專利名稱：羥丙基-β-環糊精的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及利用高效液相色譜法對羥丙基-β -環糊精進行質量控制的方法，即測定雜質β-環糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的方法。
背景技術：
羥丙基-β -環糊精(HP- β -⑶)是目前備受矚目的β _環糊精(β -⑶)衍生物之一，其水溶性高、腎毒性低，不參與生物體內代謝，也不蓄積，基本上沒有溶血性和刺激性。 ΗΡ-β -CD可以增加難溶性藥物的水溶性、增加藥物穩定性和生物利用度、促進藥物釋放、降低藥物毒副作用等。在藥物研究領域具有廣泛應用。對于ΗΡ-β -CD，目前廣泛采用的合成方法是利用β -CD與環氧丙烷反應，產物中的雜質主要是殘留的β _⑶和副產物1，2-丙二醇。歐洲藥典第6版第1版增補版(ΕΡ6. 1)和美國藥典/國家處方集(USP32-NF27) 記載的HP- β -⑶的質量控制方法，采用長度300mm，直徑3. 9mm的苯基硅烷鍵合硅膠柱，流動相為水，示差折光檢測器檢測。該色譜柱作為一種專用色譜柱，價格昂貴，售價約為5500 元。在35°C條件下以純水作流動相，在1.5mL/min的流速下，色譜柱的柱效降低較快。柱效過低則無法實現對各組分的有效分離和檢測，造成色譜柱壽命縮短，檢測成本升高。馬學琴等對歐洲藥典的方法進行了改進，采用普通的苯基柱(長度250mm，直徑 4.6mm)，以甲醇-水(1 10)作流動相，示差折光檢測器(馬學琴等，羥丙基-β -環糊精的雜質檢測，中國醫藥工業雜志，2006，37(1) :36-38)。由該文獻第37頁的
圖1可以看到， β -CD與1，2-丙二醇的色譜峰的峰型對稱性較差，1，2-丙二醇與前面雜質峰不能達到有效分離，且不能同時檢測⑶與1，2-丙二醇之間的未知雜質。上述兩種色譜方法，檢測了 ΗΡ-β-⑶中的兩種主要雜質，而在經過合成得到的 HP-β-CD中，還含有其他雜質，ΕΡ6. 1和馬學琴的方法均未明確其是何物質，ΕΡ6. 1僅僅是將總雜質的含量限定為1.0%。藥物中雜質的存在會影響藥品穩定性，增加毒副作用，對人體健康產生不利影響。 對于廣泛應用于制藥領域的HP-β -CD，對未知雜質的定性有利于更好的控制ΗΡ-β -CD的質量，從而保證在其應用于藥品中后獲得更加安全有效的產品。
發明內容
本發明的目的是提供一種簡便快捷、專屬性好、靈敏度高的HP-β -CD的質量控制方法。采用苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱，以乙腈/水為流動相，檢測器為示差折光檢測器或蒸發光散射檢測器。當采用示差折光檢測器時(稱為方法一)，可以同時檢測3種雜質 β -⑶、1，2-丙二醇和1，2_丙二醇聚合物，實現了 3種雜質與HP-β -⑶的有效分離和雜質的同時定量檢測。現有技術沒有關于1，2-丙二醇聚合物檢測方法的任何報道；采用蒸發光散射檢測器時(稱為方法二)，可以檢測β-CD。
方法一HP- β -⑶的質量控制方法，利用高效液相色譜法測定HP- β -⑶中β -⑶、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量，它包括(1)、色譜條件與系統適用性試驗用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑 (4. 6X150-250mm)；流動相乙腈-水體積比0-20 100-80，不包括0 100，優選為
2-7 98-93，更好為4 96 ；示差折光檢測器；(2)、對照品溶液的制備精密稱取β-⑶和1，2-丙二醇對照品，配成二者濃度分別在0. 06-1. 5和0. 08-2. 5mg/mL的對照品溶液，二者濃度優選為0. 1-1. 5mg/mL和 0. 1-2. 5mg/mL,更好的濃度分別為 0. 3mg/mL 和 0. 5mg/mL ；(3)、供試品溶液的制備精密稱取HP-β-⑶，配成濃度為10-300mg/mL的供試品溶液，優選為50-200mg/mL，更好為100mg/mL ；(4)、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-100 μ L，優選為 5-50 μ L，更好為各20 μ L，注入液相色譜儀，測定，按外標法以峰面積計算β -⑶、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量。柱溫20-40°C;流速0. 5-2. OmL/min ；各雜質的定性分別配置⑶對照品溶液和1，2_丙二醇對照品溶液，用來確定樣品溶液中雜質⑶和1，2_丙二醇的色譜峰的位置，分別見附圖1-3。在β-⑶和1， 2_丙二醇的峰之間還存在其他未知雜質峰。采用以下兩種方法對未知雜質進行了定性1、利用液相色譜相對保留時間定性色譜條件用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑 (4. 6 X 250mm)；柱溫30°C ；流動相乙腈-水體積比為4 96 ；流速1. OmL/min ；示差折光檢測器；分別精密吸取對樣品溶液與聚丙二醇200溶液各20μ L注入液相色譜儀。樣品中的未知雜質與聚丙二醇200溶液中部分主峰保留時間基本一致。由此確定樣品溶液得到的色譜圖中，⑶和1，2_丙二醇之間的雜質峰為1，2_丙二醇聚合物。2、利用液相色譜-質譜定性樣品中的未知雜質與聚丙二醇200溶液部分主峰保留時間基本一致，提取未知雜質峰保留時間處的質量數信息，與聚丙二醇200溶液中部分主峰的質量數信息一致。結合產品工藝特點，確定色譜圖中⑶和1，2_丙二醇之間的未知雜質峰為1，2-丙二醇聚合物。以1，2-丙二醇為對照品，按外標法以峰面積計算1，2-丙二醇聚合物的含量。以下的1-6為方法一的方法學驗證試驗，色譜條件為苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4. 6X 250mm)；柱溫30°C ；流動相乙腈-水體積比為5 95 ；流速lmL/min ；示差折光檢測器；進樣量為20 μ L。1、專屬性試驗專屬性是指指在樣品介質在其他成分(如雜質、降解產物、輔料等)可能存在下， 采用的方法能正測定出被測物的特性。由附圖5可見，樣品經強酸、強堿、強氧化劑、高溫、光照破壞試驗，各雜質峰與
3-^、1，2-丙二醇和1，2-丙二醇聚合物實現了良好的分離，可以滿足對三者進行定量檢測。2、檢測限
5
檢測限是指試樣中被測物能被檢測出的最低量。將對照品溶液稀釋，進行檢測限的測定，按3倍信噪比計算。β -CD檢測限濃度為 20 μ g/mL, 1,2-丙二醇檢測限濃度為26 μ g/mL。3、線性線性系指在設計的范圍內，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程度。取β-⑶與1，2_丙二醇適量，精密稱定，分別制成含β-^0.0505、0.2021、
0.3031,0. 5052,0. 7578,1. 5156mg/mL ；含 1，2_ 丙二醇 0. 0498,0. 2989,0. 4981,0. 7471、
1.2452,2. 4905mg/mL的溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ L注入液相色譜儀。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程，結果見表1-2。表1 β -⑶線性關系考察結果
權利要求
1.一種羥丙基- β _環糊精的質量控制方法，其特征是利用高效液相色譜法測定羥丙基-β -環糊精中β -環糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量，它包括(1)、色譜條件與系統適用性試驗用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4.6X150-250mm)； 流動相乙腈-水體積比0-20 100-80，不包括0 100，示差折光檢測器；(2)、對照品溶液的制備精密稱取β-環糊精和1，2-丙二醇對照品，配成二者濃度分別在0. 06-1. 5和0. 08-2. 5mg/ml的對照品溶液；(3)、供試品溶液的制備精密稱取羥丙基-β-環糊精，配成濃度10-300mg/ml的供試品溶液；(4)、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-100μ 1，注入液相色譜儀， 測定，按外標法以峰面積計算β-環糊精、1，2_丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量。
2.根據權利要求1所述的羥丙基環糊精的質量控制方法，其特征是(1)中流動相乙腈-水的體積比為2-7 98-93。
3.根據權利要求2所述的羥丙基_β _環糊精的質量控制方法，其特征是流動相乙腈-水的體積比為4 96。
4.根據權利要求1所述的羥丙基環糊精的質量控制方法，其特征是(2)中對照品溶液中β _環糊精、1，2丙二醇的濃度分別為0. 1-1. 5mg/ml,0. 1-2. 5mg/ml。
5.根據權利要求4所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是對照品溶液中 β -環糊精、1，2丙二醇的濃度分別為0. 3mg/ml，0. 5mg/ml。
6.根據權利要求1所述的羥丙基環糊精的質量控制方法，其特征是(3)中供試品溶液濃度為50-200mg/ml。
7.根據權利要求6所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是供試品溶液濃度為 100mg/ml。
8.根據權利要求1所述的羥丙基環糊精的質量控制方法，其特征是(4)中分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-50 μ 1注入液相色譜儀。
9.根據權利要求8所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1注入液相色譜儀。
10.一種羥丙基_ β _環糊精的質量控制方法，其特征是利用高效液相色譜法測定羥丙基-β-環糊精中β-環糊糊的含量，它包括(1)、色譜條件與系統適用性試驗用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4X150-250mm)；流動相乙腈-水體積比0-20 100-80，不包括0 100 ；蒸發光散射檢測器的漂移管的溫度為 85-120°C，氣體流量為 1. 5-3. 6L/min ；(2)、對照品溶液的制備精密稱取β-環糊精對照品，配成濃度0. 05-2. Omg/ml的對照品溶液；(3)、供試品溶液的制備精密稱取羥丙基-β-環糊精，配成濃度10-300mg/ml的供試品溶液；(4)、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-100μ1，注入液相色譜儀， 測定，按外標法以峰面積計算環糊精的含量。
11.根據權利要求10所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是(1)中流動相乙腈-水的體積比為2-7 98-93。
12.根據權利要求11所述的羥丙基環糊精的質量控制方法，其特征是流動相乙腈-水的體積比為4 96。
13.根據權利要求10所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是(1)中蒸發光散射檢測器漂移管的溫度為100-120°C。
14.根據權利要求10所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是(1)中蒸發光散射檢測器的氣體流量為2-3. 3L/min。
15.根據權利要求14所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是蒸發光散射檢測器的氣體流量為2. 8L/min。
16.根據權利要求10所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是(2)中對照品溶液中β “環糊精濃度為0. 1-1. 5mg/ml。
17.根據權利要求16所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是對照品溶液中β -環糊精濃度為0. 3mg/ml。
18.根據權利要求10所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是(3)中供試品溶液濃度為20-250mg/ml。
19.根據權利要求18所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是供試品溶液濃度為100mg/ml。
20.根據權利要求10所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是(4)中分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-50 μ 1注入液相色譜儀。
21.根據權利要求20所述的羥丙基-β-環糊精的質量控制方法，其特征是分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1注入液相色譜儀。
全文摘要
本發明提供了高效液相色譜法對羥丙基-β-環糊精進行質量控制的方法，包括對β-環糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量測定。方法簡便快捷、專屬性好、靈敏度高，不僅實現了對羥丙基-β-環糊精中的兩種主要雜質β-環糊精和1，2-丙二醇得含量測定，還明確了另一種雜質-1，2-丙二醇聚合物，實現了3種雜質與羥丙基-β-環糊精的有效分離和雜質的同時定量檢測。
文檔編號G01N30/02GK102375032SQ201010252278
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月10日 優先權日2010年8月10日
發明者宋倩男, 崔欣艷, 張素娟, 曲剛, 杜艷玲, 梁敏, 王世霞, 申東民 申請人:石藥集團中奇制藥技術(石家莊)有限公司