專利名稱：土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法
技術領域：
本發明涉及農業土壤害蟲防治領域，尤其是涉及一種土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法。
背景技術：
孢囊線蟲是世界農業生產中的重要線蟲病害種類，其中大豆孢囊線蟲、小麥禾谷孢囊線蟲、馬鈴薯金線蟲等孢囊線蟲均給世界各地的農業生產造成巨大的經濟損失，為了降低因孢囊線蟲給農產品帶來的損失，世界各國均對孢囊線蟲進行了深入的研究，對孢囊線蟲進行研究的前提是首先要將孢囊線蟲從土壤中分離出來，從土壤中直接分離線蟲孢囊是各種孢囊線蟲研究的重要技術手段。目前將線蟲孢囊直接從土壤中分離的技術手段主要有利用錐形瓶的簡易分離法和利用范韋克O^nwick)漂浮器分離法，但上述方法分離的前提是首先需要將土壤風干， 處理時間較長，而且需要使用特定容器，由于受分離容器體積的限制，分離土樣量較小，不能夠快速而大量地從土壤中直接分離線蟲孢囊。
發明內容
本發明的目的是提供一種土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，能夠縮短原有方法從土壤中獲得純凈線蟲孢囊的時間，并可增加一次性獲得純凈線蟲孢囊的數量。為實現上述目的，本發明提供了一種土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，包括步驟101，在第一容器中將破碎后的含線蟲孢囊的土壤與水按比例混合，攪拌后靜置20-40秒，將第一容器內的上清液倒入套篩上，所述套篩包括上層網篩和底篩，將第一容器內的沉淀物按上述方法連續處理2-3次后將所述上層網篩上的殘余物中的線蟲孢囊用水沖洗到所述底篩上；步驟103，將步驟101中所述底篩上的殘余物用水沖洗到第二容器中，攪拌后沉淀 1. 5-5分鐘，去除漂浮在第二容器內懸浮液表面的有機質和空、癟線蟲孢囊，然后倒掉第二容器中的上清液，按上述方法沖洗步驟101中所述底篩上的殘余物2 3次；步驟105，將所述第二容器中倒掉上清液后的沉淀物倒入套篩中，用水沖洗所述套篩的上層網篩；步驟107，將步驟105中所述套篩的底篩上的殘余物沖入漂浮液中，攪拌后靜置 1-2分鐘，將上述漂浮液中的漂浮物即線蟲孢囊倒入所述底篩上，用水沖洗干凈。因此，本發明通過采用上述從土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，能夠縮短原有方法從土壤中獲得純凈線蟲孢囊的時間，并可增加一次性獲得純凈線蟲孢囊的數量。下面通過附圖和實施例，對本發明的技術方案做進一步的詳細描述。
圖1為本發明土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法實施例的流程圖。
具體實施例方式實施例一圖1為本發明土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法實施例的流程圖，如圖1所示，包括步驟101，在第一容器中將破碎后的含線蟲孢囊的土壤與水按比例混合，所述土壤與水的比例介于1 5與1 40之間，混合溶液中主要包括線蟲孢囊、有機質及較大的土壤顆粒，充分攪拌后靜置20-40秒，由于線蟲孢囊比重比水大，因此在此步驟中我們攪拌后只靜置20-40秒，此時線蟲孢囊還沒沉淀，存在于第一容器內的上清液中，而破碎后的土壤中的較大的土壤顆粒則會沉淀，通過對靜置時間的控制，將破碎后的土壤中的較大的土壤顆粒去除，然后將第一容器內的上清液倒入套篩上，本實施例中所述套篩均包括上層網篩和底篩，不過本實施例中不同步驟中的套篩的上層網篩和底篩的目數可以不同。倒入套篩后，線蟲孢囊和部分有機質會保留在所述套篩的上層網篩和底篩上，然后將第一容器內的沉淀物按上述方法連續處理2-3次，使得土壤中的線蟲孢囊能夠全部被沖洗到套篩上，然后再沖洗所述上層網篩，將所述上層網篩上的殘余物中的線蟲孢囊全部用水沖洗到所述底篩上，通過所述上層網篩將殘余物中比線蟲孢囊大的有機質去除，通過所述底篩將殘余物中比線蟲孢囊小的有機質去除，本步驟中所述第一容器為10-70L圓筒狀容器，所述上層網篩介于20目和30目之間，所述底篩介于60目和80目之間。步驟103，將步驟101中所述底篩上的殘余物用水沖洗到第二容器中，此時殘余物中只有大小與線蟲孢囊近似的有機質，攪拌后沉淀1. 5-5分鐘，去除漂浮在第二容器內懸浮液表面的有機質和空、癟線蟲孢囊，本實施例中采用棉布擦拭去除漂浮在第二容器內懸浮液表面的有機質和空、癟線蟲孢囊，由于線蟲孢囊比重比水大，在本步驟中的沉淀時間內將會沉淀，然后倒掉第二容器中的上清液，按上述方法沖洗步驟101中所述底篩上的殘余物2 3次，使得所述底篩上的殘余物能夠完全轉移到所述第二容器中，并將殘余物中的有機質和空、癟線蟲孢囊去除，本步驟中所述第二容器為5-20L圓筒狀容器。步驟105，將所述第二容器中倒掉上清液后的沉淀物倒入套篩中，用水沖洗所述套篩的上層網篩，使得沉淀物中的線蟲孢囊完全落入所述套篩的底篩上，本步驟中所述上層網篩介于20目和30目之間，所述底篩介于60目和80目之間。步驟107，將步驟105中所述套篩的底篩上的殘余物沖入漂浮液中，攪拌后靜置 1-2分鐘，所述漂浮液可為糖液、硫酸鋅、硫酸鈉或硫酸鎂溶液中任意一種，本實施例中選用糖液，所述糖液、硫酸鋅、硫酸鈉或硫酸鎂溶液的密度介于1. 15-1. 2克/立方厘米之間，大于飽滿線蟲孢囊的比重，因此飽滿線蟲孢囊會漂浮在所述漂浮液表面，將所述漂浮液中的漂浮物即線蟲孢囊倒入底篩上，用水沖洗干凈，即可得到干凈的線蟲孢囊，本步驟中所述底篩介于60目和80目之間。因此，本實施例通過采用上述從土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，不必將含有線蟲孢囊的土壤陰干，能夠縮短原有方法從土壤中獲得純凈線蟲孢囊的時間，而且由于不受容器的限制，增加了一次性獲得純凈線蟲孢囊的數量。實施例二在任丘小麥孢囊線蟲重病田采集病土，充分破碎后在50L水中加入3kg病土，攪拌3后靜置40秒，將水容器中的上清液倒入套篩上，套篩的上層網篩為20目，底篩為80目，用同樣方法將水容器中的沉淀物連續沖洗2-3次，用水沖洗20目上層網篩上的雜物使其中的線蟲孢囊落入80目底篩上，然后倒掉20目上層網篩上的雜物。將上述步驟獲得的底篩上的殘余物沖洗到IOL水中，加水并充分攪拌，沉淀2分鐘，用棉布擦拭去除漂浮在水表面的有機質或空、癟孢囊，然后將上清液倒掉，重復沖洗 2 3次，最后將含有飽滿孢囊的沉淀物倒入套篩上，套篩的上層網篩為30目，底篩為60 目，用水沖洗30目上層網篩，使其上的線蟲孢囊均落入60目底篩上。然后配置密度為1. 19克/立方厘米的糖液，用糖液把60目底篩上的線蟲孢囊和有機質沉淀物沖洗到含2L同密度糖液的燒杯中，用玻璃棒充分攪拌，待燒杯壁邊緣出現大量孢囊時即可隨時用濕棉布輕擦燒杯壁上的線蟲孢囊，并用水將線蟲孢囊沖洗到60底篩上；最后用水將60目底篩上的線蟲孢囊沖洗干凈。將漂浮的線蟲孢囊在體式顯微鏡下檢測計數，分離獲得的小麥孢囊線蟲孢囊純凈，3kg 土壤共獲得1500個。實施例三在河北安國縣大豆地塊中采集大豆孢囊線蟲病土，在20L水中加入2kg病土，攪拌后靜置20秒，將水容器的上清液倒入套篩上，套篩的上層網篩為20目，底篩為60目，用同樣方法將桶中的沉淀物連續沖洗2-3次，用水沖洗20目上層網篩上的雜物使其中的線蟲孢囊落入60目底篩上，然后倒掉20目上層網篩。然后將上述獲得的60目底篩上的殘余物沖洗到2L燒杯中，加水并充分攪拌，沉淀 2分鐘，用棉布擦拭去除漂浮在水表面的有機質或空、癟線蟲孢囊，然后將上清液倒掉，重復沖洗2 3次，最后將含有飽滿線蟲孢囊的沉淀物倒入套篩上，套篩的上層網篩為30目，底篩為60目，用水沖洗30目上層網篩，使其上的線蟲孢囊均落入60目底篩上。配置密度為1. 17克/立方厘米的硫酸鎂溶液，用硫酸鎂液把60目底篩上的線蟲孢囊和有機質混合物沖洗到含同密度硫酸鎂溶液的2L燒杯中，用玻璃棒充分攪拌，待燒杯壁邊緣出現大量孢囊時即可隨時用濕棉布輕擦壁上的孢囊，并用水將線蟲孢囊沖洗到60 目底篩上，用水將60目底篩上的線蟲孢囊沖洗干凈。將得到的線蟲孢囊在體式顯微鏡下檢測計數，分離獲得的大豆孢囊線蟲孢囊純凈，2kg 土壤共獲得大豆孢囊線蟲孢囊2500個。實施例四 在河北保定市郊小麥地塊中采集小麥孢囊線蟲病土，在40L水中加入4kg病土，攪拌后靜置25秒，將水容器中的上清液倒入套篩上，套篩的上層網篩為20目，底篩為60目， 用同樣方法將水容器中的沉淀物連續沖洗2-3次，用水沖洗20目上層網篩上的殘余物使其中的線蟲孢囊落入60目底篩上，然后倒掉20目上層網篩上的雜物。將上述獲得的60目底篩上的殘余物沖洗到2L燒杯中，加水并充分攪拌，沉淀2分鐘，用棉布擦拭去除漂浮在水表面的有機質或空、癟線蟲孢囊，然后將上清液倒掉，重復沖洗2 3次，最后將含有飽滿線蟲孢囊的沉淀物倒入套篩上，套篩的上層網篩為20目，底篩為80目，用水沖洗20目上層網篩，使其上的線蟲孢囊均落入80目底篩上。配置密度為1. 15的硫酸鎂溶液，用硫酸鎂液把80目底篩上的線蟲孢囊和有機質混合物沖洗到含同密度硫酸鎂溶液的2L燒杯中，用玻璃棒充分攪拌，待燒杯壁邊緣出現大量線蟲孢囊時即可隨時用濕棉布輕擦壁上的線蟲孢囊，并用水將線蟲孢囊沖洗到80目底篩上，用自來水將80目底篩上的線蟲孢囊沖洗干凈。將漂浮的孢囊在體式顯微鏡下檢測計數，分離獲得的小麥孢囊線蟲孢囊純凈，4kg 土壤共獲得大豆孢囊線蟲孢囊1200個。最后應說明的是以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非對其進行限制， 盡管參照較佳實施例對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解其依然可以對本發明的技術方案進行修改或者等同替換，而這些修改或者等同替換亦不能使修改后的技術方案脫離本發明技術方案的精神和范圍。
權利要求
1.一種土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，其特征在于，包括步驟101，在第一容器中將破碎后的含線蟲孢囊的土壤與水按比例混合，攪拌后靜置 20-40秒，將第一容器內的上清液倒入套篩上，所述套篩包括上層網篩和底篩，將第一容器內的沉淀物按上述方法連續處理2-3次后將所述上層網篩上的殘余物中的線蟲孢囊用水沖洗到所述底篩上；步驟103，將步驟101中所述底篩上的殘余物用水沖洗到第二容器中，攪拌后沉淀 1.5-5分鐘，去除漂浮在第二容器內懸浮液表面的有機質和空、癟線蟲孢囊，然后倒掉第二容器中的上清液，按上述方法沖洗步驟101中所述底篩上的殘余物2 3次；步驟105，將所述第二容器中倒掉上清液后的沉淀物倒入套篩中，用水沖洗所述套篩的上層網篩；步驟107，將步驟105中所述套篩的底篩上的殘余物沖入漂浮液中，攪拌后靜置1-2分鐘，將上述漂浮液中的漂浮物即線蟲孢囊倒入底篩上，用水沖洗干凈。
2.根據權利要求1所述的土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，其特征在于所述在第一容器中將破碎后的含線蟲孢囊的土壤與水按比例混合中土壤與水的比例介于15與 1 40之間。
3.根據權利要求2所述的土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，其特征在于所述步驟101 中所述第一容器為10-70L圓筒狀容器，所述上層網篩介于20目和30目之間，所述底篩介于60目和80目之間。
4.根據權利要求3所述的土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，其特征在于所述第二容器為5-20L圓筒狀容器。
5.根據權利要求4所述的土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，其特征在于所述步驟105 中所述上層網篩介于20目和30目之間，所述底篩介于60目和80目之間。
6.根據權利要求5所述的土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，其特征在于所述步驟107 中所述底篩介于60目和80目之間。
7.根據權利要求6所述的土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，其特征在于所述漂浮液為糖液、硫酸鋅、硫酸鈉或硫酸鎂溶液。
8.根據權利要求7所述的土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，其特征在于所述糖液、硫酸鋅、硫酸鈉或硫酸鎂溶液的密度介于1. 15-1. 2克/立方厘米之間。
9.根據權利要求8所述的土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，其特征在于所述去除漂浮在第二容器內懸浮液表面的有機質和空、癟孢囊具體為用棉布擦拭去除漂浮在第二容器內懸浮液表面的有機質和空、癟孢囊。
全文摘要
本發明公開了一種土壤中獲得純凈線蟲孢囊的方法，首先將破碎后的土壤與水在容器內混合攪拌后靜置，將上清液倒入套篩上，套篩包括上層網篩和底篩，將容器內沉淀物處理2-3次后沖洗上層網篩上的殘余物到底篩；然后沖洗底篩上的殘余物到另一容器中，攪拌后沉淀，去除懸浮液表面上的有機質和空、癟孢囊后倒掉容器中上清液，按上述方法沖洗底篩上的殘余物2～3次；再將容器中的沉淀物倒入套篩，沖洗上層網篩的沉淀物到底篩；最后將底篩上的殘余物沖入漂浮液中，攪拌后靜置，將漂浮液中漂浮物倒入底篩并沖洗干凈。本發明通過采用上述方法，能夠縮短原有方法從土壤中獲得純凈線蟲孢囊的時間，并可增加一次性獲得純凈線蟲孢囊的數量。
文檔編號G01N1/34GK102297792SQ20101020820
公開日2011年12月28日 申請日期2010年6月24日 優先權日2010年6月24日
發明者李秀花, 陳書龍, 馬娟 申請人:河北省農林科學院植物保護研究所