專利名稱：一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥注射劑的檢測方法，具體涉及一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法。
背景技術：
5-羥甲基糠醛(又名5-羥甲基-2-糠醛、羥甲基糠醛、5-羥甲基呋喃甲醛或5-羥甲基卩夫[!南甲酸)，英文名 5-hydroxymethyl-2-furfural、5-hydroxymethyl-furfural 或 5-HMF，是一種化學物質。注射劑中特別是含糖的注射劑往往含有雜質5-羥甲基糠醛。一些中藥注射劑中因含有糖類物質也可能存在雜質5-羥甲基糠醛，其原因在于中藥提取物中含量大量的糖類物質，高溫下果糖、葡萄糖及其它糖類物質均易脫水，進一步生成5-羥甲基糠醛及聚合物，可能給機體帶來過敏、刺激性。其形成過程中受多種因素的影響，在酸性條件下，加熱的時間和溫度是首要因素。不論是中藥的炮制過程還是注射液的高溫滅菌過程均能使5-HMF 的含量呈規律性變化，有時其含量的增加與滅菌溫度、時間成正比。另外，高溫狀態下，存在溶液的電解質價數越高，分解產生的5-HMF量越多ω。目前5-HMF研究主要集中在檢測牛乳、果汁、蜂蜜、酒類和藥物中5-HMF的含量，其含量的多少是反映這些物品內在質量的重要指標。有研究利用結腸致癌劑造模的45F344雄性大鼠進行實驗，結果發現，對糖進行加熱后如能產生含量為的5-HMF，就有可能引發并促進結腸小囊異常生長(ACF)m。另有研究顯示5-HMF還可產生一定程度的基因毒性，推測其機制可能為5-HMF在體內經過硫化和氯化的過程而產生的致突變作用[5]。此外，5-HMF對人體橫紋肌和內臟有毒副作用。5-HMF 由靜脈入血后會產生副作用[6]。故在中國藥典[7]、中國醫院制劑規范[8]中分別限定了葡萄糖、果糖注射液中5-HMF的含量。有關5-HMF的藥理作用一直以來存有爭議，有報道5-HMF 有一定程度的毒副作用，但近年來研究表明其還具有抗氧化、改善血液流變學等對人體有利的作用。5-HMF的檢測方法和含量測定方法的研究也較多，其在處有最大吸收。 UV-可見分光光度法[9]是較為普遍的測定方法。近年來HPLC的應用克服了 5-HMF和其他成分在同一波長處084nm)有吸收的問題，從而能夠更準確的測定其含量和控制注射液的質量。由于中藥注射液和含糖的注射劑是臨床常用的制劑，其質量的優劣直接關系到人民的身體健康，因此藥典中對其相關雜質含量作出了明確規定。如5-羥甲基糠醛(5HMF) 的含量，一直以來，生產中對5-HMF的控制或工藝上掌握不好，嚴重超標。因此控制注射劑中雜質5-羥甲基糠醛的含量是一項重要課題。
發明內容
本發明提供了一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法，該方法簡捷、快速、準確，可以適用于任何可能含有5-羥甲基糠醛的注射劑，包括注射液，注射乳劑和粉末注射劑等，例如生脈注射液、葡萄糖大輸液、注射用益氣復脈凍干制劑等，特別適合于注射用益氣復脈凍干制劑。本發明的注射劑中5-羥甲基糠醛含量測定方法，經過以下步驟(1)注射劑預處理配成樣品溶液；(2)5-羥甲基糠醛對照品溶液的配制；(3)采用高效液相色譜法對樣品和對照品進行測定；(4)計算樣品中5-羥甲基糠醛的含量。其中所述預處理包括注射劑配成溶液過大孔吸附樹脂，用醇洗脫，得到洗脫溶液，所述的大孔吸附樹脂優選聚苯乙烯類樹脂，更優選ftOElu^SPE、Cleanert SPE, Strata -X或AB_8樹脂。所述醇選自乙醇和甲醇，優選40%甲醇。優選的預處理方法如下；取注射劑(若為粉末劑則用水溶解，若為液體制劑則直接上樣)，上預先處理好的大孔吸附樹脂，用少量水沖洗，棄取流出液；再以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOml量瓶中至刻度后，混勻后用0. 45um濾膜過濾，取濾液供分析用。本發明所述的方法，用高效液相色譜檢測時，對照品上樣時優選用甲醇作溶劑。本發明所述的方法，優選用兩瓶注射用益氣復脈凍干制劑作為樣品。本發明所述的方法，大孔吸附樹脂柱的參數優選為內徑6 8mm，柱高5cm，速度為 lml/mlο本發明所述的方法，其中步驟(3)對樣品和對照品進行測定時采用symmetryR，色譜柱，規格為250mm*4. 5mm ；5 μ ；檢測波長為觀4歷；柱溫為30°C ；以甲醇-水為流動相進行梯度洗脫，
權利要求
1.一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法，經過以下步驟1)注射劑預處理配成樣品溶液；2)5-羥甲基糠醛對照品溶液的配制；3)采用高效液相色譜法對樣品和對照品進行測定；4)計算樣品中5-羥甲基糠醛的含量；其中所述預處理包括過大孔吸附樹脂。
2 如權利要求1的方法，其特征在于其中所述預處理包括注射劑配成溶液過大孔吸附樹脂，用醇洗脫，得到洗脫溶液。
3.如權利要求1的方法，其特征在于所述預處理包括取注射劑配成溶液過大孔吸附樹月旨，用水沖洗，棄取流出液；再以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOml量瓶中至刻度后，混勻后用 0. 45um濾膜過濾，取濾液供分析用。
4.如權利要求3的方法，其特征在于所述甲醇為40%甲醇。
5.如權利要求1的方法，其特征在于所述的大孔吸附樹脂是聚苯乙烯類樹脂，選自 ProElut SPE、Cleanert SPE、Strata -X 或 AB-8 樹脂。
6.如權利要求1的方法，其特征在于步驟(2)對照品溶液的配制采用甲醇作溶劑。
7.如權利要求1的方法，其特征在于所述的注射劑是任何含有5-羥甲基糠醛的注射齊 ，包括注射液，注射乳劑和粉末注射劑。
8.如權利要求7的方法，其中所述的注射劑選自生脈注射液、葡萄糖大輸液或注射用益氣復脈凍干制劑，其預處理方法如下取注射劑，用水溶解，過大孔吸附樹脂，用少量水沖洗，棄取流出液；再以40%甲醇洗脫，洗脫液收集于IOml量瓶中至刻度后，混勻后用0. 45um 濾膜過濾，取濾液供測定用。
9.如權利要求8的方法，其特征在于其中所述的大孔吸附樹脂是AB-8樹脂，樹脂柱內徑6 8mm，柱高5cm，速度為lml/ml，測定時采用symmetryR，色譜柱，規格為250mm*4. 5mm ； 5μ ；檢測波長為284nm;柱溫為30°C ；以甲醇-水為流動相進行以下梯度洗脫，時間，分鐘流量水甲醇
10.如權利要求1的方法，其特征在于，測定注射用益氣復脈凍干制劑中5-羥甲基糠醛的含量采用以下步驟，(1)儀器WatersAlliance高效液相色譜儀，包括洸95 Separations Module四元泵、 在線真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱，Waters四96 二極管陣列檢測器，Empower 2色譜工作站；(2)色譜條件色譜柱為Water's sysmmetryE(4. 5mmX250mm, 5um)柱，柱溫30°C；流動相為甲醇-水， 流速1. Oml/min，檢測波長284nm，進樣量為10 μ 1 ；
全文摘要
本發明涉及一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法，該方法經過以下步驟1)注射劑預處理配成樣品溶液；2)5-羥甲基糠醛對照品溶液的配制；3)采用高效液相色譜法對樣品和對照品進行測定；4)計算樣品中5-羥甲基糠醛的含量；其中所述預處理包括過大孔吸附樹脂。
文檔編號G01N30/02GK102466658SQ201010541638
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月12日 優先權日2010年11月12日
發明者蘭淑玲, 葉正良, 周大錚, 周學謙, 楊悅武 申請人:天津天士力之驕藥業有限公司