一種測定抗SmD1抗體IgG的方法及試劑裝置的制作方法

專利名稱：一種測定抗SmD1抗體IgG的方法及試劑裝置的制作方法
技術領域：
本發明申請涉及一種測定抗SmDl抗體IgG的方法及試劑裝置，屬于生物檢測技術 領域。
背景技術：
抗Sm抗體，以病人名字(Smith)命名。抗Sm抗體的靶抗原位于細胞核內一組由 核蛋白與RNA所構成的分子顆粒上。這組蛋白被稱為小核糖核蛋白(snRNP)。由于這組小 分子的snRNP中尿嘧啶含量豐富，故snRNP又被稱為hnRNP。其中^nRNP在細胞內通過形 成剪切體，參與信使RNA的成熟過程。UsnRNP中能被抗S m抗體識別的蛋白質組分被稱為 Sm “共同核心”。抗Sm抗體是目前公認的SLE的血清標記抗體，但在系統性紅斑狼瘡(SLE)中的 陽性率僅為20% 40%。抗Sm抗體識別的蛋白多肽至少有9種，而蛋白多肽D是最主要 靶抗原。抗原SmD有三種亞型，SmDl、SmD2、SmD3，對SmDl結合力最強。把特異性結合蛋白 多肽SmDl的自身抗體稱為抗SmDl抗體。SmDl為SLE高度特異性靶抗原，在SLE患者中抗 SmDl抗體陽性率可達70%，而非SLE的免疫病患者為8. 3%，研究中的健康對照組均為陰 性。SmDl抗體對SLE診斷不僅有高度特異性，而且其敏感性高于抗Sm抗體。抗Sm抗體陰 性SLE患者中可檢測到SmDl抗體.而在SmDl抗體陰性SLE患者中未能檢測到Sm抗體，因 而該抗體檢測對SLE診斷優于Sm抗體檢測。其檢測方法包括如下幾種一、免疫沉淀法免疫沉淀法主要用于抗原或者抗體的定性檢測。其原理是可溶性抗原與相應抗體 在有電解質存在的情況下，按適當比例所形成的可見沉淀物現象。此法是檢測抗Sm抗體和 抗nRNP抗體的金標準(gold standard)，但這種方法技術要求高，要應用放射性同位素，故 沒有被廣泛采用。且本法只是單一的定性試驗，不能定量分析，本底不易清除，對結果有很 大影響。二、免疫雙擴散法免疫雙擴散法特異性高，操作簡單，無需特殊儀器或純化的抗原，但它的敏感性相 對較低。三、間接免疫熒光法一般使用此方法進行初步抗體的篩查。但是其不足也是明顯的(1)在分析結果時無法根據分子量的大小區分非特異性識別。(2)操作相對復雜，需要價格較昂貴的熒光顯微鏡，在很多基層醫院難以推廣，也 不太適用于標本量較多的實驗室。(3)熒光測定中的本底較高，熒光免疫技術用于定量測定有一定困難。(4)結果判定需要有經驗的專業人員，分析結果的客觀性不足。四、免疫印跡法一般經過了間接免疫熒光法的篩查后，用免疫印跡法進行確認。其不足之處在于(1)只能進行定性和半定量分析，無法得出被檢物質具體的量。(2)操作步驟繁瑣，試驗用時較長，在基層開展此項檢測比較困難。(3)檢測的靈敏度和特異性還有待提高。(4)同時，由于提取抗原整個過程復雜，耗時長，儀器設備要求高，且抗原難以長期 保存，也不利于臨床推廣應用。(5)試驗結果不易判斷。五、酶聯免疫吸附法ELISA具有敏感性高、操作時間短等優勢，但與其他生物檢測或免疫檢測比較，這 種ELISA檢測方法、技術、工具或產品仍有較多的不足而使其應用受限，這些不足主要包括 以下幾個方面(1)使用12X8型、8X 12型或整板型96孔專用微孔板作為抗原抑或抗體包被用 品和反應容器，在使用時只能分成12批次、8批次或整板一次使用；(2)定量測定所用的試劑可多達11種，每一種檢測試劑都要用試劑瓶來盛裝，并 且每使用一種試劑時都需要更換吸液嘴來分別加注到微孔板的微孔中，不但試劑瓶種類 多，加注試劑的操作也極為繁瑣，如果不使用全自動酶免分析儀的話，則全部操作都要用手 工來進行，而全自動酶免分析儀的價格十分昂貴，投入較大；(3)每一檢測或每次檢測無試劑信息的條形碼，只能通過查看試劑盒外包裝盒的 標識才能了解或知悉檢測試劑的生產批號及有效期信息，而且所知悉的信息在檢測過程中 不受控，具有很大的隨意性；(4)檢測試劑在檢測過程中為開放方式，容易引起各種試劑之間的交叉污染而影 響檢測結果；(5)在未采用全自動酶免分析儀進行檢測時的檢測過程為手工操作，試劑或樣品 的加量不很精確，操作過程極為繁瑣和復雜，容易發生操作差錯，檢測結果的不準確度和不 精密度高；(6)在檢測項目成套試劑的數量配置及使用上均為項目數X96人份，如果需要檢 測10個項目，則試劑的配置及使用數須為10X96人份，如果只有一份樣品需要檢測10個 不同的項目，也需要配置10X96人份的試劑。

發明內容
為了解決抗SmDl抗體IgG分析檢測現有方法中存在的不足之處，本發明申請提供 一種新的檢測方法和試劑裝置及配套試劑。該方法基于酶聯免疫檢測技術，尋求一種更加 簡單、準確、有效的一套方法及試劑來進行定量檢測以滿足臨床診斷的需要。本方法基于酶聯免疫檢測的原理來實現抗SmDl抗體IgG的免疫檢測，是一種獨立 的、單人份的、一次性的用于酶聯免疫檢測抗SmDl抗體IgG的分析方法、試劑裝置以及配套 試劑，它可以將抗SmDl抗體IgG酶聯免疫檢測所需要的多種試劑盛裝在一個分析裝置上， 通過這種方法可以更方便地根據檢測項目的使用需要進行相關的免疫學檢測，為臨床應用 提供了更好的依據。本發明申請提供一種測定抗SmDl抗體IgG的方法，是通過酶聯免疫檢測的分析試劑裝置和配套試劑組成的試劑盒來實現的，這種分析試劑裝置包括設有8個孔位的基體和 位于基體一端的手柄，它通過專用特定分析儀器對試劑裝置各孔之間的各種特定試劑溶液 進行加注和吸棄，使樣品與試劑發生反應，然后測量發生反應后溶液色澤的數值，最終通過 對測量的數值進行處理而獲得檢測結果。所述的測定抗SmDl抗體IgG的方法，是將待測樣品中的待測抗SmDl抗體IgG與 高度純化的SmDl抗原進行反應而形成第一免疫絡合物，該第一免疫絡合物與酶標記的第 二抗體進行反應形成第二免疫絡合物，將反應形成的第二絡合物與顯色底物進行顯色對比 分析，從而獲得待測抗SmDl抗體IgG的含量。所述的測定抗SmDl抗體IgG的方法，其中，所述的第二抗體為辣根過氧化物酶標 記的抗人IgG抗體。本發明申請還提供一種測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置，設有8個孔位的基體、 位于基體一端的手柄，以及用于酶聯免疫法檢測抗SmDl抗體IgG的分析試劑裝置以及相應 數量的配套試劑校準品、質控物和緩沖洗滌液的組份。所述的測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置，其中，所述基體一端的手柄上粘貼有檢 測試劑條形碼的標帖，所述條形碼的數值包含每項檢測所對應的檢測項目代碼、檢測試劑 生產批號、試劑有效期、定性校正值/定量測定標準曲線參數、酶聯免疫反應類型、試劑及 分析裝置的序列號的信息。所述的測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置中，所述孔位包括一個反應孔、一個樣品 孔、一個稀釋孔和五個試劑孔，其中，1)樣品孔盛容待測溶液；2)稀釋孔用于樣品的稀釋；3)反應孔為平底并具有很高的光源/光路通透性，當盛裝無色/空白試劑溶液時 對可見光/紫外光/熒光的吸光度值趨近于零，孔內包被有檢測抗SmDl抗體IgG所需的高 度純化的SmDl抗原，該孔用于盛容檢測樣品和檢測試劑，并與這些樣品和試劑發生酶聯免 疫反應，是酶聯免疫反應和色澤顯示及檢測的容器；4)每一個試劑孔盛裝有酶聯免疫法檢測抗SmDl抗體IgG所需的一種試劑，加注試 劑后用密封薄膜將微孔的開放口緣進行封閉。所述的測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置，所述試劑孔內所盛裝酶聯免疫檢測所需 的試劑包括檢測抗SmDl抗體IgG之酶聯免疫反應所需的免疫反應抑制劑/中和劑/阻斷 劑/吸附劑、酶結合物溶液、顯色底物溶液、顯色終止液、反應增強劑/促進劑、樣品稀釋溶 液。所述的測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置，所述樣品孔、反應孔、稀釋孔和試劑孔剖 面形狀包括平型、V型或U型，抑或是平型、V型和U型之間的任意組合。所述的測定抗SmDl抗體IgG的方法，所述的方法包括如下的步驟1)開機打開儀器開關后，儀器會自動地進行一系列檢查，從而為儀器的正常運 行做準備；2)檢查程序的準備按要求配置好相應的溶液，包括緩沖洗滌液、清洗液、消毒 液和蒸餾水或去離子水，配制完畢裝入相應的液體罐中；3)沖洗檢查
4)預熱在開機后，儀器會啟動加熱程序，將溫度調至待檢溫度；5)與主機連機儀器通過RS232串口可以和主機相連，從而將儀器正常工作所得 結果交由集中式系統處理；6)抗SmDl抗體IgG的檢測所述的檢測又包括如下的步驟i.從有密封口的一邊打開包裝袋，取用所需數量的分析裝置，排除空氣后將袋口 封緊；ii.檢查分析裝置試劑孔中的底物，應為無色澤改變，否則應棄掉；iii.分別在每個分析裝置的樣品孔中加50 100 μ L未稀釋的樣品，每更換一個 批號的試劑，應取其中一個分析裝置及校準品進行儀器校準；iv.放置分析裝置到儀器中相應的分析裝置托盤中，按照使用說明書進行校準和 檢測；v.按照所需檢測的數量在分析裝置托盤中放入相對應數量的分析裝置，并在檢測 位置之前放入含有校準品和質控物的分析裝置，儀器可自動地識別分析裝置條碼、質控物 條碼和校準品條碼，選擇行可定位于“樣品”欄或“檢測”欄；vi.點擊開始，運行項目表，掃描各個分析裝置條碼，對質控物，校準品以及檢測樣 品進行編號；vii.運行檢測表，儀器根據條碼信息自動運行，根據條碼，儀器會選擇相應設置 好的標準曲線，程序首先檢測校準品，以此來校準儀器內預設的曲線；其次對質控物進行檢 測，如果其檢測結果在標示的范圍內，則表示內置曲線合格，可用于樣品的檢測，最后開始 樣品的檢測程序；viii.稀釋加注針會從樣品孔自動吸取樣品，刺破孔位密封薄膜自動吸取稀釋 液在稀釋孔進行樣品稀釋，動作完成后，被稀釋的樣品會被加注針移至試劑孔反應一段程 序設定的時間，之后移除液體；ix.洗滌加注針會從相應的液罐中吸取一定量的洗滌液對試劑孔進行三到五次 洗滌后移除液體；χ.加注針刺破試劑孔密封薄膜吸取一定量的辣根過氧化物酶標記的抗人IgG抗 體至試劑孔進行反應，反應一段程序設定的時間后移除液體；xi.重復步驟ix洗滌；xii.加注針刺破試劑孔密封薄膜吸取一定量的酶反應底物至試劑孔進行一段程 序設定的時間反應；xiii.加注針刺破試劑孔密封薄膜吸取一定量的終止液加注至試劑孔，在10分鐘 內于450nm讀取OD值，如果選擇雙波長法測定，參考波長為620nm 690nm ；7)檢測結果當檢測程序運行完畢，點擊與主機的數據傳輸，儀器會自動將正常 工作所得結果發送到主機交由外接數據處理軟件分析，最后生成報告單以便查閱；8)關機檢測結束后，在儀器關機前，必須啟動洗滌循環，這樣可以避免來自溶液 中的殘留鹽份在液路中結晶，避免損壞儀器或導致檢測結果無效，洗滌完成后，儀器電源自 動關閉。所述的分析試劑裝置是一種測定抗SmDl抗體IgG的獨立的、單人份的、一次性使 用的專用于特定分析儀器的酶聯免疫分析試劑裝置。
本發明申請所述的用于抗SmDl抗體IgG酶聯免疫的檢測方法和配套試劑，其中實 現抗SmDl抗體IgG免疫檢測的分析試劑裝置，是一種獨立的、單人份的、一次性使用的專用 于特定分析儀器的酶聯免疫檢測試劑裝置。本發明申請所述測定抗SmDl抗體IgG的方法及裝置，繼承了其他檢測方法所具有 的特異性強、靈敏度高，準確性好、成本較低、使用要求不高、操作較為簡便、獲得檢測結果 時間短、應用廣泛等特點，解決了其他檢測方法的諸多不足，具體體現在以下幾個方面1.這種檢測方法，它運用酶聯免疫分析原理，利用特定的分析儀器，采用配套專用 的檢測試劑盒及分析試劑裝置，自動實現抗SmDl抗體IgG的定性/定量測定，是一種全新 的、適用的、實用的、高效的、快速的檢測抗SmDl抗體IgG的方案；2.它是一種獨立的、單人份的檢測試劑及分析裝置，無需像通用ELISA法那樣使 用12X8型、8X 12型或整板型96孔專用酶聯免疫微孔板作為抗原抑或抗體包被用品和反 應容器，在使用時只要有一份樣品即可進行對應項目的檢測而無試劑的浪費。如果樣品的 數量超過一份，按實際樣品數使用該試劑及分析裝置即可；3.無論是定性檢測還是定量檢測，它將每一檢測必須的試劑盛裝在一個分析試劑 裝置的試劑孔位內，而無須將檢測試劑分別用不同的試劑瓶來盛裝，不但操作極為簡便，而 且不容易造成操作差錯，從而保證檢測結果的正確性；4.它對每一個分析試劑裝置都有一個專用條形碼，條形碼的數值包含檢測所對應 的檢測項目代碼、檢測試劑生產批號、試劑有效期、定量測定標準曲線參數、具體的酶聯免 疫反應類型、試劑及分析裝置的序列號等信息，不能隨意被改變，使用時嚴格受控，尤其是 在使用超過有效期檢測試劑時，將被識別并阻止發出檢測報告，從而可以確保檢測的準確 性；5.它將每一檢測試劑進行有效分隔和密封，不會引起各種試劑之間的交叉污染而 影響檢測結果；6.它是一種專用于特定分析儀器的分析試劑裝置，在檢測過程中用全自動的精密 加液器來加注檢測試劑或樣品，操作自動化，加量精確，檢測結果的準確度和精密度高；7.在檢測項目成套試劑的數量配置及使用上，一切按實際使用需要來進行配備即 可，尤其是在對多項目檢測上，配備更為適量，不會出現超配置及使用情況；


圖1是本發明申請所述測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置的一個實施例的剖面結 構示意圖；圖2是本發明申請所述測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置的一個實施例的平面俯 視圖；圖3是本發明申請所述測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置的另一個實施例的剖面 結構示意圖；圖4是本發明申請所述測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置的另一個實施例的平面 俯視圖；圖5和圖6是本發明申請所述測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置的其它實施例的剖 面結構示意圖；其中，1為樣品孔、2、3、4、5、6為試劑孔、7為反應孔、8為稀釋孔、9為手柄、10為密封薄膜、11為基體、90為標貼。
具體實施例方式以下結合具體的檢測裝置與實施步驟對本發明申請所述的檢測方法和試劑裝置 進行進一步的描述，目的是為了公眾更好的理解本發明申請所述的技術方案，而不是對所 述技術方案的限制。事實上，在本發明精神實質內，對所述方法步驟的改進，以及對相應試 劑裝置結構的增減、替換和改進都在本發明申請所要求保護的技術方案之內。實施例1檢測抗SmDl抗體IgG的間接酶聯免疫檢測方法和試劑盒及試劑裝置本發明是基于酶聯免疫檢測技術上的一種更加簡單、準確、有效的一套方法，其采 用的基本原理為間接酶聯免疫法。將由高度純化的SmDl抗原吸附于固相上，通過孵育使稀 釋的人血清中的特異性抗體與抗原結合，洗滌去除未與固相結合的抗體，加入用辣根過氧 化物酶標記的抗人免疫球蛋白酶聯物，孵育。去除未結合的酶聯物，加入酶色原底物。產生 的顏色與檢測樣本中的特異性抗體濃度成正比。這種方法主要是通過用于酶聯免疫檢測的 分析試劑裝置和配套試劑來實現抗SmDl抗體IgG的免疫檢測。通過這種酶聯免疫方法，同 時運用特定分析儀器的分析試劑裝置和試劑，可快速，準確的做出判斷用于臨床診斷的需 要。其分析裝置具體結構如下如圖1-6所示，是本發明申請所述的一種測定抗SmDl抗體IgG酶聯免疫檢測分析 的試劑裝置，包括基體11，在所述基體11上設有1 8個孔位(1、2、3、4、5、6、7、8)，其中孔 位1是用于盛裝待測樣品的樣品孔，且其底面為“V”型凹槽底，其余孔位是反應孔7、稀釋孔 8、試劑孔0、3、4、5、6)，所述反應孔7是用于接收檢測樣品和檢測試劑并作為酶聯免疫反 應和比色的容器的反應孔，該反應孔是光源/光路的通透孔，在所述基體一端設有手柄9， 在所述手柄上粘貼有檢測抗SmDl抗體IgG試劑信息條形碼的標貼90。本實施例中，所述標 號為2、3、4、5、6是試劑孔，使用時，這些標號為2、3、4、5、6試劑孔中已盛裝有檢測所需的試 劑，且其開放口緣可為方形或圓形，其底面為“V”型凹槽底，盛裝試劑或空置后用密封薄膜 10封口，所述標號為8是稀釋孔，用于樣品的稀釋，上面沒有覆蓋密封薄膜。分析試劑裝置外的試劑盒中的其他試劑包括校準品、質控物、緩沖洗滌液、清洗 液、消毒液和蒸餾水或去離子水。實施例2試劑裝置或試劑盒的制作-間接法檢測抗SmDl抗體IgG以孔位1作為待測樣品盛裝容器，在使用時加入液體樣品，供檢測時取用；以孔位2作為空孔，用密封薄膜封口，供檢測備用；以孔位3作為試劑容器，加入樣本稀釋試劑后用密封薄膜封口，供檢測時取用；以孔位4作為試劑容器，加入終止試劑后用密封薄膜封口，供檢測時用；以孔位5作為試劑容器，加入辣根過氧化物酶標記的抗人IgG抗體試劑后用密封 薄膜封口，供檢測時用；以孔位6作為試劑容器，加入酶反應底物試劑后用密封薄膜封口，供檢測時用；以孔位7作為包被物孔/反應容器/比色孔，已包被有高度純化的SmDl抗原，并 作為反應容器加注待測的液體樣品和檢測試劑及洗滌液，最后加入酶反應底物孵育后進行 吸光度測定；以孔位8作為樣品稀釋容器，供稀釋樣品時用；
在手柄9粘貼有抗SmDl抗體IgG檢測試劑及分析裝置信息的條形碼90，該條形碼 包括檢測項目代碼、檢測試劑生產批號、試劑有效期、定性校正系數/定量檢測校正系數、 酶聯免疫反應類型、試劑及分析裝置的序列號。按照上述方法制備若干分析裝置，另外制備相應的試劑，包括校準品、質控物、緩 沖洗滌液、清洗液、消毒液和蒸餾水或去離子水等。這樣即構成了完整的抗SmDl抗體IgG 測定試劑盒組分。將檢測抗SmDl抗體IgG的試劑裝置及配套使用組份裝入試劑盒的外包 裝盒，即制成檢測抗SmDl抗體IgG試劑盒。實施例3通過全自動分析儀實現對樣本抗SmDl抗體IgG檢測的分析操作流程全自動分析儀包括一個分析裝置托盤，它是與分析裝置的形狀相配套的，一共有 30個位置可供分析裝置放置，用于檢測分析。此外還包括模塊式集成機械電子結構，可實現 自動化的加樣，稀釋，孵育，洗滌以及讀數過程。每個位置獨立定量分析，且有200余個電子 傳感器監控儀器運行，保證結果的準確性。儀器運行后，分析裝置托盤會自行轉動到不同的 位置進行加樣，稀釋，孵育，洗滌以及讀數的步驟。(1)開機打開儀器開關后，儀器會自動地進行一系列檢查，從而為儀器的正常運行做準備。(2)檢查程序的準備按要求配置好相應的溶液，包括緩沖洗滌液、清洗液、消毒液和蒸餾水或去離子 水，配制完畢裝入相應的液體罐中。(3)沖洗檢查(4)預熱在開機后，儀器會啟動加熱程序，將溫度調至待檢溫度。(5)與主機連機儀器通過RS232串口可以和主機相連，從而將儀器正常工作所得結果交由集中式 系統處理。(6)抗SmDl抗體IgG的檢測1)從有密封口的一邊打開包裝袋，取用所需數量的分析裝置，排除空氣后將袋口 封緊；2)檢查分析裝置試劑孔6中的底物，應為無色澤改變，否則應棄掉；3)分別在每個分析裝置的樣品孔1中加50 100 μ L未稀釋的樣品，每更換一個 批號的試劑，應取其中一個分析裝置及校準品進行儀器校準；4)放置分析裝置到儀器中相應的分析裝置托盤中，按照使用說明書進行校準(若 有必要)和檢測；5)按照所需檢測的數量在分析裝置托盤中放入相對應數量的分析裝置，并在檢測 位置之前放入含有校準品和質控物的分析裝置，儀器可自動地識別分析裝置條碼、質控物 條碼和校準品條碼，選擇行可定位于“樣品”欄或“檢測”欄；6)點擊開始，運行項目表，掃描各個分析裝置條碼，對質控物，校準品以及檢測樣 品進行編號；7)運行檢測表，儀器根據條碼信息自動運行，根據條碼，儀器會選擇相應設置好的 標準曲線，程序首先檢測校準品，以此來校準儀器內預設的曲線；其次對質控物進行檢測，如果其檢測結果在標示的范圍內，則表示內置曲線合格，可用于樣品的檢測；最后開始樣品 的檢測程序；8)稀釋加注針會從樣品孔1自動吸取樣品，刺破孔位密封薄膜10，自動吸取稀釋 液在稀釋孔8進行樣品稀釋，動作完成后，被稀釋的樣品會被加注針移至試劑孔3反應一段 程序設定的時間，之后移除液體；9)洗滌加注針會從相應的液罐中吸取一定量的洗滌液對試劑孔3進行三到五次 洗滌后移除液體；10)加注針刺破試劑孔5密封薄膜吸取一定量的辣根過氧化物酶標記的抗人IgG 抗體至試劑孔3進行反應，反應一段程序設定的時間后移除液體；11)重復步驟9)洗滌;12)加注針刺破試劑孔6密封薄膜吸取一定量的酶反應底物至試劑孔3進行一段 程序設定的時間反應；13)加注針刺破試劑孔4密封薄膜吸取一定量的終止液加注至試劑孔3，在10分 鐘內于450nm讀取OD值，如果選擇雙波長法測定，參考波長為620nm 690nm ；(7)檢測結果當檢測程序運行完畢，點擊與主機的數據傳輸，儀器會自動將正常工作所得結果 發送到主機交由外接數據處理軟件分析，最后生成報告單以便查閱；(8)關機檢測結束后，在儀器關機前，必須啟動洗滌循環，這樣可以避免來自溶液中的殘留 鹽份在液路中結晶，避免損壞儀器或導致檢測結果無效，洗滌完成之后，儀器電源自動關 閉。實施例4患者樣品的檢測應用、結果分析以及檢測的質控采用實施例3的操作方法與程序，使用方法使用實施例2所述的試劑盒，可用于定 量測定人血清中的抗SmDl抗體IgG水平。Anti-Sm類屬于抗核抗體，1966年在一位名叫“Sm”的系統性紅斑狼瘡(SLE)患 者中發現抗 snRNPs (snRNPs，small nuclear ribonuleoproteinparticles)抗體，因此而 得名。其相應抗原由U-RNA和共同核心蛋白(S卩B，B, N，Dl, D2，D3，E，F，G蛋白組成)。 Anti-SmDl僅發現于SLE患者中，被認為是SLE的特征性抗體，已被列入SLE的診斷標準， 在SLE患者中，陽性率為20% -30%，其水平不與SLE疾病的活動性相關，亦不與SLE的任 何臨床表現相關，但是Anti-SmDl對早期、不典型的SLE或經治療緩解后SLE回顧性診斷有 很大幫助。因此我們可根據檢測的結果來進行臨床診斷，初步判斷患者患病的情況，最終確 診應結合臨床表現或其他診斷方法/指標進行綜合考慮。以下為檢測結果的分析(1)參考值(參考范圍)正常參考值0 25AU/mL ；檢測一定數量(具有統計學意義)的陰性樣本，結果的 平均值加3倍標準偏差(即I + 3SD)為正常參考值的上限。建議各實驗室根據實際情況， 建立自己的正常參考值范圍。為了方便臨床應用，我們推薦樣本值<20AU/mL陰性
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20AU/mL彡樣本值彡30AU/mL 可疑樣本值>30AU/mL陽性(2)檢測結果的解釋結果解釋樣本值> 30AU/mL時，表明抗體濃度明顯升高，應結合臨床表現或其他 診斷方法/指標確診是否患有系統性紅斑狼瘡；樣本值< 20AU/mL時，表明機體抗SmDl抗 體IgG水平無明顯上升；20AU/mL彡樣本值彡30AU/mL時，應重新檢測，若仍為可疑，2_3周 后重新采集樣本檢測。以下是將實施例3的檢測過程重復檢測陽性和陰性質控血清，檢查結果的再現
性，獲得如下的結果
權利要求
1.一種測定抗SmDl抗體IgG的方法，其特征在于所述方法是通過酶聯免疫檢測的分 析試劑裝置和配套試劑組成的試劑盒來實現的，這種分析試劑裝置包括設有8個孔位的基 體和位于基體一端的手柄，它通過專用特定分析儀器對試劑裝置各孔之間的各種特定試劑 溶液進行加注和吸棄，使樣品與試劑發生反應，然后測量發生反應后溶液色澤的數值，最終 通過對測量的數值進行處理而獲得檢測結果。
2.根據權利要求1所述的測定抗SmDl抗體IgG的方法，其特征在于所述的方法是將 待測樣品中的待測抗SmDl抗體IgG與高度純化的SmDl抗原進行反應而形成第一免疫絡合 物，該第一免疫絡合物與酶標記的第二抗體進行反應形成第二免疫絡合物，將反應形成的 第二絡合物與顯色底物進行顯色對比分析，從而獲得待測抗SmDl抗體IgG的含量。
3.根據權利要求2所述的測定抗SmDl抗體IgG的方法，其特征在于所述的第二抗體 為辣根過氧化物酶標記的抗人IgG抗體。
4.一種用于測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置，其特征在于所述的試劑裝置設有8個 孔位的基體、位于基體一端的手柄，以及用于酶聯免疫法檢測抗SmDl抗體IgG的分析試劑 裝置以及相應數量的配套試劑校準品、質控物和緩沖洗滌液的組份。
5.根據權利要求4所述的用于測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置，其特征在于所述基 體一端的手柄上粘貼有檢測試劑條形碼的標帖，所述條形碼的數值包含每項檢測所對應的 檢測項目代碼、檢測試劑生產批號、試劑有效期、定性校正值/定量測定標準曲線參數、酶 聯免疫反應類型、試劑及分析裝置的序列號的信息。
6.根據權利要求4所述的用于測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置，其特征在于所述孔 位包括一個反應孔、一個樣品孔、一個稀釋孔和五個試劑孔，其中，1)樣品孔盛容待測溶液；2)稀釋孔用于樣品的稀釋；3)反應孔為平底并具有很高的光源/光路通透性，當盛裝無色/空白試劑溶液時對可 見光/紫外光/熒光的吸光度值趨近于零，孔內包被有檢測抗SmDl抗體IgG所需的高度純 化的SmDl抗原，該孔用于盛容檢測樣品和檢測試劑，并與這些樣品和試劑發生酶聯免疫反 應，是酶聯免疫反應和色澤顯示及檢測的容器；4)每一個試劑孔盛裝有酶聯免疫法檢測抗SmDl抗體IgG所需的一種試劑，加注試劑后 用薄膜將微孔的開放口緣進行封閉。
7.根據權利要求6所述的用于測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置，其特征在于所述試 劑孔內所盛裝酶聯免疫檢測所需的試劑包括檢測抗SmDl抗體IgG之酶聯免疫反應所需的 免疫反應抑制劑/中和劑/阻斷劑/吸附劑、酶結合物溶液、顯色底物溶液、顯色終止液、反 應增強劑/促進劑、樣品稀釋溶液。
8.根據權利要求6所述的用于測定抗SmDl抗體IgG的試劑裝置，其特征在于所述樣 品孔、反應孔、稀釋孔和試劑孔剖面形狀包括平型、V型或U型，抑或是平型、V型和U型之間 的任意組合。
9.根據權利要求1所述的測定抗SmDl抗體IgG的方法，其特征在于所述的方法包括 如下的步驟1)開機打開儀器開關后，儀器會自動地進行一系列檢查，從而為儀器的正常運行做 準備；2)檢查程序的準備按要求配置好相應的溶液，包括緩沖洗滌液、清洗液、消毒液和 蒸餾水或去離子水，配制完畢裝入相應的液體罐中；3)沖洗檢查4)預熱在開機后，儀器會啟動加熱程序，將溫度調至待檢溫度；5)與主機連機儀器通過RS232串口可以和主機相連，從而將儀器正常工作所得結果 交由集中式系統處理；6)抗SmDl抗體IgG的檢測所述的檢測又包括如下的步驟i.從有密封口的一邊打開包裝袋，取用所需數量的分析裝置，排除空氣后將袋口封緊； .檢查分析裝置試劑孔中的底物，應為無色澤改變，否則應棄掉；iii.分別在每個分析裝置的樣品孔中加50 100μ L未稀釋的樣品，每更換一個批號 的試劑，應取其中一個分析裝置及校準品進行儀器校準；iv.放置分析裝置到儀器中相應的分析裝置托盤中，按照使用說明書進行校準和檢測；v.按照所需檢測的數量在分析裝置托盤中放入相對應數量的分析裝置，并在檢測位置 之前放入含有校準品和質控物的分析裝置，儀器可自動地識別分析裝置條碼、質控物條碼 和校準品條碼，選擇行可定位于“樣品”欄或“檢測”欄；vi.點擊開始，運行項目表，掃描各個分析裝置條碼，對質控物，校準品以及檢測樣品進 行編號；vii.運行檢測表，儀器根據條碼信息自動運行，根據條碼，儀器會選擇相應設置好的標 準曲線，程序首先檢測校準品，以此來校準儀器內預設的曲線；其次對質控物進行檢測，如 果其檢測結果在標示的范圍內，則表示內置曲線合格，可用于樣品的檢測，最后開始樣品的 檢測程序；viii.稀釋加注針會從樣品孔自動吸取樣品，刺破孔位密封薄膜自動吸取稀釋液在 稀釋孔進行樣品稀釋，動作完成后，被稀釋的樣品會被加注針移至試劑孔反應一段程序設 定的時間，之后移除液體；ix.洗滌加注針會從相應的液罐中吸取一定量的洗滌液對試劑孔進行三到五次洗滌 后移除液體；X.加注針刺破試劑孔密封薄膜吸取一定量的辣根過氧化物酶標記的抗人IgG抗體至 試劑孔進行反應，反應一段程序設定的時間后移除液體；xi.重復步驟ix洗滌；χ .加注針刺破試劑孔密封薄膜吸取一定量的酶反應底物至試劑孔進行一段程序設 定的時間反應；xiii.加注針刺破試劑孔密封薄膜吸取一定量的終止液加注至試劑孔，在10分鐘內于 450nm讀取OD值，如果選擇雙波長法測定，參考波長為620nm 690nm ；7)檢測結果當檢測程序運行完畢，點擊與主機的數據傳輸，儀器會自動將正常工作 所得結果發送到主機交由外接數據處理軟件分析，最后生成報告單以便查閱；8)關機檢測結束后，在儀器關機前，必須啟動洗滌循環，這樣可以避免來自溶液中的 殘留鹽份在液路中結晶，避免損壞儀器或導致檢測結果無效，洗滌完成后，儀器電源自動關 閉。
全文摘要
本發明提供一種基于酶聯免疫檢測的原理來實現抗SmD1抗體IgG的免疫檢測的方法及其試劑裝置，是一種獨立的、單人份的、一次性的用于酶聯免疫檢測抗SmD1抗體IgG的分析方法、試劑裝置以及配套試劑。它可以將抗SmD1抗體IgG酶聯免疫檢測所需要的多種試劑盛裝在一個分析裝置上，通過這種方法可以更方便地根據檢測項目的使用需要進行相關的免疫學檢測，為臨床應用提供了更好的依據。
文檔編號G01N33/543GK102147408SQ20101061968
公開日2011年8月10日 申請日期2010年12月31日 優先權日2010年12月31日
發明者伍堅, 何林, 潘蕎, 肖燦 申請人:深圳市亞輝龍生物科技有限公司