專利名稱：一種苯并芘快速檢測卡的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種苯并芘快速檢測卡，是一種檢測苯并芘的檢測器具，屬于食品檢 測技術領域。
背景技術：
苯并芘(3，4-Benzopyrene，benzo [a]pyrene)又稱 3，4 苯并芘，是由 5 個苯環構 成的多環芳烴，是1933年第一次由浙青中分離出來的一種致癌烴。其在常溫下為淺黃色晶 狀固體，熔點179°C，沸點312°C，難溶于水，易溶于苯、甲苯、丙酮、乙烷等有機溶劑，堿性情 況下穩定，遇酸易起化學變化，性質較為穩定，在大氣中的化學半衰期在有日光照射下少于 1天，沒有日光照射時要數天。水體表層中的3，4苯并芘在強烈照射下半衰期為幾小時至 十幾小時，土壤中3，4苯并芘的降解速度8天約為53% 82%。3,4苯并芘在環境中廣泛存 在，且與其他多環芳烴化合物的含量有一定相關性，所以3，4-苯并芘經常被視作大氣致病 物質的代表。苯并芘已公認為一種常見的高活性間接致癌物。3，4_苯并芘釋放到大氣中以后， 總是和大氣中各種類型微粒所形成的氣溶膠結合在一起，直徑8微米以下的苯并芘粒子可 吸附在塵粒中，吸入肺部的比率較高。攜帶苯并芘的塵粒經呼吸道進入肺部、肺泡甚至血 液，導致肺癌和心血管疾病。隨著城市大氣污染的增加，呼吸道癌癥發病率、肺癌死亡率顯 著增加。3，4苯并芘是一種強的環境致癌物，可誘發皮膚、肺和消化道癌癥，是環境污染主要 監測項目之一。食物中苯并芘超標，主要有幾種來源一是環境污染，在水體、土壤和作物中苯并 芘都容易殘留。苯并芘存在于煤焦油、各類炭黑和煤、石油等燃燒產生的煙氣、香煙煙霧、汽 車尾氣，以及焦化、煉油、浙青、塑料等工業污水中；二是食品加工過程，煎烤或煙熏的牛肉、 魚表面切下的焦痂物質有很強的致突變性。在煎烤如牛、豬、羊、雞、魚、蛋等動物蛋白及加 工完畢的咸肉、火腿中都能檢出苯并芘等多環芳烴類化合物。三是植物油提煉過程，反復高 溫加熱烘烤蒸炒茶餅容易產生苯并芘。農戶在加工茶餅的時候，會對茶籽反復烘烤、蒸炒， 如溫度控制不好，很容易燒焦并生成苯并芘，殘留在茶籽的外殼上。而壓榨后苯并芘就全部 殘留在茶餅中，在萃取茶餅中的殘油時，殘留的苯并芘也被大量萃取出來，通過高溫又與溶 劑油發生化學反應，最終導致浸出后毛茶油苯并芘含量不斷提高。許多國家已經規定了相應的苯并芘膳食攝入量和食品的限量標準。按照中國國家 GB2716-2005《食用植物油衛生標準》要求，在食用植物油類產品中苯并芘的安全限量為不 超過10微克/千克。因此，擬發明一種基于蛋白質抗原性的免疫學檢測方法，采取免疫學競爭法的原 理，結合膠體金標記技術和免疫層析法設計的一種快速檢測試劑，可快速特異檢測食品樣 品中的苯并芘。根據檢測卡樣品檢測帶(10)和質檢帶(11)的有無顯色來判定樣品中的苯 并芘含量。檢測卡操作簡單快速，無需特殊的儀器設備，既可以在實驗室進行，也可在超市、 家庭、車間等實地進行測定。由于樣品量需要少、測試簡便快速，適用于大量樣品的篩查。結果準確，檢測靈敏度為2微克/千克，準確率大于95%。
發明內容
本發明的目的在于提供一種能檢測苯并芘的檢測器具，應用免疫學的方法直接檢 測食用油、油炸食品樣品中苯并芘的含量。本發明的技術方案一種苯并芘快速檢測卡，在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼 (1)中設置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4);測試條(2)是由支承 背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸 水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內端與樣品墊內端各自分別與硝酸纖維素膜搭接， 在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜(7);膠體金膜為含抗 苯并芘抗體膠體金標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質控帶，依次 是含苯并芘蛋白偶聯物的檢測帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質控帶(11)，測試條置 入檢測卡外殼內，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。所述苯并芘快速檢測卡的檢測方法，應用免疫學的方法直接檢測樣品中苯并芘的 含量，檢測樣品為食用油、油炸食品樣品，對于各種不同的檢測樣品用不同的處理方法；
食用油樣品的處理方法稱取ImL食用油樣品，加入ImL樣品抽提液，在試管中攪拌均 勻，再用樣品稀釋液稀釋至2倍體積滴入加樣孔后用于檢測；
油炸食品樣品的處理方法取Ig搗碎后的油炸食品樣品，加入2mL樣品抽提液，在試管 中攪拌均勻，再用樣品稀釋液稀釋至2倍體積滴入加樣孔后用于檢測；
所述樣品抽提液為PH 7. 6、含體積分數50%的丙酮和IOmmol PBST緩沖液的混合溶
液；
所述樣品稀釋液為PH 7. 6、含IOmmol PBST緩沖液的溶液；
所述檢測帶10和質控帶11同時顯現棕紅色印跡帶，檢測結果為陰性，表示被檢測樣品 中苯并芘含量未超標；
所述檢測帶10不顯示顏色，只有質控帶11顯現棕紅色印跡，檢測結果為陽性，表 示被檢測樣品中苯并芘含量超標；
所述檢測帶10和質控帶11均不顯色，則表明測試條已失效。所述標準為樣品中苯并芘含量低于10微克/千克。本發明的優點是能檢測食用油、油炸食品等樣品中含有的苯并芘，易于制備且節 省檢測費用，使用方便，檢測快速，靈敏度高，結果準確。
圖1苯并芘快速檢測卡外殼及測試條在外殼內的安置圖。1、檢測卡外殼，2、測試 條，3、檢測窗孔，4、加樣孔。圖2測試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測帶，11、 質控帶。圖3苯并芘快速檢測卡的測試條結構示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜，7、膠 體金膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
具體實施例方式本發明結合具體實施例參見附圖進一步說明如下 實施例1
一種苯并芘快速檢測卡，它是在檢測卡外殼1中設置測試條2，檢測卡外殼1的結構及 測試條2的設置參見圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長70mm，寬20mm，厚5mm， 薄殼壁厚1mm，由工程塑料制成。檢測卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯接構成，在檢測卡外殼 1殼蓋上有檢測窗孔3和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1的殼座內。測試條2是多層結構的窄條薄片，片長約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測試 條2是多層結構底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm,長60mm，寬4mm ；支 承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm,長20_25mm，寬4mm。硝酸 纖維素膜6上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢測 帶10，含苯并芘蛋白偶聯物；另一條是質孔帶11，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板5—端 部上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8 ；吸水膜9內端與樣品墊 8內端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者 之間夾置粘貼一段膠體金膜7，膠體金膜7是含抗苯并芘單克隆抗體或多克隆抗體膠體金 標記物的玻璃纖維膜。膠體金膜7厚0. 5-0. 8mm,長5_，寬4_。樣品墊8厚0. 5-0. 8mm, 長20_，寬4_。吸水膜9厚0. 5-0. 8mm,長16-20_，寬4_。膠體金膜7、樣品墊8及吸水 膜9與硝酸纖維素膜搭接長度為l_2mm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃 纖維膜。本發明苯并芘檢測卡用于檢測食用油和油炸食品等樣品中的苯并芘的檢測。實施例2
樣品的處理方法是
針對食用油樣品的處理方法是稱取ImL食用油樣品，加入ImL樣品抽提液(pH 7.6、 含體積分數50%丙酮和lOmmolPBST的混合溶液)，在試管中攪拌均勻，再用樣品稀釋液 (pH7. 6、含lOmmolPBST的溶液)稀釋至2倍體積后用于檢測；
針對油炸食品樣品的處理方法是取Ig搗碎后的油炸食品樣品，加入2mL樣品抽提液 CpH 7. 6、含體積分數50%丙酮和lOmmolPBST的混合溶液)，在試管中攪拌均勻，再用樣品稀 釋液(pH7. 6、含lOmmolPBST的溶液)稀釋至2倍體積后用于檢測；
使用苯并芘快速檢測卡進行檢測時，先將待檢測的樣品液從加樣孔4中滴注入苯并芘 快速檢測卡測試條2的樣品墊8上，由于虹吸作用原理，帶動待檢測的樣品液及膠體金膜7 所含的抗苯并芘單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標記物一起向硝酸纖維素膜6擴散，5-10 分鐘后觀察結果。檢測卡的主要反應是免疫學的抗原和抗體反應，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金 標記的抗體，在測試帶上分別與含苯并芘，以及在質控帶上與抗兔抗體或抗鼠抗體反應，形 成棕紅色條帶。若樣品中有待檢苯并芘存在超標，當樣品加入后即與抗體發生反應，而不會 與檢測帶所含的苯并芘反應，從而檢測帶不顯色。主要反應的結果有以下3種情況
1、當顯示檢測帶10和質控帶11同時顯現棕紅色印跡帶，表示檢測結果為陰性，說明被 檢測樣品中苯并芘含量未超標(< 10微克/千克)。
5
2、當檢測帶10不顯示顏色，只有質控帶11顯現棕紅色印跡，檢測結果為陽性，說 明被檢測樣品中苯并芘含量超標10微克/千克)。3、當檢測帶10和質控帶12均不顯色，則表明檢測試條已失效。
權利要求
一種苯并芘快速檢測卡，其特征在于在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼(1)中設置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4)；測試條(2)是由支承背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內端與樣品墊內端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜(7)；膠體金膜為含抗苯并芘抗體膠體金標記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測帶和一條質控帶，依次是含苯并芘蛋白偶聯物的檢測帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質控帶(11)，測試條置入檢測卡外殼內，樣品墊正對加樣孔，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔。
2.權利要求1所述苯并芘快速檢測卡的檢測方法，其特征在于應用免疫學的方法直 接檢測樣品中苯并芘的含量，檢測樣品為食用油、油炸食品樣品，對于各種不同的檢測樣品 用不同的處理方法；食用油樣品的處理方法稱取ImL食用油樣品，加入ImL樣品抽提液，在試管中攪拌均 勻，再用樣品稀釋液稀釋至2倍體積滴入加樣孔后用于檢測；油炸食品樣品的處理方法取Ig搗碎后的油炸食品樣品，加入2mL樣品抽提液，在試管 中攪拌均勻，再用樣品稀釋液稀釋至2倍體積滴入加樣孔后用于檢測；所述樣品抽提液為PH 7. 6、含體積分數50%的丙酮和IOmmol PBST緩沖液的混合溶液；所述樣品稀釋液為PH 7. 6、含IOmmol PBST緩沖液的溶液；所述檢測帶10和質控帶11同時顯現棕紅色印跡帶，檢測結果為陰性，表示被檢測樣品 中苯并芘含量未超標；所述檢測帶10不顯示顏色，只有質控帶11顯現棕紅色印跡，檢測結果為陽性，表示被 檢測樣品中苯并芘含量超標；所述檢測帶10和質控帶11均不顯色，則表明測試條已失效； 所述標準為樣品中苯并芘含量低于10微克/千克。
全文摘要
一種苯并芘快速檢測卡，屬于食品檢測技術領域。本發明苯并芘快速檢測卡外殼內有測試條，由測試條支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗苯并芘抗體膠體金標記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條顯示印跡帶，一條為含苯并芘蛋白偶聯物的檢測帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質控帶。本發明優點是應用免疫學的方法直接檢測食用油、油炸食品等標本中苯并芘的含量。本發明苯并芘快速檢測卡易于制備，使用方便快速，結果準確。
文檔編號G01N33/558GK101957374SQ201010284519
公開日2011年1月26日 申請日期2010年9月17日 優先權日2010年9月17日
發明者周堅 申請人:無錫安迪生物工程有限公司