多發性硬化癥的風險評估方法

專利名稱：多發性硬化癥的風險評估方法
技術領域：
本發明涉及診斷和評估多發性硬化癥預后的方法和試劑。
背景技術：
多發性硬化癥(MS)是中樞神經系統(CNS)的一種慢性自身免疫性炎癥性疾病。 這是導致青壯年永久殘疾的常見原因之一。當患者患有MS時，免疫系統破壞了大腦和脊髓的軸突髓鞘，造成了各種神經系統病癥。MS最常見的類型為復發-緩解型(RRMS)，即在無疾病進展(穩定)的部分或完全康復期(緩解)后出現急性神經功能惡化的發作(病情加重，疾病侵襲)。臨床上具有使用簡單的血清學檢測以預測的需要i)有首發表現(FP)，又稱為可進展為多發性硬化癥(MQ的臨床孤立綜合癥(CIQ的患者，是否會在一定的時間內進展為 MS ；ii)處于CIS期的患者是否存在快速的病情進展的風險，以導致加劇的臨床殘疾，因此可能需要侵入性的緩解疾病治療(DMT)；或者iii)處于CIS期的患者是否會有常規或相對緩慢MS疾病進展，從而導致較輕的殘疾，需要較少的積極性的治療。也有用簡單的血清學檢測預測下述的臨床需要i)診斷為RRMS的患者是否有快速病情惡化的高風險，并將導致中樞神經系統(CNS)的高度炎性病變，這可通過磁共振成像(MRI)或臨床殘疾的累積看出， 并因此可能需要侵入性的緩解疾病疾病治療(DMT)；或ii)診斷為RRMS的患者是否將有常規或相對緩慢的MS疾病進展，具有較小的磁共振成像(MRI)活性和較少的累積殘疾，因此需要較少的積極治療。發明概述本發明解決了在多發性硬化癥(MS)領域一個長期存在的問題，即如何預測一個患有可發展為MS的臨床孤立綜合癥(CIS)的個體的病程。涉及的方法包括將個體定性為兩組中一組的成員(i)那些有可能迅速進展到臨床確診多發性硬化癥(CDMS)的個人，即在M個月之內，以及(ii)那些有可能較慢進展到臨床確診多發性硬化癥(CDMQ的個人， 即超過M個月。涉及的方法還包括將個體定性為另兩組中一組的成員(i)那些有可能迅速進展到臨床殘疾的個人，即在5年之內，以及(ii)那些有可能較慢進展到臨床殘疾的個人，即超過5年。本發明一部分是基于這樣的發現，抗聚糖抗體在評估可進展為多發性硬化癥(MS) 的臨床孤立綜合癥(CIS)的患者是否將臨床復發(例如在M個月中)的風險時十分有效。 本發明也基于發現抗聚糖抗體可有效評估可進展為多發性硬化癥(MQ的臨床孤立綜合癥 (CIS)患者是否將有快速的病情惡化和積累殘疾的風險，例如，在一定的時間范圍內(如5 年)的永久性殘疾。
此處所述的抗聚糖抗體被用來預測在規定的時間段內的第二次神經侵襲，例如， 在大約48個月中；在大約36個月中；在大約M個月中；在大約12個月中；或者在大約6個月中。抗聚糖抗體也被用來預測MS病程進展，其中病程進展可用擴展殘疾狀況評分(EDSS) 衡量，EDSS是一個評級系統，用于分類和規范MS患者的狀況。例如，MS病程進展預測，須在規定的時間段內，如，在大約20年內；在大約10年內；在大約7年內；在大約5年內；或者在大約4年內。MS病程進展以EDSS單位來衡量，例如，進展大于一個EDSS單位；進展大于兩個EDSS單位；進展大于3個EDSS單位；或者進程大于6個EDSS單位。病程進展的速度 (快vs.慢)是由抗聚糖抗體水平在患者樣本中相對量/等級決定的。首先，測試樣本是來自CIS患者或最近確診為患有首次神經事件的個體。合適的測試樣本包括一種生物流體，選自全血、血清和血漿組成的組合。對測試樣本進行各種抗聚糖抗體的檢測，如抗-Glc(a l，2)Glc(a)抗體(GAGA2)，抗-Glc ( a 1，3)Glc ( a )抗體 (GAGA3)，抗-Glc(a l，4)Glc(a )抗體(GAGA4)，與抗-Glc (a l，6)Glc(a )抗體(GAGA6)。 優選地，抗體為IgM型抗體。測試樣品的抗體水平與對照樣本的抗體水平相比，其中，當測試樣品的抗體水平高于對照樣本的抗體水平時，表明在一定的時間段內，個體有更高的遭受第二次神經侵襲的風險，例如，在大約48個月中；在大約36個月中；在大約M個月中； 在大約12個月中；或者在大約6個月中。與在M個月內下一次復發的預測有關的對照是一個參考值，該參考值取自一個或多個MS患者，其特征為遭受了第一次神經侵襲后，又在超過M個月后遭受了隨后(第二次)神經侵襲。例如，對照參考水平值與遠期復發相關。遠期復發是指一個MS患者，遭受過第一次神經侵襲或者有首發表現的，隨后在M個月或更久以后遭受第二次神經侵襲，在第一神經侵襲或者有首發表現之后。本發明也提供一種方法，以區別CIS個體會在20年該個體的首發期(FP)中，在擴展殘疾狀態量表(EDSQ評分有進展，和在20年所述個體的首發期(FP)中個體不會在EDSS 評分有進展。首先，測試樣本是來自CIS患者或最近確診為患有首次神經事件的個體。合適的測試樣本包括一種生物流體，選自全血、血清和血漿組成的組合。對測試樣本進行各種抗聚糖抗體的檢測，如抗_Glc(a l，2)Glc(a)抗體(GAGA2)，抗-Glc ( a 1，3) Glc ( a )抗體 (GAGA3)，抗-Glc(a l，4)Glc(a )抗體(GAGA4)，與抗-Glc (a l，6)Glc(a )抗體(GAGA6)。 優選地，抗體為IgM型抗體。測試樣品的抗體水平與對照樣本的抗體水平相比，其中，當測試樣品的抗體水平高于對照樣本的抗體水平時，表明個體在一定的時間段內，例如，在大約 20年中；在大約10年中；在大約7年中；在大約5年中；或者在大約4年中，有遭受更快MS 疾病進展(嚴重病程)的風險，以及用EDSS評分測量更高水平的殘疾。該方法為臨床醫生提供了有價值的信息，來預測以EDSS測量的快速或緩慢進展至永久或臨床殘疾，例如，個體在20年中進展至少一個EDSS單位，例如，至少兩個EDSS單位；至少3個EDSS單位；大于 3個EDSS單位；大于4個EDSS單位；或者大于6個EDSS單位，等，例如，快速進展被定義為在20年中進展大于等于6個EDSS單位。緩慢進展被定義為在20年中進展小于等于3個 EDSS單位。可選地，測試樣本中低的抗體水平，與對照樣本中的抗體水平等同或者相似，預示在相同的時間段內，個體可能有一個緩慢的MS病程進展。快速MS病情進展的預測控制是一個參考值，該參考值取自一個或多個MS患者，其被認定為有較高或者較低的EDSS分數。
“參考水平”意味著一組確定的MS患者各種抗體的平均數，中位數，一定的上限或下限百分比，范圍水平。例如，該組是由在M個月中自CIS進展到下一次復發的患者，或在一定的時間段內MS殘疾快速進展的患者組成。示范的抗體參考水平為平均值+/-0. 5，1， 1.5，或2個標準差的平均值(SD)。優選地，參考水平為平均抗體水平+/-1.5SD。個體的人數至少為5 ；至少為10，至少為25 ；至少為50 ；至少為100或更多的個人。參考水平由已知 MS進展屬性的患者樣本獲得，例如，歸檔的血液，血清或血漿樣品。在實踐中，通過測試統計相關的隊列中患者(例如，50例患者，100例患者，等等) 確定每種抗體參考血清樣本類似的截止水平。即，高于25% ；高于20% ；高于15% ；高于 10%;或低于25%;低于20%;低于15%;低于10%。較高百分比的抗體水平表明有快速復發或病程快速進展的危險，而較低百分比的抗體水平則表明病程進展和復發的風險低。將參考血清樣本制成等分試樣，冷凍保存供日后使用。參考血清樣本為校準樣本，有一個預設的抗體水平(截止水平，參考水平，對照水平)。當分析測試樣本的抗體水平時，測試樣本和參考/校準/對照樣本進行平行測試，如果測試樣本中的抗體水平高于參考/校準樣品的抗體水平，試驗樣品被認為是“陽性的”，例如，其屬于抗體水平升高CIS患者亞組。類似地，如果在測試樣品的抗體水平等于/相近或低于參考/校準樣品的抗體水平，測試樣品被認為是“陰性的”，例如，它屬于抗體水平不升高的CIS患者亞組。臨床指標包括敏感性，特異性，陰性預測值，陽性預測值，療效計算須用到真陽性， 假陽性，假陰性和真陰性。一個“真陽性”的樣本是MS陽性的樣本，根據經典方法診斷/預測MS陽性，利用本發明的方法也診斷為陽性。一個“假陽性”的樣本，根據經典方法診斷為陰性，而利用本發明的方法診斷為陽性。類似的，一個“假陰性”的樣本，根據經典方法診斷為陽性，而利用本發明的方法診斷為陰性。一個“真陰性”的樣本，根據經典方法診斷其評定的性狀為陰性，而利用本發明的方法診斷為陰性。例如，參見Mousy (Ed.)，Intuitive Biostatistics New York =Oxford University Press (1995)，在此以參考文獻并入本發明。此處所用的術語“靈敏度”是指在測量特征存在時實驗室方法呈陽性的概率。靈敏度的計算公式為真陽性結果的數目除以真陽性和假陰性的總和。靈敏度本質上是衡量一種方法能正確地識別具有臨床問題的個體的程度。在本發明的一種方法中，可以選擇抗體的值，診斷/預測個體是否有較高的下一次復發或快速MS進展的風險的靈敏度至少約20 %， 也可以是，例如，至少約30%，40%，50%，60%，70%，80%或90%。此處所用術語“特異性”是指一種方法在沒有測量特征的情況下呈陰性的概率。 特異性計算方法為真陰性結果數目除以真陰性和假陽性的總和。特異性本質上是衡量一種方法能排除那些沒有測量性狀的個體的程度。抗體切邊界值可以選擇為，當靈敏度至少約 30 %，個人的特異性診斷/預測在60-70 %，80-85 %，90-95 %，或者95-99. 9 %的范圍內。“EDSS評分進展”是指以0. 5或1. 0為增量的由約1. 0到約10. 0的進展，例如，約 1. 0 至 5. 0 ；約 5. 0 至 10. 0 ；約 2. 0 至 4. 0 ；約 4. 0 至約 6. 0 ；約 6. 約 8. 0 約 8. 0 約 10. 0 ； 約1. 5約2. 5 ；約3. 0至3. 5，或者其他任意在1. 0和10. 0之間的增量。在某些情況下，多發性硬化癥患者雖經治療，但預后較差。術語“突破疾病”用來表示盡管采用改變疾病病程(DMT)療法，仍有疾病活動或進展的臨床或影像學證據(例如， 由擴展殘疾狀態量表(EDSS評分)測量)。突破疾病并不意味著病人治療沒有響應-它意味著，目前盡管采取治療疾病仍舊活躍。在本發明之前，很難區分快速進展對DMT響應良好的患者和緩慢進展對DMT的響應不好患者。因此，本發明提供了一種確定將發展為突破MS的個體的方法。首先，個體提供一個測試樣本。合適的測試樣本包括一種生物流體，選自全血，血清，血漿組成的組合。從該組中選擇一種抗體，抗GLC(a l，2)GLC(a)抗體、抗GLC(a 1，3)GLC( a )抗體、抗-GLC( a 1， 4)GLC組成(α)抗體、抗GLC(a l，6)GLC(a)抗體，對試驗樣本進行檢測。在一方面，該抗體是IgM抗體。測試樣品的抗體水平與抗體的對照水平進行比較，其中至少一種抗體水平高于抗體的對照水平，表明該個體是有可能發展為突破MS。可選地，將血樣中的抗體水平與對照樣本的抗體水平進行比較，不會進展為突破 MS的個體是通過檢測，將個體樣本抗體水平與對照樣本的抗體水平相比，相同/類似或更低，予以區分。本發明還提供了確定患有臨床孤立綜合癥(CIS)并在二十四個月內會進展到臨床確診多發性硬化癥(CDMQ的個體的方法，利用個體提供的血液樣本和血液樣本檢測血液中的抗 _Glc(a l，2)Glc(a)抗體，抗-Glc(a 1，3) Glc ( a )抗體，抗-Glc ( a l，4)Glc(a) 抗體，和抗-Glc ( a 1，6) Glc ( a )抗體。血液樣本中的抗體水平與在二十四個月內未進展為 CDMS的CIS個體的抗體水平相比較。在二十四個月內進展為CDMS的CIS個體被確定，如果在血液樣本中檢測到與在二十四個月內未進展為CDMS的CIS個體的抗體水平相比更高的抗體水平。本發明還提供了確定一個患有CIS個體是否有可能在20年內遭受嚴重程度為MS病程快速進展的方法，利用處于CIS期個體提供的血液樣本，從血液樣本中檢測抗-Glc (a l，2)Glc(a) (GAGA2) IgM 同型抗體，抗-Glc ( a l，3)Glc(a) (GAGA3) IgM 同型抗體，抗-Glc (a l，4)Glc(a ) (GAGA4) IgM 同型抗體，與抗-Glc ( a l，6)Glc(a ) (GAGA6) IgM 同型抗體。血液樣本中的抗體水平與在20年內沒有經歷嚴重程度為MS快速進展個體的抗體水平相比。評價一個患有CIS個體有可能在20年內在EDSS評分進展大于一個單位，是依據檢測到血液樣本中的抗體水平高于20年內沒有經歷嚴重程度為MS快速進展個體的抗體水平，EDSS評分成為疾病嚴重程度的指標。本發明還提供了一個確定患有CIS個體有可能在20年遭受嚴重程度為MS病程緩慢進展的方法。利用處于CIS期個體提供的血液樣本，從血液樣本中檢測抗-GlC (a 1，2) Glc(a) (6八6々2)1811同型抗體，抗-61(；(0 l，3)Glc(a) (GAGA3) IgM 同型抗體，抗-Glc ( a 1， 4)Glc(a) (GAGA4) IgM 同型抗體，與抗-Glc (a l，6)Glc(a) (GAGA6) IgM 同型抗體。血液樣本中的抗體水平與在20年內沒有經歷嚴重程度為MS緩慢進展個體的抗體水平相比。評價一個患有CIS個體可能在20年內在EDSS評分進展低于一個單位，是依據檢測到血液樣本中的抗體水平相同/類似或者低于20年內經歷為MS嚴重程度緩慢進展的個體的抗體水平，EDSS評分成為疾病嚴重程度的指標。本發明還提供了一個確定個體將發展為突破MS的方法，利用個體提供的血液樣本，從血液樣本中檢測抗_Glc(a l,2)Glc(a)抗體，抗-Glc ( a 1，3) Glc ( a )抗體， 抗-Glc(a l，4)Glc(a)抗體，和抗-Glc ( a 1，6) Glc ( a )抗體。血液樣本中的抗體水平與沒有發展為突破MS個體的抗體水平相比，例如，采用/不采用DMT療法，經臨床或影像學檢測個病程并沒有進展的個體。確定一個個體有可能將發展為突破MS，是依據檢測到血液樣本
本發明還提供了一種計算機可讀介質，包含有執行該方法的計算機可執行指令。 首先，存儲至少一個與病人的血液樣本中至少一種抗體水平相關的第一變量。可選地，抗體水平檢測通過綁定于腔室或孔中固定聚糖來進行，并發出熒光信號；化學發光信號或者光密度信號，通過添加預先標記的與IgM同型有相同識別方式的第二種抗體。第二，存儲至少一個與至少一種參考水平相關的第二變量。患者相關臨床問題的危險因素i)轉化為臨床確診多發性硬化癥(CDMS) ；ii)EDSS測量的疾病快速進展的MS;或iii)突破MS，用至少包括第一和第二變量的函數計算。最后，輸出風險因子。可選地，至少一個的第一變量對應于血液樣本中抗-Glc (a l，2)Glc(a)抗體，抗-Glc (a l，3)Glc(a)抗體，抗-Glc (a 1， 4)Glc(a)抗體，和抗-Glc(a l，6)Glc(a)抗體的抗體水平。另一方面，至少一個的第一變量相應于血液中所述抗體水平，其抗體從以下抗體組合中選擇抗-Glc(a ld)Glc(a) (GAGA2) IgM 同型抗體，抗 _Glc(a l，3)Glc(a) (GAGA3)IgM 同型抗體，抗-Glc (a 1,4) Glc(a) (GAGA4) IgM 同型抗體，與抗-Glc (a l，6)Glc(a) (GAGA6) IgM 同型抗體。除了上面所述的診斷及預后方法，本發明還解決了在多發性硬化癥(MQ領域的長期問題-如何預測為復發-緩解型硬化癥(RRMQ的MS患者的疾病活躍。該方法包括將個體定性為兩組中一組的成員(i)診斷為RRMS的患者是否有快速病情惡化的高風險，并將導致中樞神經系統(CNS)的高度炎性病變，這可通過磁共振成像(MRI)或臨床殘疾的累積看出，并因此可能需要侵入性的緩解疾病疾病治療(DMT)和ii)診斷為RRMS的患者是否將有常規或相對緩慢的MS疾病進展，具有較小的磁共振成像(MRI)活性和較少的累積殘疾，因此需要較少的積極治療。為了提高醫生閱讀和解釋MRI掃描的能力，對比的材料，如化合物釓，往往被用來突出在大腦中的炎性區。釓-增強MRI掃描顯示活動性病變，這意味著有血腦屏障破裂，也是炎癥所在。因此，釓-增強病變是新的，據估計病變發展后釓只增強病變6個星期或更少的時間。這些病變被定義為“對比增強病變”。這種方式下，釓讓醫生能確定哪些病變是活躍的，哪些病變是不活躍的病變。使用此信息來評估疾病的活性，并確定是否發生復發。al ( β ) (GAAB)有關，這種分子發現于血腦屏障(BBB)，在同一時段內，對于RRMS患者，具有對比-增強Tl MRI病變比沒有對比-增強T IMRI病變程度更高。特別地，對比-增強Tl MRI病變的頻率被發現與更活躍RRMS病變相關。“對比-增強Tl MRI病變”是指通過Tl MRI掃描，并使用造影劑，提高醫生閱讀和解釋MRI掃描的能力后可見的病變。例如， 包含釓的造影劑。本發明提供利用MRI檢出病變來鑒別診斷為RRMS患者是否會有一個活躍病程的方法。在一個方面，MRI檢出病變為對比-增強Tl MRI病變。首先，由診斷為RRMS的個體提供一個測試樣本。合適的測試樣本包括一種生物流體，選自全血，血清和血漿組成的組合。 檢測/測量樣本中抗-Glc(a 1，2)(^1(β)抗體(GAAB)的抗體水平。優選地，該抗體是IgM 型抗體。參考水平與在CNS中MRI檢出病變風險相關(例如，對比-增強TlMRI病變)，其為一參考值，取自一個或者多個CNS中并沒有任何MRI-檢出病變MS患者。測試樣本的抗體水平與對照樣本的抗體水平相比，其中，當測試樣品的抗體水平高于對照樣本的抗體水平時，意味著個體有活躍病變的風險，因為其中樞神經系統(CNS)有檢出對比-增強MRI病變，和快速MS病程進展(積極病程)并導致較高程度殘廢(突破MQ的風險。可選地，測試樣本中的抗體水平較低，類似于對照樣本中的抗體，表示個體不可能發展為對比-增強Tl MRI病變，并將有一個緩慢的MS病程進展。因此，本發明提供了確定患有RRMS個體會發展為突破MS的方法。首先，由個體提供一個測試樣本。合適的測試樣本包括一種生物流體，選自全血，血清和血漿組成的組合。 對測試樣本中的抗-Glc(a 1，2)(^1(β)抗體(GAAB)進行檢測/測量。優選地，該抗體是 IgM抗體。測試樣本的抗體水平與抗體的參考水平相比，其中，當測試樣品的抗體水平高于抗體的參考水平時則與突破MS相關。當測試樣品的抗體水平高于抗體的參考水平，表明預后的個體將發展為對比-增強Tl MRI-檢出病變或突破MS，在將來的某一時間，即，在抗體檢測之后。例如，個體被認定診斷為MS的可能性極高，有MRI-檢出病變為證明，甚至進行 MRI分析之前。可選地，血液樣本的抗體水平與參考樣本的抗體水平相比較，不會進展為突破MS 的個體是通過檢測到個體樣本的抗體水平相同/類似或更低于對照樣本的抗體水平予以區別。本發明還提供確定患有RRMS個體可能會經歷快速進展的MS疾病活動的方法。首先，由RRMS個體提供一個測試樣本。合適的測試樣本包括一種生物流體，選自全血，血清和血漿組成的組合。對測試樣本中的抗-Glc(a 1，2)(^1(β)抗體(GAAB)進行檢測/測量。 優選地，抗體為IgM型抗體。測試樣本的抗體水平與對照樣本的抗體水平相比，其中，當測試樣品的抗體水平高于對照樣本的抗體水平時，表明個體有活躍的MS病程進展的風險。可選地，測試樣本中低的抗體水平，與對照樣本中的抗體水平等同或者相似，表明在同一時間段內個體可能為緩慢MS病程進展。與積極MS病程進展的預測有關的對照是一個參考數值，其取自一個或者多個CNS中有MRI-檢出病變MS的患者。本發明還提供了一種計算機可讀介質，里面包含有執行該方法的計算機可執行指令。首先，存儲至少一個與患者的血液樣本中至少一種抗體水平(例如，Glc(al，2) foil (β)抗體(GAAB))相關的第一變量。可選地，抗體水平檢測通過綁定于腔室或孔中固定聚糖來進行，并發出熒光信號；化學發光信號或者光密度信號，通過添加預先標記的與IgM 同型有相同識別方式的第二個抗體。第二，存儲至少一個與至少一種參考水平相關的第二變量。患者相關臨床問題的危險因素i)RRMS患者是否將發展成表現為TlMRI增強病變的積極病程；ii)RRMS患者是否將發展為突破MS ；或iii)RRMS患者是否可能經歷到快速進展的MS疾病活動，用至少包括第一和第二變量的函數計算。最后，輸出風險因子。可選地，至少一個的第一變量對應于樣本中抗_Glc( α 1，2) fell (β)抗體。“參考水平”意味著一組確定的MS患者各種抗體的平均數，中位數，一定的上限或下限百分比，范圍水平。例如，隊列是由在CNS中沒有任何對比-增強TlMRI病變的RRMS患者組成。示范的抗體參考水平為平均值+0.5，1，1.5，或為平均值2個標準差(SD)，或者為平均值-0. 5，1，1. 5，或為平均值2個SD。優選地，參考水平為平均抗體水平+或者-1. 5SD。 個體的人數至少為5 ；至少為10，至少為25 ；至少為50 ；至少為100或更多的個人。參考水平通過測量已知MS進展屬性的患者樣本的抗體水平(例如，抗-GlC(al，2)(ial(i3)抗體 (GAAB))獲得，例如，歸檔的血液，血清或血漿樣品。在實踐中，通過測試統計相關的隊列中患者(例如，50例患者，100例患者，等等) 確定每種抗體參考血清樣本類似的截止水平。即，高于25% ；高于20% ；高于15% ；高于 10%;或低于25%;低于20%;低于15%;低于10%。較高百分比的抗體水平表明有快速復發或病程快速進展的危險，而較低百分比的抗體水平則表明病程進展和復發的風險低。將參考血清樣本制成等分試樣，冷凍保存供日后使用。參考血清樣本為校準樣本，有一個預設的抗體水平(截止水平，參考水平)。當分析測試樣本的抗體水平時，測試樣本和參考/校準/對照樣本進行平行測試，如果測試樣本中的抗體水平高于參考/校準樣品的抗體水平， 試驗樣品被認為是“陽性的”，例如，其屬于抗體水平升高CIS患者亞組。類似地，如果在測試樣品的抗體水平等于/相近或低于參考/校準樣品的抗體水平，測試樣品被認為是“陰性的”，例如，它屬于抗體水平不升高的CIS患者亞組。測量抗-Glc ( α 1，2) fell ( β )抗體(GAAB)的水平來確定MS的疾病活動有眾多的優勢。首先，雖然MRI掃描通常不痛苦，患者常常發現經歷MRI掃描，會令人陌生和焦慮，包括靜脈注射對比-增強劑。使用本文所述的方法，患者只需要提供血液樣本，而不是將他們自身進行MRI掃描。此外，測量RRMS患者血液中的抗-Glc( α 1, fed (β)抗體(GAAB)水平能為主治醫生提供寶貴的信息，以設計最有效的治療方案。抗-Glc(a 1，2)(^1(β)抗體水平也可作為一種說服RRMS患者工具，讓他們配合他們的醫生制定的治療方案。本發明的其他特征和優勢，通過以下優選實施例以及權利要求的描述而顯而易見。除另有定義者，本文所有的技術和科學術語與本發明所屬領域的普通技術人員的通常理解具有相同定義。雖然可以在本發明實踐或測試中使用類似或等同于此處描述的方法和材料，合適的方法和原料如下文所述。此處提及的所有出版物，專利申請，專利，Genbank中 /NCBI的登入號碼，以參考文獻形式全部納入。在沖突的情況下，以包括定義的本申請說明書為準。此外，原料、方法和實施例僅用于描述，并無限制目的。


圖1顯示了聚糖陣列格式A)載玻片用聚四氟乙烯掩模制造出7個集群微孔，每個集群有32個微孔；B)附加在載玻片上的硅粘合劑的超結構將每一載玻片分成多個血清樣本手工應用孔；和C)抗原和對照層涂在每個墊片孔中。圖2顯示了臨床確診的MS(CDMS)的時間，Kaplan-Meier法，組-C的生存曲線。FP 患者陽性彡1 (抗-GAGA4，抗-GAGA2，抗-GAGA3，或者抗-GAGA6 IgM)與對所有標記都呈陰性的患者相對。截止值4. 0，4. 5，4. 5和4. 3分別對應于抗-GAGA2，抗-GAGA3，抗-GAGA4， 和抗-GAGA6IgM。經log rank檢驗確定P值。經由Bonferroni校正僅當P值低于0. 0125 時才被認為是顯著的。圖3顯示了確診的EDSS進展的時間，Kaplan-Meier法，生存曲線。CIS患者陽性彡1 (抗-GAGA4，抗-GAGA2，抗-GAGA3，或者抗-GAGA6 IgM)，與對所有標記都呈陰性的患者相對。截止值148. 8，164. 6，133. 6，和168. IEU分別對應于抗-GAGA2，抗-GAGA3， 抗-GAGA4，和抗-GAGA6IgM。經 log rank 檢驗確定 P = O. 011664。圖4顯示了確定CIS患者是否有在24個月內復發的危險的過程的方塊流程圖。圖5顯示了確定患者是否在20年中有可能在擴展殘疾狀態量表(EDSQ評分有進展的過程的方塊流程圖。圖6顯示了確定患者是否有可能發展為突破MS的過程的方塊流程圖。圖7顯示有/無對比-增強MRI病變的患者的抗-Glc ( α 1, 2)Gal ( β ) IgM抗體 (GAAB)的水平的箱形圖。并顯示了中間值，25%/75%四分位數和異常值。空方格是異常值，其定義為大于上四分位數加四分位數間距的1. 5倍的值。陰影方格是定義為遠遠大于上四分位值超過3倍的四分位數間距的值。患者抗GAAB無對比增強磁共振成像對比增強 MRI病變患者的病變和水平有顯著差異(P = 0. 04，t檢驗)。圖8顯示不同的抗Glc ( α 1，2) fell ( β ) IgM抗體(GAAB)的截止值(EU/mg/mL)接受者操作特征(ROC)曲線，分為有對比-增強病變的RRMS病人(n = 51)和沒有對比-增強病變的RRMS病人(n = 97)。在曲線以下的區域(AUC)為0. 603 (p = 0. 02)。ROC曲線分析使得最佳的截止點得以確定，在沒有對比-增強病變的病人組的最高的20%處。箭頭表示在選定截止值時的靈敏度和特異性。圖9顯示了確定患者是否有可能發展為由對比-增強Tl MRI病變導致的活躍病程進展的過程的方塊流程圖。圖10顯示了確定患者是否有可能發展為突破MS的過程的方塊流程圖。詳細說明多發性硬化癥(MS)是中樞神經系統(CNS)的一種脫髓鞘的炎性疾病，尚未確定其確切病因和發病機制。MS的診斷需要排除那些可以更好地解釋臨床，影像學以及臨床奇特的結果的其他疾病。MS診斷標準，又稱修訂的McDonald標準，其定義了患有MS的個體所需要的參數(Polman et al. ,2005 Ann Neurol，58 :840-6)。為了更好地界定可能符合/不符合McDonald標準的可疑MS病例，MS專家國際小組最近編制了鑒別診斷導致MS的一致決定的指南(Miller et al. ,2008 Multiple Sclerosis, 14 :1157-1174)。多發性硬化癥(MQ的病程按照不可預知的進展模式以及廣泛的變量時間表，其殘疾的積累沒什么特別的標記，使得很難或無法準確地確定個體病人的預后(Vollmer Τ, 2007 J Neurol Sci，256 Suppl 1 :S5_13)。異質性可能與臨床孤立綜合癥(CIS)患者將有下一次復發或對改變疾病病程療法(DMT)有反應的時間表有關聯。異質性也可以指病程進展速度和殘疾的積累。異質性也可以指在中樞神經系統(CNQ中有表現或沒表現的對比-增強TlMRI病變。在許多情況下，MS患者雖經治療，但預后差。特別地，“突破疾病” 一詞是用來表示盡管采取了 DMT治療，疾病活動或進展的臨床或磁共振成像(MRI)的證據(如可擴展殘疾狀態量表(EDSS評分)來衡量)((Rudick and Polman 2009，Lancet Neurology, 8 :545-559)。突破病并不意味著病人治療沒有響應，它只意味著盡管采取治療， 疾病仍舊活躍。本發明描述的方法涉及預測一個患有可發展為MS的臨床孤立綜合癥(CIS)個體的病程。該方法包括定性個體為兩組成員之一 (i)那些有可能迅速進展到臨床確診的多發性硬化癥(CDMQ，即在M個月內，及(ii)那些有可能較為緩慢進展到CDMS，即超過M 個月。該方法還涉及到定性個體為另外兩個小組之一的成員(i)那些有可能在臨床殘疾方面進展迅速，即在5年之內，及(ii)那些有可能在臨床殘疾進展緩慢，即大于5年。RRMS最早的臨床表現是CIS。目前的臨床實踐是以一線DMT治療將發展為MS的 CIS的患者以及新確診患者。醫師指出盡早開始治療的好處，但不是所有的患者都會同意。 最近一項在美國神經學家中進行的調查顯示，至少有10%新確診的多發性硬化癥患者會延遲他們的治療，因為他們害怕注射(Perrin et al. ,2009 JMCP，15(7) :572)。因此，基于在 24個月內從CIS發展為CDMS的風險將CIS患者分組，可以作為說服患者接受DMT早期治療的一個重要工具，因為組(i)的患者將同意接受DMT，而組(ii)中的患者可延遲治療至下一個的臨床或影像發病期。目前的臨床實踐的另一個方面是在首次DMT失敗后，采用另一現有DMT。采用的可以是另一種一線DMT或更具侵入性的二線(第二代)DMT。因此，按照例如在5年中用EDSS 測量的評分，來預測MS病情進展迅速以及更多的殘疾的風險，基于此將CIS患者分組。這是確定治療方案的一個關鍵因素，因為組(i)中的患者將接受侵入性DMT方案，而組(ii) 中的患者接受較少侵入性的DMT或其他一線DMT。在有癥狀的發作中，靜脈注射高劑量的皮質類固醇激素，如甲潑尼龍，是常規治療急性復發的方法。這種治療的目的是盡早結束發作，并給病人留下較少的長期性障礙。雖然一般來說在短期內能有效緩解癥狀，但皮質類固醇激素治療不會對長期的康復有重大影響((Brusaferri and Candelise, 2000 J. Neurol. ,247(6) :435-42)。潛在的副作用，包括骨質疏松癥和記憶力下降，后者是可逆的(Dovio et al. ,2004 Clin. Endocrinol. Metab.， 89(10) :4923-8 ；Uttner et al. ,2005 Neurology,64(11) :1971-3) 對皮質類固醇激素不響應的嚴重的發病可由血漿置換術治療。復發型多發性硬化癥(RRMQ最早的臨床表現是臨床孤立綜合癥(CIS)。一些研究表明，在最初發作時使用干擾素治療可以減少病人發展為臨床多發性硬化癥的機會(Jacobs et al. ,2000 N Engl J Med, 343 (13) :898-904; Comi et al. ,2001 Lancet,357(9268) :1576-82 ；Kappos et al. ,2007 Lancet,370(9585) 389-97)。這些和其他CIS的研究表明早進行DMT治療的好處，與之相關的目前臨床實踐有新確診的RRMS患者和可發展為MS的CIS患者，在有首發表現和MRI掃描異常之后馬上采用 DMT。不同國家監管的機構已經批準了 6種改變RRMS疾病病程療法(Rudick and Polman 2009，Lancet Neurol，8 :545-559)。其中三種是干擾素兩種配方為干擾素 beta-la(商標名稱為 Avonex ，CinnoVex ，ReciGen 和 Rebif · )以及一種為干擾素 beta-lb (美國商標名稱Betaseron ，在歐洲和日本為Betaferon )。第四種藥物為醋酸格拉替美(Copaxone )。第五種藥物為米托蒽醌，是一種免疫抑制劑，還可用于癌癥化療， 只在美國得到批準，主要用于治療繼發進展型MS。第六種藥物為那他珠單抗(以Tysabri 銷售)。所有六種藥物都有一定的效果，可減少發病的次數和減緩殘疾的進展，雖然其療效不同，但仍舊缺乏對它們長期影響的研究(Ruggieri et al. ,2007 CNS Drug Rev, 13 (2) 178-91 ；Munari et al. , Cochrane Database of Systematic Reviews 2003, Issue4. Art. No. :CD004678 ；Rice et al. ,2001 Cochrane Database Syst Rev(4) :CD002002 ; Martinelli Boneschi et al. ,2005 Cochrane Database Syst Rev (4) :CD002127) 。
調節劑之間的比較(除米托蒽醌之外)表明，最有效的是那他珠單抗，無論是在減少復發率和制止病情惡化(Johnson KP, 2007 J. Neurol. Sci. ,256 Suppl 1 :S23_8)；也被證明可以減少MS的嚴重性。米托蒽醌可能是其中最有效的(Gonsette RE, 2007 Expert opinion on pharmacotherapy, 8 (8) :1103-16)，但是，由于嚴重的心臟中毒故需限制其使用，一般認為它不適合長期的治療，(Murray TJ, 2006 Expert opinion on drug safety, 5 (2) :265-74)。 頻繁注射以給予干擾素和醋酸格拉替美，從每一天一次的醋酸格拉替美到每星期一次(但是肌內注射)的Avonex⑧。每一個月以靜脈輸液給予那他珠單抗和米托蒽醌。這些DMTs也被稱為1線的DMT。最近，一個“真”二代DMT成功完成了 III期的臨床試驗。使用Fingo 1 imod(FTY720)
1和Mylinax (Cladrabine)的III期臨床試驗中的治療組與一線DMT的研究相比有較高的療效。第二代的改變疾病病程療法(DMT)目前正推向MS市場；然而，在第三階段的臨床研究報告了不利的一面，如因皰疹感染和皮膚癌引起死亡。由于第二代DMTs嚴重的副作用，它們不會被用于所有患者。此外，其他四種比一線DMTs更積極有效藥劑，但有不良副作用，目前正處于III期臨床試驗中。MS患者殘疾進展的異質性是通過觀察在不同的時間間內隔RRMS發病人群的擴展殘疾狀態量表(EDSQ。在疾病發病5年后，10-15%的RRMS患者的擴展殘疾狀態評分 (EDSS)達到3.0(對應的是完全非臥床，但有中度殘疾的病人)，8-12年后，27% -30%的 RRMS患者EDSS評分達3，在20年后，39 %的RRMS患者EDSS評分達3，而39 %的RRMS患者達到至少6EDSS評分(對應的是病人走路需要拐杖的輔助；Simone IL et al. ,2002 Neurology,24 ；59 (12) :1922-8 ；Pittock SJ et al.,2004 Ann Neurol，56 :303-306 ； TintoreM et al.，2006 Neurology, 67 :968-972)。最近，臨床孤立綜合癥(CIQ被“重新定義”為一種懷疑潛在的炎性脫髓鞘疾病的單相表現(Miller DH et al.，2008Multiple Sclerosis, 14 :1157-1174)。“單相表現，，， 意味著首發表現為單一的臨床發作，發病較快。同期可能有多種臨床/臨床奇異表現(代表在空間的擴散)，雖然在時間上擴散不應該是顯而易見的。四個CIS的等級的定義基于單相臨床表現是否有單或多病灶的臨床或MRI特征(Miller DH et al. ,2008 Multiple Sclerosis, 14 :1157-1174).最后，應該有合理理由懷疑炎性脫髓鞘性疾病為其基本病理。在可進展為多發性硬化癥的CIS患者中，EDSS進展如下所示。百分之二十五 (25 % )的CIS患者在20年后達到至少6. 0的EDSS評分。大約45 % CIS患者在相同的20年期間達到3. 0的EDSS評分，而余下的30% CIS患者在20年后的EDSS評分低于3. 0 (Fisniku LK et al. ,2008 Brain，131 :808-817)。因此，某些確定亞群的RRMS發病患者有更嚴重的/ 活躍的疾病，這些患者發展為更高的傷殘等級的概率較高，即迅速或“快速”MS患者。某些臨床(例如，性別為男性，發病年齡較晚，和多癥狀發病)和臨床奇異因素(如，數量，體積和磁共振成像(MRI)病變部位，腦脊液(CSF)中存在寡克隆區帶(OB))都表現出了適度的預測能力，預測哪些患者的殘疾會更迅速地進展(TintoreM et al. ,2006 Neurology,67 968-972 ；and Bergamaschi R 2007 Int Rev Neurobiol，79 :423_447) 。 M胃，予頁
量有其局限性，似乎只能幫助EDSS評分為4以下的殘疾預測(Confavreux C et al.，2003 Brain, 126 :770-782)。由于目前所有的改變疾病病程療法(DMT)，只能用于EDSS評分低于 6. 5的患者，而第二代介入DMT有不良副作用或最近才完成III期研究，需要一組預后工具以提高臨床醫生預測CIS患者什么時候將復發或者CIS患者是否會迅速進展的能力。這樣的預后工具將幫助給予患者適當的建議，確定需要給予更加侵入性的DMT患者，并改善治療試驗的設計和分析(Miller DH, 2004 NeuroRx, 1 :284-294 ；Bergamaschi R2007 Int Rev Neurobiol，79 :423-447)。在本發明之前，沒有任何已知的抗原特異性介紹存在，以輔助確定疾病活動(下一次復發)，疾病的嚴重程度(突破疾病)，或病程進展的速度(EDSS進展)。如本文所述的測試，提供有關下一次復發或MS可能進展的速度有多快的信息，通知醫師以定制適當的干預治療。例如，基于在FP治療后缺少異常的MRI掃描，一個患者可被錯誤地認為在M個月內不可能發展為臨床確診的MS(CDMS)，而如果使用本發明的方法則表明，患者很可能在M個月內復發或病情進展。如果本發明的方法預測CIS患者在M個月內下一次復發的可能性極高，將要經歷CDMS神經性發作和有異常的MRI，但拒絕DMT的患者可被說服遵守治療。所述測試的臨床功效與其目前在臨床實踐中的使用的其他的例子，與這些四聚糖能預測快速MS進展和突破疾病能力有關。在CIS病例中，約25%在20年內會進展到EDSS 評分6. 0。其余的75%將進展到EDSS評分3. 0(45% )，或將低于EDSS評分3. 0 (Fisniku LK et al. ,2008 Brain, 131 :808-817)。目前的一線DMT (處方給CIS)將推遲下次復發平均 2 年(Kappos L, et al.，2007Lancet，370 (9585) :389-97)。一個 MS 專家不知道新診斷的MS患者或CIS患者是否為快速或緩慢進展者，對于DMT響應好或者響應差，或是否有突破疾病的可能性。因此，新診斷的MRI異常的MS患者或CIS患者大部分給予一線DMT。在 731天，一個出現額外的臨床事件的患者仍然沒有關于病程足夠的數據。這樣的患者可能是一個對DMT響應良好的MS快速進展患者。可選地，同一患者可能是一個緩慢進展患者， 對DMT響應不良。目前的做法是“等待及觀望”。隨著時間的流逝和更多的MRI病變數據， 以及EDSS進展積累使得決定成為可能。如果必要的話，四聚糖可在CIS期預測哪些患者進展殘疾的可能性極高，可做出改變治療方案為更具侵入性的治療的決定。對于“活躍”的患者，可以轉為新的第二代DMT，其更具侵入性并有不良的副作用。相比之下，對于“消極”的患者，可提供較少的侵入性治療，例如，一線DMT。目前，在美國僅批準了自我注射和輸液療法來治療復發的MS。口服療法如 Fingolimod和Mylinax正處于開發中，很快將擴大治療方案的選擇。最近，為了從醫生的角度研究CIS患者在MS治療上的未滿足的需求，在美國對一個神經學家的樣本中進行了一次深入的電話調查。這項調查在2008年11月至2009年2月進行。這項調查，由國家多發性硬化癥協會(匪SS)和EMD krono公司之間聯合協作，由GFK Roper完成。在參與本次調查的神經學家中(N = 250)，大部分都是私人執業(77% )有彡16年治療MS的經驗(57% )。 幾乎所有的醫生(98%)表示，他們總是向他們的病人解釋盡早開始藥物治療的好處。醫生表示，平均地，他們在過去12個月新確診的MS患者，至少有10%推遲了至少6個月的治療。醫生認為，注射恐懼(68%)，擔心可能出現的副作用(66%)，否認患有MS(61%)是推遲治療最常見的理由。當在描述MS治療上所需的改善時，70%的特別提到口服，接下來是更好的平衡療效和安全性(49% )和減少副作用(47% )。在認識到的好處的整體排名中， 醫生認為，口服療法，將有助于提高病人的依從性(53%提到)，提高生活質量(49%提到)， 并使其更容易為患者治療(47%提到)。當被特別問及關于堅持治療時，幾乎所有的醫生 (97%)同意，口服治療，如獲批準，將改善病人堅持服用所開MS藥物的能力。醫師指出了及早開始治療的好處，但不是所有患者都會遵守。可獲得口服治療是在MS治療中最想要的改善(Perrin et al.，2009 JMCP, 15(7) :572)。因此，四聚糖面板和測定血液中四聚糖抗體的濃度的試驗提供了寶貴的信息，主治醫生根據這些信息來設計最有效的治療方案，以及提供一個工具來說服可進展為MS的 CIS患者依從他們的醫生規定的治療。一直以來，人們都在搜索有用的在血清中產生的生物標志物，包括抗體。在復發性多發性硬化癥(RRMS)患者中，血清IgM抗體的N-糖肽特別地增加(Lolli F，et al. 2005 Proc Natl Acad Sci USA, 102 :10273-78 ；Lolli F, et al. 2005 J Neuroimmunol, 167 131-37)。對兩個髓鞘肽的高抗體滴度，髓鞘的少突膠質細胞糖蛋白(MOG)和髓鞘堿性蛋白
16(MBP)被一些(Berger T, et al. 2003N Engl J Med, 349 139-45)，但不是所有(Kuhle J, et al. 2007 N Engl J Med，356 :371-78)報告用于預測CIS患者的早期復發。IgG抗體的生成，特別是在腦脊液(CSF)中生成，但并不在相應的血清(即寡克隆區帶)中生成，一直是診斷和鑒別診斷MS有用的測試((Freedman MS, et al. 2005 Arch Neurol，62 :865-70)。此外，最近的研究結果表明RRMS患者與其他神經系統疾病(OND)患者相比，IgM 抗體對 Glc(a l，4)Glc(a ) (GAGA4)的水平升高(Schwarz M, et al. 2006 J Neurol Sci, 244 :59-68)。本發明呈現的結果確定何時病程(從CIS開始)升高抗體水平至GAGA2，GAGA3，GAGA4 or GAGA6，預測與疾病活動關聯的各種臨床發作(下次復發)，疾病的嚴重程度(突破)，或在某一時段內其病情進展。在本發明之前，沒有已知的診斷或預后復發型多發性硬化癥(RRMS)的基于生物標志物的特定血清面板。如下所述，隊列-C (FP (n= 100)) IgM抗體在葡萄糖聚糖面板上通過螢光免疫檢驗法測定。在隊列C中，58例患者經歷了早期復發(<Μ個月)；31例患者經歷晚期復發(彡M個月)和11例患者沒有經歷后續的第二次發作。Kaplan-Meier曲線顯示抗體面板呈陽性的患者到下次復發時間的減少(P = 0. 02，log rank)。MS病變的磁共振成像磁共振成像(MRI)是在診斷和監測MS疾病活動主要工具，這項技術能將大腦脫髓鞘區域可視化。MRI，又稱核磁共振成像(NMRI)，主要是用來顯示人體詳細的內部結構和功能限制的醫療成像技術。相比于計算機斷層掃描(CT)，MRI為不同的身體軟組織之間提供了更大的對比度，在神經系統(腦)成像上尤其有用。不同于CT，MRI不使用電離輻射，但使用一個強大的磁場使身體里水中的氫原子的核磁化。當身體暴露在強磁場中時，氫原子的原子核定向排列，從而成為微小的指南針。射頻(RF)場用于系統地改變這種磁化的排列方式， 引起氫原子核的能量的變化。無線電波脈沖停止后，當原子核恢復到先前的狀態時會發出共振波，從而在原子核的振蕩上產生小的差異，這可由一臺電腦掃描儀檢測出來。現在使用的多種MRI (最常見的是Tl增強掃描和T2增強掃描)以不同的方式測量此弛豫時間。計算機的處理可生成一個三維圖像，反映成像組織的化學結構，包括其中水的含量和水分子運動的差異。由于水(由氫原子和氧原子組成)構成人體體重的三分之二，這個信號可以被附加的磁場操縱構造整個身體的圖象，包括人類的大腦。MRI掃描對診斷和監測的MS特別有用，因為這些掃描使大腦脫髓鞘區可視化。髓磷脂是一種在神經細胞軸突周圍形成脂肪層(髓鞘)的電介質材料(絕緣)。神經細胞通過這些長的由髓鞘絕緣的神經軸突傳導電信號(動作電位)來進行聯絡。患有MS，人體自身的免疫系統攻擊和破壞髓鞘。“脫髓鞘”是指神經軸突周圍的保護髓鞘的損失，這會導致神經信號中斷，從而造成許多與MS相關的癥狀。由于，保護神經纖維的髓鞘層由脂肪組成， 完整的髓鞘通常排斥水。然而，在神經纖維脫髓鞘的區域，由于缺乏保護的脂肪層而允許積水。因此，正如上文所述，MRI掃描檢測脫髓鞘區域的水，而且這些區域無論呈現為明亮的白色斑點或黑暗的區域，主要取決于所使用的掃描類型。在大腦或脊柱已脫髓鞘的區域被稱為“病灶”或“斑”。事實上，短語“多發性硬化癥”，是指在大腦和脊髓白質上疤痕(硬化， 即斑塊或病變)。如上所述，常見的用于MS的MRI掃描包括Tl增強掃描和T2增強掃描。在大腦中，Tl增強掃描提供了良好的灰質/白質對比。Tl增強MRI掃描顯示的“黑洞”為MRI圖像上的暗區。這些所謂的低信號的病灶是永久性軸突損傷的區域。Tl增強病灶也可是水腫區 (腫脹)，其不是永久性的，在隨后的掃描中也不可見。Tl增強掃描是常規磁共振成像技術的一部分，用于監測和診斷MS，通常與T2增強掃描結合使用。T2增強MRI掃描顯示病灶的總數(損傷負載)和疾病負擔。這些都是高信號的病灶，意味著它們作為MRI圖像上的亮點出現。T2增強掃描是常規磁共振成像技術的一部分，它用于監測和診斷MS，通常與Tl增強掃描結合使用。有時不可能只通過調整成像參數產生足夠的圖像對比度，以充分顯示感興趣的解剖構造或者病理，在這種情況下需使用對比增強劑。用于檢測MRI病灶的MRI造影劑由于其特殊的磁學性質而被選定。最常用的靜脈注射造影劑是基于釓的螯合物。當懷疑是MS時， 順磁性對比劑，釓，往往被使用以提高醫生閱讀和解釋的Tl MRI掃描的能力。造影劑如釓被靜脈注射，以增強血管，腫瘤或炎癥的外觀。釓-增強的組織和流體在Tl增強影像上顯得極為明亮。要確定哪些病變在使用造影劑后增強，在使用造影劑之前和之后(例如，釓) 均執行Tl的掃描。造影劑的使用為檢測血管組織提供了高靈敏度，并使其對腦組織的評估成為可能。釓-增強的Tl增強MRI掃描通過突出對應于炎癥區的血-腦屏障損壞的區域來提供疾病活動的信息。釓(Gd)是一種稀有的鑭系元素，具有很強的順磁性。使用釓顯著降低了相鄰活動的水質子的Tl弛豫時間。因此，在使用釓(IV)后，在Tl增強像中有一個來自CNS組織的本地增強信號，通常情況下，沒有血-腦障礙，例如，室周器官，腦膜，脈絡叢，或屏障異常損壞，甚至缺失，這在許多類型的病灶中都會出現。這是活躍的MS病灶的病例，其增強與由急性血管周圍炎癥而改變血腦屏障通透性有關。釓與炎癥區域反應，當病灶處于活動狀態將 “亮起來”，表明脫髓鞘是活動的存在。因此，釓增強病變是相對較新的，例如，在病灶發展后六個星期或更少。在這種方式下，在MRI掃描前使用釓使得醫生確定哪些病灶是活動的哪些病灶是不活動的。如上所述，通過釓增強MRI掃描的鑒定活動性病灶也表明血腦屏障有破裂。使用釓后可見的病灶為對比-增強Tl MRI成像病灶。在MS領域，在每月的MRI掃描上看到新的對比-增強病灶的數量是MRI監測的試驗性治療研究中使用最廣泛的響應變量(Sormani et al.，1999 J Neurological Sci, 163(1) :74-80) 0使用此信息來評估疾病的活動，并確定是否發生復發。例如，在使用干擾素beta治療期間存在釓-增強病灶表明，未來將有臨床和MRI疾病惡化(Rudick，et al.2004 Ann Neurol, 56 :548-55 ；Rio，et al. 2008 Mult Scler, 14 :479-84 ；and Durelli, et al. 2008 J Neurol Neurosurg Psychiatry, 79 :646-51.)。抗-Glc(al，2)Gal(g)抗體(GAAB)水平的預后值如下文所述，比抗體參考水平更高水平的抗-Glc ( α 1，2) fell ( β )抗體(GAAB)能確定復發-緩解型MS (RRMS)患者將發展為由對比-增強Tl MRI病灶表現的活動性的病程。 此夕卜，比抗體參考水平更高水平的抗-Glc ( α 1，2)feil ( β )抗體(GAAB)能確定哪些RRMS患者將發展為突破MS,即盡管采取治療，MS疾病仍舊活動。本發明描述了有關預測RRMS患者將發展為由對比-增強TlMRI病灶表現的活動性病程的方法。該方法包括定性個體為兩組成員之一 (i)那些有快速病程進展的風險，導致使用磁共振成像(MRI)能觀察到的在CNS中的高水平炎性病變，或者積累的臨床殘疾，因此可能需要侵入性的改變疾病病程(DMT)療法；和ii)患者診斷為RRMS患者，將有一個正常或相對緩慢MS病程進展，較少MRI活性和較少的累積殘疾，從而需要更少的侵入性治療。在疾病的早期階段，可基于MS疾病快速進展以及炎癥性病灶的風險將患者分開， 這可以作為說服患者接受DMT早期治療的一個重要工具。因為組(i)的患者將同意接受 DMT，而組(ii)中的患者可延遲治療至下一個的臨床或影像發病期。此外，基于預測MS的病情迅速進展以及有炎癥性病灶的風險將RRMS患者分開(例如，對比強Tl MRI病灶反映在CNS中有活動的炎癥)是在確定治療方案時一個關鍵因素，因為組(i)中的患者將接受侵入性DMT方案，而組(ii)中的患者接受較少侵入性的DMT或其他一線DMT。在本發明之前，沒有任何已知的抗原特異性的介紹存在，以幫助確定疾病活動 (存在活躍的MRI病灶)，或者疾病的嚴重程度(突破病)。如本文所述的一項測試，提供了有關活躍的MRI病灶的存在或MS可能進展的速度有多快的信息，通知醫師以定制適當的干預治療。更具體地說，在本發明之前，沒有已知的具體的以血清為基礎的生物標志物能反映MS疾病活動，其活動由CNS中對比-增強Tl MRI病灶來表現。如下所述，在由RRMS患者(N= 148)組成的隊列中通過酶免疫法測定抗體水平(例如，抗-Glc(a 1，2)(^1(β)抗體(GAAB))。所有患者均接受MRI掃描，發現51例有對比-增強Tl MRI病灶，97例沒有對比-增強TlMRI病灶。對比-增強Tl MRI病灶患者的抗-Glc ( α 1, 2)Gal ( β )Gal ( β ) IgM 抗體(GAAB)水平顯著高于無對比-增強Tl MRI病灶的患者。基于接收器工作特性(ROC) 的分析，對截止水平和參考水平進行了界定。基于多方差的數理回歸模型，抗-GAAB IgM水平高于截止水平，發現MRI活動的獨立預測因素(P = 0. 003，0R3. 07，CI951. 44-6. 55)。^MM 1 : ^ IrM抗體的抗-α _測丨多發+牛硬化欠發作后白勺復發活動血清樣本此處介紹的結果是來自于一個追溯既往的研究，該研究收集后診斷為RRMS的患者在斷為FP期時，冷凍(_70°C )再解凍的血清標本。對照組包括其他神經系統疾病(OND) 患者的血清樣本，該樣本為同一時段的常規樣本并被送到腦脊液(CSF)診斷實驗室儲存。 從醫院的記錄中獲得人口統計學和臨床數據。MS樣本的入選標準如下患者年齡在采樣區間(18-60歲)，后續血液抽樣至少4年，根據Poser標準診斷為RRMS患者(Poser CM, et al. 1983 Ann Neurol，13 :227-31)。符合上述標準的樣品在兩個血清庫之一鑒定，位于加拿大渥太華的渥太華醫院總校區或者位于比利時布魯塞爾的Cliniques Universitaires Saint-Luc0復發定義為任何新的神經系統事件，伴有癥狀或體征，或者早期癥狀的顯著惡化，或者在沒有發燒的情況下持續了至少48小時的體征。所有樣品均在所屬機構編碼，然后被送往Glycominds Ltd.實驗室進行抗體分析。完成所有的分析進行解碼。對三個不同的隊列進行了分析隊列-A包括88個樣本(44FP η = 44，OND η = 44)，根據MS患者的年齡和性別匹配OND患者；隊列-B的包括252個樣本(FP η = 167，OND η = 85)；隊列-C包括100FP患者。所有樣品檢測采用盲法。總IgM的測量總IgM水平的測定采用商用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(Bethyl laboratories, Montgomery, TX, USA)根據制造商的說明，以mg/mL為單位報告。使用聚糖陣列的抗-GAGA2，抗-GAGA3，抗-GAGA4，與抗-GAGA61gM免疫熒光陣列
采用免疫熒光法(IFA)測定隊列C樣本中抗-GAGA2，抗-GAGA3，抗-GAGA4，與抗-GAGA6 IgM的水平，載玻片用聚四氟乙烯掩模制造出7集群微孔，每個集群有32個微孔 (圖1A)。一種硅粘合劑超結構(圖1B)附在載玻片上。這種硅填料將每一載玻片分成多個孔以供血清樣本的手工應用。每個孔內放置聚糖抗原與內部控制(圖1C)。如上所述，ρ-硝基苯基衍生物的 GAGA2，GAGA3, GAGA4，與 GAGA6 (Toronto Research Chemicals, Toronto, Canada)通過一個鏈接以共價鍵結合到載玻片上(Schwarz M，et al. 2006 J Neurol Sci， 244 59-68)。檢測程序載玻片上的孔在封閉液中G00L/孔)室溫培養60分鐘。清除封閉液后，300L/ 孔的病人的血清在的牛血清白蛋白(BSA)在20mM的Tris-HCl pH值7. 2,0. 9% NaCl， 稀釋到1 40，加入0. 05% Tween-2水溶液到每個孔中。每片載玻片中包含5個血清樣本和一個任意單位的對照樣本。每個樣本在不同的載玻片上測試5次。樣本培養45分鐘。 移除血清，將載玻片在HS4800系統中進行進一步的清洗和處理。簡言之，載玻片在混合系統中使用 TNTT 緩沖液清洗(20mM Tris-HCl pH 7·2，2Μ NaCl,0. 05% Tween-20,0. 05% Triton X-100)。生物素化羊抗人IgM(l 500)和Alexa-633標記的鏈霉親和素(1 150 ； Molecular Probes, OR, USA)依次培養lh，其間進行清洗，混合系統在32°C光保護溫度控制的環境下。在清洗和烘干后，利用激光掃描儀對載玻片進行掃描(GenePix 4000B,Molecular Device, Baltimore, MD, USA)；載玻片圖像分析采用Optiquant ”軟件和RFU代表的抗-聚糖IgM對每種抗原的相對結合和對照微孔進行了計算。每個孔的數據質量進行了驗證，通過確保人IgM的信號水平，和抗-人IgM的點在截止水平以上。如果孔不符合標準，樣本再次進行測試。計算每個樣品抗-GAGA2，抗-GAGA3，抗-GAGA4，和抗_GAGA6IgM的抗體水平， 將樣本RFU除以參考樣本RFU。抗-α-葡萄糖水平的變異系數(CV)對于內部載玻片孔為 8-12%，對于混合站不同的運行周期(載玻片間)為15-22%。如果至少四種抗體中的一種高于截止水平，樣品被視為陽性。每種抗原的截止值分別為FP人群的平均值加1，1. 5，或2 個SD，最佳合適的截止值(4. 0,4. 5，4. 5和4. 3分別對應于抗-GAGA2，抗-GAGA3，抗-GAGA4， 和抗-GAGA6IgM)。統計方法采用學生t檢驗或采用曼-惠特尼U檢驗對數值變量在組間進行比較，依賴于其是否遵循正態分布，以及如果任何細胞的預期數小于5，2檢驗比較各組之間的速度或 Fisher精確測試。數值變量之間進行Pearson相關分析。P值小于0. 05被認為有統計學意義。結果的不確定性由95%可信區間表示。診斷的準確性由敏感性，特異性，陽性預測值 (PPV)和陰性預測值(NPV)算出。為每個組計算發展為臨床確診的MS(CDMS)的累積風險， 根據Kaplan-Meier法，組與組之間的差異使用log-rank檢驗通過單因素分析評估。為了測試標記抗體區分患者是否為高風險或低風險提前轉化為CDMS(隊列C)FP 患者的能力，對幾個截止值進行了研究。分析中使用了 Bonferroni校正因子。隊列-A 確定哪些FP患者在M個月內將有第二次發作隊列-A的臨床和人口學特征以及抗-GAGA4水平如表1所述。在血液抽取和首次復發的之間的時間中有關數據，來自于41/44FP患者。沈個Q6/41)FP患者(63%)在采血后2年中第一次復發。這些患者的平均年齡與較晚遭受了第二次發作的患者相比，明顯比小(平均34歲與42歲，P = 0.001)，然而，在被研究人群中，年齡和抗-GAGA4 IgM水平沒有聯系。為了檢查抗-GAGA4 IgM水平和較早(即，2對4年)的第二次發作的風險之間的關系，對抗-GAGA4 IgM水平為整個FP組的抗體水平中位數以上的患者進行檢查。16(16/20) (80% )高于抗體滴度中位數的患者在兩年內出現第二臨床發作，相比下，這個數據在滴度等于或低于中位數的患者中只有10/21 (47%)(優勢率4. 495%置信區間1. 1-17. 7,Fisher 精確檢驗，P = O. 05)。表1 隊列-A的人口統計資料，臨床特征和抗_GAGA4IgM水平
權利要求
1.一種確定患有臨床孤立綜合癥(CIS)的個體在二十四個月內會進展到臨床確診的多發性硬化癥(CDMQ的方法，該方法包括所述個體提供一測試樣本；檢測所述測試樣本中的抗-Glc(a l，2)Glc(a)抗體，抗-Glc ( α 1，3)Glc ( α )抗體， 抗-Glc(a l，4)Glc(a)抗體，和抗-Glc ( a 1，6) Glc ( a )抗體；以及將所述測試樣本的所述抗體的水平與所述抗體的參考水平相比較，其中至少有一種所述抗體的水平與所述抗體的參考水平的抗體相比更高的話表明，所述個體有可能在二十四個月內進展到CDMS。
2.權利要求1所述的方法，其中有一種所述抗體的水平與所述抗體的參考水平的抗體相比更高表明，所述個體在36個月內有遭受第二次神經侵襲的風險。
3.權利要求1所述的方法，其中有一種所述抗體的水平與所述抗體的參考水平的抗體相比更高表明，所述個體在48個月內有第二次遭受神經侵襲的風險。
4.權利要求1所述的方法，其中所述的測試樣本是一種生物流體，為全血，血清，或者血漿。
5.權利要求1所述的方法，其中所述抗體為IgM同型抗體。
6.一種確定患有CIS的個體有可能在20年內遭受嚴重的MS病程快速進展的方法，該方法包括由處于CIS期的個體提供一測試樣本；檢測所述測試樣本中的抗-Glc(a l，2)Glc(a) (GAGA2)抗體，抗-Glc ( a 1，3) Glc ( a ) (GAGA3)抗體，抗-Glc(a l，4)Glc(a ) (GAGA4)抗體，或抗-Glc ( a 1，6) Glc ( a ) (GAGA6)抗體；將所述測試樣本每種抗體的樣本水平與所述抗體的參考水平相比較；以及其中至少有一種所述抗體的水平與所述抗體的參考水平的抗體相比更高表明，所述個體在20年內可能在EDSS評分上進展超過1個單位，所述EDSS評分可預測疾病嚴重程度。
7.權利要求6所述的方法，其中至少有一種所述抗體的水平較高表明所述個體在20年內有可能在EDSS評分上進展至少兩個單位。
8.權利要求6所述的方法，其中至少有一種所述抗體的水平較高表明所述個體在20年內有可能在EDSS評分上進展至少三個單位。
9.權利要求6所述的方法，其中至少有一種所述抗體的水平較高表明所述個體在20年內有可能在EDSS評分上進展超過三個單位。
10.權利要求6所述的方法，其中至少有一種所述抗體的水平較高表明所述個體在20 年內有可能在EDSS評分上進展超過六個單位。
11.權利要求6所述的方法，其中至少有一種所述抗體的水平較高表明所述個體在10 年內有可能在EDSS評分上進展超過1個單位。
12.權利要求6所述的方法，其中至少有一種所述抗體的水平較高表明所述個體在7年內有可能在EDSS評分上進展超過1個單位。
13.權利要求6所述的方法，其中至少有一種所述抗體的水平較高表明所述個體在5年內有可能在EDSS評分上進展超過1個單位。
14.權利要求6所述的方法，其中至少有一種所述抗體的水平較高表明所述個體在4年內有可能在EDSS評分上進展超過1個單位。
15.權利要求6所述的方法，其中所述的測試樣本是一種生物流體，為全血，血清，或者血漿。
16.權利要求6所述的方法，其中所述抗體為IgM同型抗體。
17.一種確定患有CIS的個體有可能在20年經歷嚴重程度為MS病程緩慢進展的方法， 該方法包括由處于CIS期的個體提供一測試樣本；檢測所述測試樣本中的抗_Glc(a l，2)Glc(a) (GAGA2)抗體，抗-Glc ( a 1，3) Glc ( a ) (GAGA3)抗體，抗-Glc (a l，4)Glc(a) (GAGA4)抗體，和抗 _Glc(a l，6)Glc(a) (GAGA6)抗體；將所述測試樣本每種抗體的水平與所述抗體的參考水平相比較；并且其中每種所述抗體的水平相等或者更低表明，所述個體在20年內可能在EDSS評分上緩慢進展，所述EDSS評分可預測疾病嚴重程度。
18.權利要求17所述的方法，其中每種所述抗體的水平相等或者更低表明所述個體在 5年內可能在EDSS評分上進展不超過1個單位。
19.權利要求17所述的方法，其中所述的測試樣本是一種生物流體，為全血，血清，或者血漿。
20.權利要求17所述的方法，其中所述抗體為IgM同型抗體。
21.一種確定將發展為突破MS個體的方法，該方法包括所述個體提供一測試樣本；檢測所述測試樣本中的抗-Glc(a l，2)Glc(a)抗體，抗-Glc ( a 1，3)Glc ( a )抗體， 抗-Glc(a l，4)Glc(a)抗體，和抗-Glc ( a 1，6) Glc ( a )抗體；并且將所述測試樣本所述抗體的水平與所述抗體的參考水平相比較，其中至少有一種所述抗體的水平與所述抗體的參考水平的抗體相比更高表明，所述個體有可能發展為突破MS。
22.權利要求21所述的方法，其中至少一種所述抗體的水平更高表明所述個體在5年內可能發展為突破MS。
23.權利要求21所述的方法，其中所述的測試樣本是一種生物流體，為全血，血清，或者血漿。
24.權利要求21所述的方法，其中所述抗體為IgM同型抗體。
25.一種包含計算機可執行指令的計算機可讀介質所執行的方法包括存儲至少一個與CIS患者的測試樣本中至少一種抗體水平相關的第一變量；存儲至少一個與至少一種參考水平相關的第二變量；用至少包括第一和第二變量的函數計算轉變為臨床確診的多發性硬化癥(CDMQ的患者的風險因子；并且輸出風險因子。
26.權利要求25中的計算機可讀介質，其中至少一個第一變量與測試樣本中的抗-Glc (a l，2)Glc(a)抗體，抗-Glc (a l，3)Glc(a)抗體，抗-Glc (a l，4)Glc(a)抗體， 和抗_Glc(a l，6)Glc(a)抗體水平對應。
27.權利要求25中的計算機可讀介質，其中至少一個第一變量與選自下列組別中的測試樣本的至少一種抗體水平對應抗_Glc(a lj)Glc(a) (GAGA2)IgM同型抗體， 抗-Glc (a l，3)Glc(a) (GAGA3) IgM 同型抗體，抗 _Glc(a l，4)Glc(a) (GAGA4) IgM 同型抗體，與抗-Glc (a l，6)Glc(a) (GAGA6) IgM 同型抗體。
28.一種包含計算機可執行指令的計算機可讀介質所執行的方法包括存儲至少一個與CIS患者的測試樣本中至少一種抗體水平相關的第一變量； 存儲至少一個與至少一種參考水平相關的第二變量；用至少包括第一和第二變量的函數計算患者在EDSS評分上進展的風險因子；并且輸出風險因子。
29.權利要求觀中的計算機可讀介質，其中至少一個第一變量與測試樣本中的抗-Glc (a l，2)Glc(a)抗體，抗-Glc (a l，3)Glc(a)抗體，抗-Glc (a 1,4) Glc ()抗體，和抗-Glc (a l，6)Glc(a )抗體對應。
30.權利要求觀中的計算機可讀介質，其中至少一個第一變量與選自下列組別中的測試樣本的至少一種抗體水平對應抗_Glc(a lj)Glc(a) (GAGA2)IgM同型抗體， 抗-Glc (a l，3)Glc(a) (GAGA3) IgM 同型抗體，抗 _Glc(a l，4)Glc(a) (GAGA4) IgM 同型抗體，與抗-Glc (a l，6)Glc(a) (GAGA6) IgM 同型抗體。
31.一種包含計算機可執行指令的計算機可讀介質所執行的方法包括 存儲至少一個與患者的測試樣本中至少一種抗體水平相關的第一變量； 存儲至少一個與至少一種參考水平相關的第二變量；用至少包括第一和第二變量的函數計算患者進展為突破MS的風險因子；并且輸出風險因子。
32.權利要求31中的計算機可讀介質，其中至少一個第一變量與測試樣本中抗-Glc(a l，2)Glc(a)抗體，抗 _Glc(a l，3)Glc(a)抗體，抗 _Glc(a l，4)Glc(a)抗體， 和抗-Glc (a l，6)Glc(a)抗體對應。
33.權利要求31中的計算機可讀介質，其中至少一個第一變量與選自從下列組別中的測試樣本的至少一種抗體水平對應抗_Glc(a l，2)Glc(a) (GAGA2)IgM同型抗體， 抗-Glc (a l，3)Glc(a) (GAGA3) IgM 同型抗體，抗 _Glc(a l，4)Glc(a) (GAGA4) IgM 同型抗體，與抗-Glc (a l，6)Glc(a) (GAGA6) IgM 同型抗體。
34.一種確定有由對比-增強Tl MRI病灶檢測的活躍病程風險的個體的方法，該方法包括所述個體提供一測試樣本；檢測所述測試樣本中抗_Glc( a 1，2) foil (β) (GAAB) IgM抗體的抗體水平；并且將所述測試樣本中的所述抗體水平與所述抗體的參考水平相比，其中所述抗體水平與所述抗體的參考水平相比更高與由對比-增強Tl MRI病灶檢測的活躍病程相關。
35.權利要求34所述的方法，其中所述的測試樣本是一種選自全血，血清和血漿所組成的組合的生物流體。
36.一種確定會發展為突破MS的患有RRMS個體的方法，該方法包括 所述個體提供一測試樣本；檢測所述測試樣本中抗_Glc( a 1，2) foil (β) (GAAB) IgM抗體的抗體水平；并且將所述測試樣本中的所述抗體水平與所述抗體的參考水平相比，其中所述抗體水平與所述抗體的參考水平相比更高與突破MS相關。
37.權利要求36所述的方法，其中所述的測試樣本是一種選自全血，血清和血漿所組成的組合的生物流體。
38.一種包含計算機可執行指令的計算機可讀介質所執行的方法包括存儲至少一個與RRMS患者的測試樣本中至少一種抗體水平相關的第一變量； 存儲至少一個與至少一種參考水平相關的第二變量；用至少包括第一和第二變量的函數計算進展為由對比-增強Tl MRI表現的活躍病程的風險因子；并且輸出風險因子。
39.權利要求38中的計算機可讀介質，其中至少一個第一變量與測試樣本中抗-Glc ( α 1，幻fed ( β ) (GAAB) IgM抗體水平對應。
40.一種包含計算機可執行指令的計算機可讀介質所執行的方法包括存儲至少一個與RRMS患者的測試樣本中至少一種抗體水平相關的第一變量； 存儲至少一個與至少一種參考水平相關的第二變量； 用至少包括第一和第二變量的函數計算進展為突破MS的風險因子；并且輸出風險因子。
41.權利要求40中的計算機可讀介質，其中至少一個第一變量與測試樣本中抗-Glc ( α 1，幻fed ( β ) (GAAB) IgM抗體水平對應。
全文摘要
本發明涉及多發性硬化癥診斷和評估預后的方法和試劑。本發明是基于以下發現，部分地，抗-聚糖抗體對評估可發展為多發性硬化癥(MS)的臨床孤立綜合癥(CIS)患者是否會有臨床復發的風險有用，例如，24個月。該發明也基于發現了抗-聚糖抗體對評估可發展為MS的CIS患者會有快速的病程進展以及累積殘疾的風險有用，例如，永久性殘疾，在某一特定時間范圍內，例如，5年。
文檔編號G01N33/68GK102439457SQ201080016344
公開日2012年5月2日 申請日期2010年2月11日 優先權日2009年2月12日
發明者A·杜克勒, J·亞登, N·多坦 申請人:格里科麥德斯有限公司