專利名稱：預處理型側向層析檢測組件的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種檢測裝置，尤其涉及一種預處理型檢測組件，采集到的樣品 可直接施加于檢測組件內，由其中預處理部件對樣品進行處理后轉移至側向層析檢測部件 進行檢測。
背景技術：
抗原或抗體的檢測屬于免疫學檢測技術，根據檢測標記物的不同，可以將檢測方 法分為酶聯免疫檢測、同位素免疫檢測、膠體金免疫檢測、熒光免疫檢測和化學發光免 疫檢測等，根據檢測方式不同，又可以分為免疫酶標板、免疫側向層析試紙和免疫滲濾 等方法。其中，目前使用最廣泛且最具代表性的免疫學檢測方法為酶聯免疫吸附檢測法 (ELISA)0 ELISA檢測通常在48孔或96孔酶標板上完成，檢測過程步驟較多，時間較長，檢 測所需的樣本量亦較大。其單次檢測的樣本數較少且難以同時檢測多種抗原或抗體。與酶聯免疫吸附技術相比，免疫滲濾技術和免疫側向層析技術具有操作簡單(僅 需一步)、應用靈活(單人份或少量樣品)和檢測時間短(約15分鐘)等特點。斑點金免疫滲 濾法(Dot ImmunoGold Filtration Assay, DIGFA)是免疫滲濾技術的代表，該方法的裝置 包括蓋板、底板、微孔濾膜和吸水紙。微孔濾膜置于吸水紙上，然后放置于底板內，最后蓋上 設有通孔(反應孔)的蓋板。微孔濾膜上包被有分子(抗原或抗體)，待測樣品滴加于微孔濾 膜后，液體在重力作用下而向濾膜下方滲濾，再通過清洗和加入標記抗體后實現對待測樣 品中的目標分子的檢測。免疫側向層析技術(Lateral Flow Immunoassay，LFIA)是繼免疫滲濾之后的另一 項膜固相檢測技術，通常采用試紙條，這類試紙條通常包括樣品墊(sample pad)、標記結合 墊(conjugate pad)檢測墊(membrane)、吸水墊(wick)和支撐底板(backing)。該技術主 要以硝酸纖維素膜為載體，利用微孔膜的毛細管作用實現溶液在載體上的遷移。待測樣品 經樣品墊上樣，在毛細現象的作用下，滴加在膜條一端的待測樣品慢慢向另一端滲移。移動 過程中目標分子與固定于膜上某一區域的分子(抗體或抗原)結合，待測樣品中的其它分子 則繼續滲移而與目標分子分離，然后通過標記物(如熒光、化學發光、放射性或顯色等)來 判斷待測樣品中是否含有目標分子。在運用這些檢測技術之前，需要對采集到的樣品進行前處理，如通過離心的方式 將血清從血液中分離，才能避免血紅細胞對檢測結果的干擾。為使檢測器件在實際應用中 更為簡便，中國實用新型專利ZL01206818. 7公開了一種帶有過濾結構的抗原一抗體反應 型檢測試紙，在沿長度方向延伸的片狀支承結構體的一側表面經連接材料設置有可用于包 被檢測用生物大分子的檢測反應膜，在其長度方向的一端表面處設置有包被有化學偶合物 的墊片材料結構層。至少在檢測反應膜長度方向的另一端表面處以能與其保持液體滲透接 觸方式設置有至少一層疏水性的血液細胞過濾結構層。中國發明專利申請200810045268. 1 公開了一種便攜式血液傳染病快速聯檢裝置，包括吸樣頭和連接在吸樣頭后端的檢測管。 吸樣頭內腔由前至后分別填充有樣品過濾材料和樣品吸水材料，檢測管中內置試紙固定柱，該試紙固定柱上固定有多種檢測試紙條，通過一次吸樣、同背景檢測，幾分鐘內即可用 肉眼一次同時聯檢樣品。上述兩項技術雖都采用了過濾材料，但是采用樣品側向層析的同時對血液細胞進 行過濾的方式，仍難以避免血紅細胞對檢測干擾，對檢測結果準確性造成一定的影響。中國實用新型專利ZL01227580. 8公開了一種血漿分離檢測試劑盒，包括由不透 水硬質材料制成的支撐底片、粘貼在支撐底片上濾血膜墊、一端與濾血膜墊相接，粘貼在支 撐底片上檢測膜、以及不透水的隔離膜，一端粘貼于檢測膜與濾血膜墊相接處的濾血膜墊 端，另一端粘貼于濾血膜墊的頂部。血液樣品施加于濾血膜墊后，在重力作用下垂直過濾后 在有水平通過側向層析進行檢測。采用垂直加樣的方式，使全血樣品在重力作用下依次透 過分散膜墊和附加濾血膜墊，在側向通過濾血墊膜后，按側向層析方式完成檢測。該技術通 過多層次的過濾，避免了血紅細胞對檢測的干擾，但是樣品需要先經垂直過濾后，再直接側 向過濾，當分子量偏大或分子的Stocks半徑較大時，分子遷移無法實現同步性，從而難以 滿足樣品檢測的重現性和平行性要求。中國發明專利申請200910148911. 8公開了一種用于快速檢測全血樣品中的目標 物質的裝置，包括用于接收并過濾全血樣品以產生濾過的血樣的第一部件，用于接收該濾 過的血樣并且檢測是否存在目標物質的第二部件，其中第一部件包括反應膜，以及通過毛 細作用將濾過的血樣從第一部件中轉移至第二部件的第三部件，其中第一部件位于第二部 件的上方。該技術同樣采用垂直過濾方式，但是在完成樣品過濾之后還需要在第三部件參 與下，把過濾后的樣品轉移至第二部件已完成檢測，實際操作過程不夠簡便，易對樣品造成 污染。
實用新型內容本實用新型的目的在于提供一種預處理型側向層析檢測組件，過濾部件先對采集 的樣品進行垂直過濾后，再在檢測部件一端加入檢測試劑，按側向層析方式完成檢測。本實用新型提供的一種預處理型側向層析檢測組件，包括檢測部件、支撐部件和 過濾部件。檢測部件包括試劑墊、標記墊、層析墊和吸收墊。試劑墊和吸收墊設于檢測部件的 兩端，標記墊與試劑墊連接，層析墊兩端分別與標記墊和吸收墊連接。組成本實用新型檢測 部件的各個組件，如試劑墊、標記墊、層析墊和吸收墊的材質與側向層析的試紙條所用的 材質一致。支撐部件包括底座和蓋板，檢測部件置于底座上，蓋板蓋于檢測部件。蓋板上設有第一開口、第二開口和第三開口。第一開口，用于將層析試液(如緩沖 液或水)施加于開口之下的試劑墊；第二開口之下為層析墊；第三開口，用于對其下方的側 向層析T線區和C線區進行判斷，如通過肉眼觀察或借助儀器進行檢測。過濾部件與第二開口配合，如第二開口內設置過濾部件，或將過濾部件單獨設 置，使用時將過濾部件置于第二開口。在過濾樣品時，過濾部件的下方為層析墊。過濾部件為單一材質制成的單層膜，或由多種材質制成的復合膜。許多公司都提 供這類商品化具有過濾作用的膜，如PALL、Millipore和GE Healthcare等公司。與側向層析一致，標記墊上結合有標記物的標記抗體或標記抗原。用于標記抗體的標記物，如但不僅限于，膠體金、納米磁性顆粒、膠體碳、膠體硒、脂質體、量子點、金屬離 子、有機熒光分子或彩色微球等。層析膜上需要把結合抗原或抗體預先固定于T線區和C 線區。抗原是能在機體中引起特異性免疫應答的物質。抗原進入機體后，可刺激機體產 生抗體和引起細胞免疫。在免疫測定中，抗原是指能與抗體結合的物質。抗原的反應性取 決于抗原決定簇(antigenic determinant)，亦稱表位(印itope)。一個抗原分子可帶有不 同的決定簇。此外，還可以通過基因工程或化學連接的方式對表位進行拼接。抗體是能與抗原特異性結合的免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)。Ig分五類，即 IgG、IgA、IgM、IgD和IgE0與免疫測定有關的Ig主要為IgG和IgM0抗原或抗體的制備，可以通過多肽化學合成、原核微生物(如大腸桿菌)基因工程 菌表達后純化、真核微生物(如啤酒酵母、畢赤酵母和乳酸克魯韋酵母等)基因工程菌表達 后純化或由動物細胞(如中國倉鼠CH0、倉鼠BHK、鼠骨髓瘤細胞小鼠成纖維細胞、猴CVl細 胞和人淋巴細胞等)等進行表達并純化。本實用新型中，試劑墊在制作過程中預先加入組成緩沖液的各種組分，如 Tween-20和0. OlM的磷酸鹽制成PBST緩沖液。實際使用中，只需要向第一開口加入適量的 水與試劑墊上即可，不需要在實驗過程中再配制緩沖液。本實用新型提及的“待測樣品”、“血樣”、或“試樣”來自于“受試者”的血液、尿液、 分泌物、組織液、體外培養液或組織等。本實用新型提及的“病患”、“病人”和“受試者”指人、野生動物和家畜 (Livestock)。野生動物為自然狀態下未經人工馴化的動物。家畜是為了提供食物來源而 人工飼養的動物，如狗、鼠、倉鼠、豬、兔、奶牛、水牛、公牛、綿羊、山羊、鵝和雞等。給予診斷 的“患者”優先選擇哺乳動物，尤其是人。本實用新型技術方案實現的有益效果本實用新型提供的預處理型側向層析檢測組件，包括檢測部件、支撐部件和過濾 部件。樣品經過濾部件垂直過濾后于檢測部件的層析墊上，將試液加入檢測部件后按側向 層析的方式完成檢測。垂直過濾方式不僅避免了血紅細胞對檢測結果的干擾，提高了檢測 結果的準確性。過濾后的樣品需要在試液的驅動下完成側向檢測，從而保證了樣品分子能 在毛細作用下均勻遷移，提高了檢測的重現性和平行性。本實用新型提供的檢測組件結構簡單，易于操作，檢測所需的樣品微量，檢測過程 一次性完成，還有效避免了樣品過濾后污染情況的發生。
圖1為本實用新型檢測組件一實施例的結構示意圖；圖2為本實用新型檢測部件一實施例的結構示意圖；圖3為本實用新型檢測組件另一實施例的結構示意圖；圖4為本實用新型過濾部件另一實施例的結構示意圖。
具體實施方式
以下結合附圖詳細描述本實用新型的技術方案。本實用新型實施例僅用以說明本實用新型的技術方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本實用新型進行了詳細說明，本領 域的普通技術人員應當理解，可以對實用新型的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫 離本實用新型技術方案的精神和范圍，其均應涵蓋在本實用新型的權利要求范圍中。圖1為本實用新型預處理型側向層析檢測組件一實施例的結構示意圖，圖2為本 實用新型檢測部件一實施例的結構示意圖。如圖1和圖2所示，該檢測組件，包括支撐部件 1、檢測部件2和過濾部件3。支撐部件1包括底座11和蓋板12。蓋板12上設有三個開口，分別為第一開口 121、第二開口 122和第三開口 123。檢測部件2的材質與側向層析的試紙條所用的材質一致。本實施例中，試劑墊21 和吸收墊24設于檢測部件2的兩端，標記墊22與試劑墊21連接，層析墊23兩端分別與 標記墊22和吸收墊24連接，從而組成檢測部件2。本實施例中，試劑墊21預先加入含有 Tween-20的磷酸緩沖液(pH7. 2_pH7. 5)的干試紙。在標記墊22上使用標記物標記的抗體 或抗原。按側向層析的相同方式，在層析墊23上劃出T線231和C線232。檢測部件2置于底座11上，蓋板12蓋于檢測部件2上。第一開口 121之下為試劑 墊21，過濾部件3設置于第二開口 122，第三開口 123之下為層析墊23，通過第三開口 123 能直接觀察到T線231和C線232。從患者采集到的待測樣品直接施加于過濾部件3后，在重力作用下，過濾部件3對 樣品進行垂直過濾，過濾后的樣品轉移到下層的層析墊23，并被層析墊23吸附。此時經過 濾的樣品不發生側向層析，而固定于層析墊23上。之后將適量的去離子水施加于試劑墊21 上，去離子水溶解試劑墊21中的Tween-20和磷酸緩沖鹽，而成pH7. 2_pH7. 5的PBST緩沖 液，并在毛細作用下進行側向層析，先通過標記墊22，其中的標記抗體或抗原在緩沖液的帶 動下，于層析墊23處，與過濾樣品中的目標分子結合，最后被固定于層析墊23上的T線231 和C線232捕獲。若標記墊22上的標記物為膠體金時，側向層析完成后，可于第三開口 123 觀察T線231和C線232，以確定檢測結果。若標記墊22上的標記物為磁性納米顆粒時，側 向層析完成后，在檢測儀器的協助下于第三開口 123檢測T線231和C線232，以確定檢測 結果。整個檢測過程操作簡單，檢測結果易于判斷。使用本實用新型預處理型側向層析檢測組件，僅需要若干微升的樣品加于過濾部 件即可，采樣微量，對病患影響小。圖3為本實用新型預處理型側向層析檢測組件另一實施例的結構示意圖，圖4為 本實用新型過濾部件另一實施例的結構示意圖。如圖3和圖4所示，該檢測組件，包括支撐 部件1、檢測部件2和過濾部件3。檢測部件2的結構如圖2所示。支撐部件1包括底座11和蓋板12。蓋板12上設有三個開口，分別為第一開口 121、第二開口 122和第三開口 123。第一開口 121之下為試劑墊21，第二開口 122之下為 層析墊23，第三開口 123之下為層析墊23的T線231和C線232。過濾部件3單獨設置于支板4上。檢測樣品時，將支板4蓋于蓋板12上，使過濾 部件3與第二開口 122配合，過濾之后可以取走支板4。之后按上述方式進行以完成側向層 析檢測。
權利要求一種預處理型側向層析檢測組件，其特征在于包括支撐部件，包括底座和蓋板；蓋板，包括第一開口、第二開口和第三開口；檢測部件，包括試劑墊、標記墊、層析墊和吸收墊；所述試劑墊和所述吸收墊設于所述檢測部件的兩端，所述標記墊與所述試劑墊連接，所述層析墊兩端分別與所述標記墊和所述吸收墊連接；過濾部件，與所述第二開口配合；所述檢測部件置于所述底座上，所述蓋板蓋于所述檢測部件。
2.根據權利要求1所述的預處理型側向層析檢測組件，其特征在于所述試劑墊置于所 述第一開口下方。
3.根據權利要求1所述的預處理型側向層析檢測組件，其特征在于所述層析墊置于所 述第二開口下方。
4.根據權利要求1所述的預處理型側向層析檢測組件，其特征在于所述層析墊還包括 T線區和C線區，所述T線區和所述C線區位于所述第三開口下方。
專利摘要一種預處理型側向層析檢測組件，包括檢測部件、支撐部件和過濾部件。樣品經過濾部件垂直過濾后于檢測部件的層析墊上，將試液加入檢測部件后按側向層析的方式完成檢測。垂直過濾方式不僅避免了血紅細胞對檢測結果的干擾，提高了檢測結果的準確性。過濾后的樣品需要在試液的驅動下完成側向檢測，從而保證了樣品分子能在毛細作用下均勻遷移，提高了檢測的重現性和平行性。本實用新型提供的檢測組件結構簡單，易于操作，檢測所需的樣品微量，檢測過程一次性完成，還有效避免了樣品過濾后污染情況的發生。
文檔編號G01N33/558GK201673153SQ20102029582
公開日2010年12月15日 申請日期2010年8月18日 優先權日2010年8月18日
發明者崔大祥, 王賢松 申請人:上海交通大學;蘇州康立達納米生物工程有限公司