癸基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、 環庚基、環辛基、環壬基、環癸基等，其中優選例如甲基、乙基、正丙基、正戊基等直鏈狀的烷基。對于R1 R6所示的可以具有酰胺鍵的、具有-C00—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基中的烷基來說，可以舉出不具有酰胺鍵的取代或無取代烷基、或取代或無取代烷基的烷基鏈中含有通常為1 10個、優選為1 3個、更優選為1個酰胺鍵的基團。作為可以具有酰胺鍵的無取代烷基的優選具體例，例如可以舉出如下通式[59] 所示的基團-T1- (CONH-T2) k_R21 [59](式中，R21表示氫原子或烷基，TjPkfT2表示亞烷基，k表示0 10的整數。)。
作為通式[59]中的R21所示的烷基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種， 可以舉出碳原子數通常為1 10、優選為1 6的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、新丁基、正戊基、異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、正庚基、異庚基、仲庚基、叔庚基、新庚基、正辛基、異辛基、仲辛基、叔辛基、新辛基、正壬基、異壬基、仲壬基、叔壬基、新壬基、正癸基、異癸基、仲癸基、叔癸基、新癸基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基等。作為T1和k個T2所示的亞烷基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種，可以舉出碳原子數通常為2 10、優選為2 8的基團，具體地說，可以舉出例如亞甲基、1， 2-亞乙基、1，3-亞丙基、1，4-亞丁基、1，5-亞戊基、1，6-亞己基、七亞甲基、1，8-亞辛基、1， 9-亞壬基、十亞甲基等直鏈狀亞烷基；例如乙叉、亞丙基、異亞丙基、1-甲基-1，3-亞丙基、
2-甲基-1，3-亞丙基、1，1-二甲基-1，2-亞乙基、1，2-二甲基-1，2-亞乙基、乙基-1，2-亞乙基、1-甲基-1，4-亞丁基、1，1-二甲基-1，3-亞丙基、2，2-二甲基-1，3-亞丙基、2-乙基-1，3-亞丙基、1-甲基-1，5-亞戊基、2-甲基-1，5-亞戊基、1，3- 二甲基-1，4-亞丁基、
3-乙基-1，4-亞丁基、1-甲基-1，6-亞己基、1-甲基七亞甲基、1，4-二乙基-1，4-亞丁基、 2，4_ 二甲基七亞甲基、1-甲基-1，8-亞辛基、1-甲基-1，9-亞壬基等支鏈狀亞烷基；例如環亞丙基，1，3-環亞丁基、1，3-環亞戊基、1，4-環亞己基、1，5-環亞庚基、1，5-環亞辛基、1， 5-環亞壬基、1，6-環亞癸基等環狀亞烷基等。k通常為0 10的整數、優選為0 3的整數、更優選為0或1。上述通式[1]中的R1 R6的具體例中，特別優選具有-C00—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基。作為更優選的具體例，R1和R2各自獨立地為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，更優選具有-COO—或-SO3-作為取代基的碳原子數為1 5的烷基。對于R3 和R4，其任意一方為具有-coo—或-SO3-作為取代基的烷基、優選為具有-C00—或-SO3-作為取代基的碳原子數為1 5的烷基，另一方為無取代的烷基、優選為無取代的碳原子數為 1 5的烷基。對于R5和R6，其任意一方為具有-C00-或-SO3-作為取代基的烷基、優選為具有-C00-或-SO3-作為取代基的碳原子數為1 5的烷基，另一方為無取代的烷基、優選為無取代的碳原子數為1 5的烷基。作為通式[1]中的R7 Rltl所示的烷基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種，可以舉出碳原子數通常為1 6、優選為1 3的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基等。作為R7 Rki所示的炔基，可以舉出碳原子數通常為2 6、優選為2 4的基團， 具體地說，可以舉出例如乙炔基、2-丙炔基、3-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、2-甲基-4-戊炔基、5-己炔基等。作為R7 Rltl所示的芳基，可以舉出通常碳原子數為6 10的基團，具體地說，可以舉出例如苯基、萘基等。作為R7 Rltl所示的烷氧基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種，可以舉出碳原子數通常為1 6、優選為1 3的基團，具體地說，可以舉出例如甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、異戊氧基、仲戊氧基、叔戊氧基、新戊氧基、正己氧基、異己氧基、仲己氧基、叔己氧基、新己氧基、環丙氧基、環戊氧基、環己氧基等。作為R7 Rltl所示的芳氧基，可以舉出碳原子數通常為6 10的基團，具體地說， 可以舉出例如苯氧基、萘氧基等。對于R7 Rltl所示的烷基磺酰基中的烷基磺酰基來說，可以舉出磺基(-SO2OH) 的-OH基被烷基所取代的基團，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種，可以舉出通常碳原子數為1 6的基團，具體地說，可以舉出例如甲基磺酰基、乙基磺酰基、正丙基磺酰基、異丙基磺酰基、正丁基磺酰基、異丁基磺酰基、仲丁基磺酰基、叔丁基磺酰基、正戊基磺酰基、異戊基磺酰基、仲戊基磺酰基、叔戊基磺酰基、新戊基磺酰基、正己基磺酰基、異己基磺酰基、仲己基磺酰基、叔己基磺酰基、新己基磺酰基、環丙基磺酰基、環丁基磺酰基、環戊基磺酰基、環己基磺酰基等。作為R7 Rltl所示的芳基磺酰基，可以舉出磺基(-SO2OH)的-OH基被芳基所取代的基團，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種，可以舉出通常碳原子數為6 10的基團，具體地說，可以舉出例如苯磺酰基、萘基磺酰基等。作為R7 Rki所示的鹵原子，可以舉出例如氟原子、氯原子、溴原子、碘原子等。作為R7 Rki所示的取代氨基，可以舉出氨基的氫原子中的1 2個被取代基所取代的基團，作為這些取代基，可以舉出例如烷基、烷氧基羰基、酰基、磺基等。對于作為R7 Rki所示的取代氨基的取代基而舉出的烷基來說，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種，可以舉出碳原子數通常為1 10、優選為1 6的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、正庚基、異庚基、仲庚基、叔庚基、新庚基、正辛基、異辛基、仲辛基、叔辛基、新辛基、正壬基、異壬基、仲壬基、叔壬基、異壬基、正癸基、異癸基、仲癸基、叔癸基、新癸基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基等。對于作為R7 Rki所示的取代氨基的取代基而舉出的烷氧基羰基來說，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種，可以舉出碳原子數通常為1 10、優選為1 6的基團，
具體地說，可以舉出例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基、異丁氧基羰基、仲丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、正戊氧基羰基、異戊氧基羰基、仲戊氧基羰基、叔戊氧基羰基、新戊氧基羰基、正己氧基羰基、異己氧基羰基、仲己氧基羰基、叔己氧基羰基、新己氧基羰基、正庚氧基羰基、異庚氧基羰基、仲庚氧基羰基、叔庚氧基羰基、新庚氧基羰基、正辛氧基羰基、異辛氧基羰基、仲辛氧基羰基、叔辛氧基羰基、新辛氧基羰基、 正壬氧基羰基、異壬氧基羰基、仲壬氧基羰基、叔壬氧基羰基、新壬氧基羰基、正癸氧基羰基、異癸氧基羰基、仲癸氧基羰基、叔癸氧基羰基、新癸氧基羰基、環丙氧基羰基、環丁氧基羰基、環戊氧基羰基、環己氧基羰基、環庚氧基羰基、環辛氧基羰基、環壬氧基羰基、環癸氧基羰基等。對于作為R7 Rki所示的取代氨基的取代基而舉出的酰基來說，可以舉出例如衍生自脂肪族羧酸的基團、衍生自芳香族羧酸的基團等。作為該衍生自脂肪族羧酸的酰基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀，并且鏈中可以進一步具有雙鍵，可以舉出碳原子數通常為2 20、優選碳原子數為2 15、更優選為2 10、
8進一步優選為2 6的基團，具體地說，可以舉出例如乙酰基、丙酰基、丁酰基、異丁酰基、戊酰基、異戊酰基、新戊酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基、癸酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕櫚酰基、硬脂酰基、二十酰基、丙烯酰基、甲基丙烯酰基、巴豆酰基、油酰基等。作為該衍生自芳香族羧酸的酰基，可以舉出碳原子數通常為7 15、優選為7 11的基團，具體地說，可以舉出例如苯甲酰基、萘甲酰基、蒽甲酰基等。上述通式[1]中的R7 Rki的具體例中，特別優選-C00—或_S03_或氫原子。作為更優選的具體例，R7 Rki中的3個為氫原子，剩下的一個為-C00—或-SO”優選為-S03_。作為通式[1]中的R11所示的烷基，可以為直鏈狀、支鏈狀或環狀中的任意一種，優選為直鏈狀，可以舉出碳原子數通常為1 10、優選為1 6、更優選為1 3的基團，具體地說，可以舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、 異戊基、仲戊基、叔戊基、新戊基、正己基、異己基、仲己基、叔己基、新己基、正庚基、異庚基、 仲庚基、叔庚基、新庚基、正辛基、異辛基、仲辛基、叔辛基、新辛基、正壬基、異壬基、仲壬基、 叔壬基、異壬基、正癸基、異癸基、仲癸基、叔癸基、新癸基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、 環庚基、環辛基、環壬基、環癸基等。作為R11所示的炔基，可以舉出碳原子數通常為2 6、優選為2 4的基團，具體地說，可以舉出例如乙炔基、2-丙炔基、3- 丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、4-戊炔基、2-甲基-4-戊炔基、5-己炔基等。作為R11所示的芳基，可以舉出碳原子數為6 10的基團，具體地說，可以舉出例
如苯基、萘基等。上述通式[1]中的R11的具體例中，特別優選烷基。通式[1]中的η通常為0 3的整數、優選為1或2、更優選為2。通式[1]中，R1 R11中的至少3個基團為_C00_、_S03_、或為具有_C00_、_S03_作為取代基的基團，但優選-C00-或具有-COO-作為取代基的基團具有至少1個、-SO3-或具有-SO3-作為取代基的基團具有至少2個，特別優選-C00-或具有-C00-作為取代基的基團為1個、-SO3-或具有-SO3-作為取代基的基團為4個。本發明的化合物[1]中，優選例如下述通式[la]所示的物質(式中，Rla R6a各自獨立地表示具有-COO—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基，R8a表示_S03_，Rlla表示烷基，η與上述相同。其中，Rla R6a中的2個基團為-C00_、_S03_， 或者為具有它們作為取代基的基團。)。通式[la]中，對于Rla R6a所示的具有_C00_或_S03_作為取代基的或無取代的烷基中的烷基來說，可以舉出與上述通式[1]中R1 R6所示的可以具有酰胺鍵的、取代或無取代烷基中的烷基的示例同樣的基團，優選的基團也是相同的。Rla和R2a優選各自獨立地為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基、更優選具有-C00-或-SO3-作為取代基的碳原子數為1 5的烷基。R3a和R4a各自獨立地為具有_C00_或_S03_作為取代基的或無取代的烷基，其其中優選
中，優選其一方為具有-coo-或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為烷基；更優選一方為具有-COO-或-SO3-作為取代基的碳原子數為1 5的烷基，另一方為碳原子數為1 5的燒基。R5a和R6a各自獨立地為具有_C00_或_S03_作為取代基的或無取代的烷基，其中優選其一方為具有-COO-或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為烷基；更優選一方為具有-C00-或-SO3-作為取代基的碳原子數為1 5的烷基，另一方為碳原子數為1 5的燒基。作為Rlla所示的烷基，可以舉出與上述通式[1]中R11所示的烷基的示例同樣的基團，優選的基團也是相同的。通式[la]中Rla-Rfia中的至少2個基團為-COO—、-S03_、或者為具有-COO—、-S03_作為取代基的基團，優選-C00-或具有-COO-作為取代基的基團具有至少1個、-SO3-或具有-SO3-作為取代基的基團具有至少1個，特別優選-coo—或具有-COO-作為取代基的基團為1個、-SO3-或具有-SO3-作為取代基的基團為3個。作為通式[1]的優選具體例，例如可以舉出
權利要求
1.一種基于毛細管電泳法的測定對象物質的測定方法，該測定方法的特征在于，將下述(1)或( 用作內標物質，對測定對象物質的峰進行鑒定(1)在分子內具有3個以上陰離子基團的化合物、和該化合物的陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物的組合，(2)在分子內具有3個以上陽離子基團的化合物、和該化合物的陽離子基團的1 3個被取代為陰離子基團的化合物的組合。
2.如權利要求1所述的測定方法，其中，在分子內具有3個以上陰離子基團的化合物的陰離子基團為-COO—或-S03_， 陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物的陽離子基團為下述通式[103] 所示的基團通式[103]中，R102 Rltl4各自獨立地表示氫原子或碳原子數為1 3的烷基，由Rltl2 R104中的2 3個基團和它們所鍵合的氮原子可以形成雜環狀銨陽離子。
3.如權利要求1所述的測定方法，其中，在分子內具有3個以上陰離子基團的化合物為通式[1]所示的化合物或其鹽通式[1]中，R1 R6各自獨立地表示可以具有酰胺鍵的、具有-COO—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基，R7 Rki各自獨立地表示烷基、炔基、芳基、烷氧基、芳氧基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、 取代氨基、-coo—、-SO”鹵原子、氫原子、羥基、氰基或者硝基， Rn表示氫原子、烷基、炔基或者芳基，η表示0 3的整數，其中，R1 R11中的3個基團為-COO—、-SO3-,或者為具有這些基團作為取代基的基團； 陰離子基團的1 3個被取代為陽離子基團的化合物為通式[1’ ]所示的化合物或其Trrt.通式[1’ ]中，R1’ R6’各自獨立地表示具有通式[101]所示的基團作為取代基的烷基、或者表示可以具有酰胺鍵的、具有-coo—或-SO3-作為取代基的或者無取代的烷通式[101]中，Rltl1 Rltl4各自獨立地表示氫原子或碳原子數為1 3的烷基，m表示 2 6的整數，另外，由Rltl2 Rltl4中的2 3個基團和它們所鍵合的氮原子可以形成雜環狀銨陽離子，R7' Rltl'各自獨立地表示烷基、炔基、芳基、烷氧基、芳氧基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、 取代氨基、-coo—、-SO”鹵原子、氫原子、羥基、氰基或者硝基， R11’表示氫原子、烷基、炔基或者芳基，η表示0 3的整數， 其中，R1’ R6’中的至少1個為具有通式[101]所示的基團作為取代基的烷基。
4.如權利要求3所述的測定方法，其中，在通式[1]所示的化合物中，R1 R6各自獨立地表示具有-COO—或-SO3-作為取代基的或無取代的烷基，
5.如權利要求4所述的測定方法，其中，R1和R2各自獨立地為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，R3和R4中的任意一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為無取代的烷基，R5和R6中的任意一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為無取代的烷基。
6.如權利要求4所述的測定方法，其中，R1’和R2’中的一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為具有通式[101] 所示的基團作為取代基的烷基，R3’和R4’中的任意一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為無取代的烷基，R5’和R6’中的任意一方為具有-COO—或-SO3-作為取代基的烷基，另一方為無取代的烷基。
7.如權利要求1 6任一項所述的測定方法，其中，測定對象物質為AFP、PIVKAll。
全文摘要
本發明的課題在于提供在測定對象物質為蛋白質或化合物的電泳法中使用內標物質的測定方法。本發明涉及基于電泳法的測定對象物質的測定方法，該測定方法的特征在于將(1)在分子內具有3個以上陰離子基團的化合物以及該化合物的陰離子基團的1～3個被取代為陽離子基團的化合物的組合、或(2)在分子內具有3個以上陽離子基團的化合物以及該化合物的陽離子基團的1～3個被取代為陰離子基團的化合物的組合用作內標物質，對測定對象物質的峰進行鑒定。
文檔編號G01N27/447GK102414559SQ201080018910
公開日2012年4月11日 申請日期2010年4月27日 優先權日2009年4月28日
發明者山本直之, 黑澤龍雄 申請人:和光純藥工業株式會社