專利名稱：壯觀霉素的毛細管電泳-電致化學發光檢測方法
技術領域：
本發明屬于壯觀霉素的檢測方法，尤其涉及一種壯觀霉素的毛細管電泳-電致化 學發光檢測方法。
背景技術：
壯觀霉素(spectinomycin)屬于氨基糖苷類的抗菌素，主要用于治療淋病，特異 性很強，副作用少，可用于治療孕婦、兒童淋病。此外，壯觀霉素對革蘭氏陰性菌、陽性菌均 有較好的作用，其作用機理為抑制細菌內蛋白質合成。本品口服不吸收，肌注吸收較完全，1 次肌注2g后，平均100mg/L的血藥峰濃度于給藥后Ih到達，8h后仍可測得15mg/L。本品 主要經腎排泄，48h內尿中以原形排出70% 80%，尿藥濃度可高達1000mg/L以上。該藥 不與血漿蛋白結合。此外，壯觀霉素作為獸藥的應用也很廣泛，在動物性產品如牛奶、肝臟 中常有殘留。因此，壯觀霉素的檢測有重要意義。最近多用液相色譜和質譜或熒光聯用檢測壯觀霉素，質譜檢測儀靈敏度高、選擇 性強，但所用儀器昂貴，分析成本高。而熒光法則需要對壯觀霉素進行衍生，不僅操作麻煩， 而且加入衍生劑勢必會引入其它雜質干擾測定。
發明內容
發明目的本發明的目的是利用毛細管電泳分離_電致化學發光檢測技術而建立 的生物樣品中壯觀霉素的檢測方法，該方法簡單、經濟、準確性好。技術方案壯觀霉素的毛細管電泳-電致化學發光檢測方法，檢測步驟為樣品 前處理取血液或尿液，向其加入高氯酸溶液，5000 15000轉/分鐘離心，取上清液經 0. 45 μ m的濾膜過濾，待用；毛細管電泳分離將經過前處理的生物樣品用高壓進樣5 10s，用pH5. 0 11. 0的緩沖液做分離介質，在8 20KV高壓下進行分離；電致化學發光檢 測經毛細管電泳分離出來的目標組分流入電致化學發光檢測池被檢測；選用的檢測體系 是經典的三聯吡啶釕檢測體系，體系中含2 SmM的釕溶液，pH調節至7. 0 9. 0，采用三 電極系統，鉬絲為對電極，銀-氯化銀電極做參比電極，500-μπι的鉬圓盤電極做工作電極； 目標組分與干擾組分可完全分離，用內標法即可對生物樣品中的壯觀霉素定量檢測。所述 分離介質為50mM磷酸鹽緩沖液。所述進樣電壓為10KV。有益效果本方法可用于生物樣品中壯觀霉素的檢測。不需要液相色譜儀，不使用 有機溶劑，樣品用量少(約5nL)；檢測方法用電化學發光法，與傳統的紫外或熒光法相比， 不需要衍生，操作簡單，成本低廉，易在各基層單位推廣。
四
圖1是血液中壯觀霉素的毛細管電泳分離_電致化學發光檢測圖譜。1空白 2血液a:內標b:壯觀霉素 c:雜質；圖2是尿液中壯觀霉素的毛細管電泳分離_電致化學發光檢測圖譜。
1空白2尿液a:內標b:壯觀霉素c，d:雜質
五具體實施例方式實施例11試劑和儀器壯觀霉素標準品；生物樣品；烘箱；毛細管電泳儀；電致化學發光儀。2 方法1)樣品的前處理取約0. 5mL左右的血液或尿液，加入同體積0. 2g/mL左右的高氯酸溶液，高速 (5000 15000轉/分鐘)離心，取上清液經0. 45 μ m的濾膜過濾，待用。2)毛細管電泳分離技術經過前處理得到的血液或尿液中會有干擾物，必須經過分離才能被準確檢測。在 IOKV的高壓下電動進樣10s，用50mM磷酸鹽緩沖液做分離介質(堿性環境，不同生物樣品， PH要求稍有不同)，在15KV的高壓下進行分離，目標組分約在10分鐘時出峰。3)電致化學發光檢測條件選用的檢測體系是經典的三聯吡啶釕檢測體系，體系中含5mM的釕溶液，pH = 8. 0 的磷酸鹽緩沖液。采用三電極系統，鉬絲為對電極，銀-氯化銀電極(3. OM NaCl)做參比電 極，500-μ m的鉬圓盤電極做工作電極。工作電極和毛細管的出口距離約為70士5 μ m，保證 檢測組分從毛細管流出后直接接觸工作電極。一要防止兩者距離太近，毛細管出口被工作 電極堵嚴，組分難以流出；二要防止兩者距離太遠，組分難以直接流至工作電極。光電倍增 管高壓為600V ；檢測電位是1. 13V。當組分從毛細管流出至工作電極后即可在氧化電位下 與體系中的三聯吡啶釕發生電致化學發光反應，產生光信號，被光電倍增管檢測，同時在電 泳圖上出峰。4)定量選用恒定濃度的三甲胺作內標，加至含有不同標準濃度壯觀霉素的空白血樣中， 依次進樣檢測。以壯觀霉素濃度為橫坐標，壯觀霉素與三甲胺峰高比為縱坐標做工作曲線。 在待檢測樣品中加入同樣濃度的三甲胺作內標，根據目標峰與三甲胺的峰高比即可通過工 作曲線求出目標組分的含量。實施例2壯觀霉素的毛細管電泳_電致化學發光檢測方法，檢測步驟為樣品前處理取約 0. 5mL左右的血液或尿液，加入同體積0. 2g/mL左右的高氯酸溶液，高速(5000 15000轉 /分鐘)離心，取上清液經0. 45μπι的濾膜過濾，待用；毛細管電泳分離將經過前處理的生 物樣品用IOKV高壓進樣5 10s，用pH5. 0 11. 0的緩沖液做分離介質(50mM磷酸鹽緩沖 液)，在8 20KV高壓下進行分離；電致化學發光檢測經毛細管電泳分離出來的目標組分 流入電致化學發光檢測池被檢測；選用的檢測體系是經典的三聯吡啶釕檢測體系，體系中 含2 8mM的釕溶液，pH調節至7. 0 9. 0，采用三電極系統，鉬絲為對電極，銀-氯化銀電 極做參比電極，500-μπι的鉬圓盤電極做工作電極；目標組分與干擾組分可完全分離，用內 標法即可對生物樣品中的壯觀霉素定量檢測。
權利要求
壯觀霉素的毛細管電泳 電致化學發光檢測方法，其特征在于檢測步驟為a.樣品前處理取血液或尿液，向其加入高氯酸溶液，5000～15000轉/分鐘離心，取上清液經0.45μm的濾膜過濾，待用；b.毛細管電泳分離將經過前處理的生物樣品用高壓進樣5～10s，用pH5.0～11.0的緩沖液做分離介質，在8～20KV高壓下進行分離；c.電致化學發光檢測經毛細管電泳分離出來的目標組分流入電致化學發光檢測池被檢測；選用的檢測體系是經典的三聯吡啶釕檢測體系，體系中含2～8mM的釕溶液，pH調節至7.0～9.0，采用三電極系統，鉑絲為對電極，銀 氯化銀電極做參比電極，500 μm的鉑圓盤電極做工作電極；目標組分與干擾組分可完全分離，用內標法即可對生物樣品中的壯觀霉素定量檢測。
2.根據權利要求1所述的壯觀霉素的毛細管電泳_電致化學發光檢測方法，其特征在 于所述分離介質為50mM磷酸鹽緩沖液。
3.根據權利要求1所述的壯觀霉素的毛細管電泳_電致化學發光檢測方法，其特征在 于所述進樣電壓為10KV。
全文摘要
壯觀霉素的毛細管電泳-電致化學發光檢測方法，檢測步驟為樣品前處理；毛細管電泳分離；電致化學發光檢測。本方法可用于生物樣品中壯觀霉素的檢測。不需要液相色譜儀，不使用有機溶劑，樣品用量少(約5nL)；檢測方法用電化學發光法，與傳統的紫外或熒光法相比，不需要衍生，操作簡單，成本低廉，易在各基層單位推廣。
文檔編號G01N27/447GK101949885SQ201010252818
公開日2011年1月19日 申請日期2010年8月12日 優先權日2010年8月12日
發明者衛偉, 康學軍, 鄧慧華, 陸祖宏 申請人:東南大學