專利名稱：用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感器的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物檢測技術領域，尤其是一種用于抗生素和心臟病標記物快速檢測
的適配子生物傳感器的制作方法。
背景技術：
適配子具有靶分子廣、特異性強、穩定等優點，可應用于生物傳感器，并且能夠解 決傳感器檢測中的一些缺點，適配子作為識別分子已成功應用于多種生物傳感器平臺，顯 示出良好的應用前景。 據檢索，目前市場沒有關于四環素、土霉素及青霉素及cTnl檢測的適配子生物傳 感器。
發明內容
本發明的目的在于克服現有技術的不足之處，提供一種制備方法簡單、使用方便
的用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感器的制作方法。 本發明的目的是通過以下技術方案實現的 —種用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感器的制作方法，制作 的步驟是 (1)電極修飾將玻碳電極洗凈后，對電極進行氧化處理，然后放入3-氨丙基三乙 氧基硅烷鹽酸溶液中硅烷化，再將電極浸入1-乙基_3- (3- 二甲基氨丙基)_碳化二亞胺和 N-羥基琥珀酰亞胺溶液中活化； (2)適配子固定將適配子滴至活化后的電極表面，在紫外光的照射下交聯，再于
烤箱中烘烤固定，然后用二次蒸餾水清洗電極，用氮氣吹干電極表面，最后用牛血清白蛋白
封閉電極表面未結合位點，再用蒸餾水清洗除去游離的牛血清白蛋白。 而且，所述電極進行氧化處理是將工作電極在pH = 6. 0PBS溶液中，于-0. 8_
+1. 8V電位范圍做循環掃描8-9圈。 而且，所述3-氨丙基三乙氧基硅烷鹽酸溶液為3-氨丙基三乙氧基硅烷hci : 水=i : 15 : io。 而且，所述適配子為四環素、土霉素及青霉素及cTnl適配子。
而且，所述固定適配子的濃度及用量分別為25ng/ii L和10ii L。
本發明的優點和積極效果是 1、本發明所涉及的適配子生物傳感器將抗生素和心臟病標記物(心肌肌鈣蛋 白I)適配子作為識別分子，固定于玻碳電極表面，對標本里的抗生素或心肌肌鈣蛋白 I(cTnI)進行特異性結合和快速檢測，所產生的電化學信號可以反應出標本溶液中抗生素 或cTnl的濃度，該生物傳感器具有特異性高、便攜、快速、穩定性好、成本低廉等優點。
2、本發明將抗生素或cTnl適配子與生物傳感器相結合，通過抗生素類適配子對抗生素的特異性結合，經過電極陽氧化、親水化、氨基化、活化一系列修飾，利用已修飾電極 表面的氨基與適配子磷酸基團共價結合形成磷酸氨基酯鍵，可供檢測水溶液及牛奶等標本 中抗生素含量，同時作了非特異性對照，增加檢測的可靠性。
圖1為本發明適配子傳感器對PBS-K3Fe(CN)6溶液中抗生素的檢測；其中a對四 環素檢測的標準曲線，b對土霉素檢測的標準曲線(檢測線性范圍1-0. lmg/L);
圖2為本發明適配子傳感器對牛奶K3Fe(CN)6溶液中四環素類的檢測；其中a對 四環素檢測的標準曲線，b對土霉素檢測的標準曲線(檢測線性范圍1-0. lmg/L)。
具體實施例方式
下面通過具體實施例對本發明作進一步詳述，以下實離例只是描述性的，不是限 定性的，不能以此限定本發明的保護范圍。 —種用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感器的制作方法，步驟 是 本實施例以抗生素及cTnl適配子為例敘述適配子生物傳感器的制備方法 (1)電極修飾將玻碳電極洗凈后，在pH = 6. 0PBS溶液中，于-0. 8—1. 8V電位
范圍做循環掃描8-9圈，對電極進行氧化處量，然后放入3-氨丙基三乙氧基硅烷鹽酸溶液
(3-氨丙基三乙氧基硅烷hci :水=i : 15 : io)中，53。c水浴3小時進行硅烷化，即在
電極表面導入_NH2，然后將電極浸入100 y L含有0. 05M 1-乙基-3- (3- 二甲基氨丙基)_碳 化二亞胺(EDC)和O. 03M N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)溶液中，50。C水浴活化90min ;
(2)適配子固定玻碳電極上固定的特異性識別分子為抗生素或cTnl適配子，先 將25ng/ ii L適配子10 ii L滴至電極表面，并在紫外光的照射下，交聯lh，再于8(TC烤箱中 烘烤30min進行固定，然后用二次蒸餾水徹底清洗電極，除去多余的未固定的適配子，再用 氮氣吹干電極表面，最后用5iiL，l^牛血清白蛋白(BSA)封閉電極表面未結合位點2h，再 用蒸餾水清洗除去游離的BSA。
該適配子生物傳感器的應用實例 1、樣品測定配不同濃度的四環素、土霉素、青霉素、cTnl溶液，每隔5分， 在-0. 1-0. 6電勢區間做循環伏安法測試，掃描速率是0. 05V/s。
2結果與討論適配子對四環素、土霉素、青霉素及cTnl檢測的響應范圍。
在選定的優化條件下，用修飾好的工作電極分別與一系列含有不同濃度(Omg/L， 0. 001mg/L， 0. 005mg/L， 0. 01mg/L， 0. 015mg/L， 0. 02mg/L， 0. 03mg/L， 0. 05mg/L， 0. 08mg/L， 0. lmg/L)的四環素/ 土霉素/青霉素/cTnl鐵氰化鉀PBS溶液或牛奶溶液反應，測定循環 伏安曲線，并做出濃度對鋒電流的標準曲線(如圖1和圖2)。標本中的四環素、土霉素、青 霉素或cTnl的濃度可用相同方法檢測，并通過標準曲線算出。
權利要求
一種用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感器的制作方法，其特征在于制作的步驟是(1)電極修飾將玻碳電極洗凈后，對電極進行氧化處理，然后放入3-氨丙基三乙氧基硅烷鹽酸溶液中硅烷化，再將電極浸入1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亞胺和N羥基琥珀酰亞胺溶液中活化；(2)適配子固定將適配子滴至活化后的電極表面，在紫外光的照射下交聯，再于烤箱中烘烤固定，然后用二次蒸餾水清洗電極，用氮氣吹干電極表面，最后用牛血清白蛋白封閉電極表面未結合位點，再用蒸餾水清洗除去游離的牛血清白蛋白。
2. 根據權利要求1所述的用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感器 的制作方法，其特征在于所述電極進行氧化處理是將工作電極在PH二 6. 0PBS溶液中，于-0. 8—1. 8V電位范圍做循環掃描8-9圈。
3. 根據權利要求1所述的用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感器 的制作方法，其特征在于所述3-氨丙基三乙氧基硅烷鹽酸溶液為3-氨丙基三乙氧基硅烷hci :水=i : 15 : io。
4. 根據權利要求i所述的用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感器的制作方法，其特征在于所述適配子為四環素、土霉素及青霉素及cTnl適配子。
5. 根據權利要求1或4所述的用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感 器的制作方法，其特征在于所述固定適配子的濃度及用量分別為25ng/yL和10i!L。
全文摘要
本發明涉及一種用于抗生素和心臟病標記物快速檢測的適配子生物傳感器的制作方法，步驟是(1)電極修飾；(2)適配子的固定。本發明所涉及的適配子生物傳感器將抗生素和心臟病標記物(心肌肌鈣蛋白I)適配子作為識別分子，固定于玻碳電極表面，對標本里的抗生素或心肌肌鈣蛋白I(cTnI)進行特異性結合和快速檢測，所產生的電化學信號可以反應出標本溶液中抗生素或cTnI的濃度，該生物傳感器具有特異性高、便攜、快速、穩定性好、成本低廉等優點。
文檔編號G01N27/48GK101738425SQ20101030006
公開日2010年6月16日 申請日期2010年1月6日 優先權日2010年1月6日
發明者吳艷, 張娟琨, 張彬彬, 范婷 申請人:天津科技大學