專利名稱：離子對(duì)色譜法測(cè)定酒花中α-酸和β-酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種采用離子對(duì)色譜法測(cè)定酒花中α-酸和β-酸的方法。該方法 用三乙醇胺作為離子對(duì)試劑，實(shí)現(xiàn)了在弱酸性流動(dòng)相條件下對(duì)酒花酊中3種α -酸和3種 β-酸的同時(shí)測(cè)定。
背景技術(shù)：
酒花，又名啤酒花、忽布、蛇麻花，是釀造啤酒的重要原料，賦予啤酒特有的香氣苦 味，增加啤酒的防腐能力。酒花雖然在啤酒生產(chǎn)中的添加量很少，但對(duì)其質(zhì)量影響是不可 忽視的。酒花的成分很復(fù)雜，其主要成分包括酒花樹脂、酒花精油、單寧、果膠、含氮化合物 和碳水化合物。酒花中的軟樹脂是酒花香味和苦味的主要來(lái)源，分為α-酸和β-酸兩 類。α-酸主要包括潷草酮(humulone)、合潷草酮(cohumulone)、加潷草酮(adhumulone)； β-酸主要包括蛇麻酮(Iupulone)、合蛇麻酮(colupulone)、加蛇麻酮(adlupulone)。 α-酸賦予特有的苦味、增加泡沫，β-酸的作用為輔助苦味。兩者都有防止雜菌污染的作 用。為了獲得柔和與適口的苦味，掌握酒花中α-酸和β-酸的含量是非常重要的。以前對(duì)α-酸和酸的分析多采用分光光度法和電導(dǎo)滴定法，并且只能對(duì) α_酸和酸的總量進(jìn)行測(cè)定，不能對(duì)各個(gè)化合物定量，專屬性差。近年來(lái)多采用高效液 相色譜法進(jìn)行測(cè)定。但是，目前的高效液相色譜方法為了使α-酸和β-酸在色譜柱上有 較好的保留能力，都采用較強(qiáng)酸性條件的流動(dòng)相。而酸性條件對(duì)色譜柱損害較大，且不能將 潷草酮和加潷草酮分離開。因此，需要開發(fā)一種酒花中α-酸和β-酸分析的新方法解決 這些問(wèn)題。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的正是針對(duì)以往分析酒花中α-酸和β-酸時(shí)存在的問(wèn)題而提供的一 種采用離子對(duì)色譜法測(cè)定酒花中α-酸和β-酸的方法，即用堿性的三乙醇胺作為離子對(duì) 試劑，用反相液相色譜方法在弱酸性條件下，實(shí)現(xiàn)3種α-酸和3種β-酸的同時(shí)測(cè)定。該 方法避免了強(qiáng)酸性條件對(duì)色譜柱的損害，并且對(duì)六種化合物都能獲得較好的分離效果，從 而實(shí)現(xiàn)同時(shí)測(cè)定。本發(fā)明的測(cè)定酒花中α -酸和β -酸的方法包括以下步驟a、樣品制備對(duì)于酒花酊劑，稱取一定重量酒花酊劑，用4 6倍重量比的色譜純 甲醇稀釋后，經(jīng)0. 25 μ m有機(jī)相濾膜過(guò)濾；對(duì)于酒花浸膏樣品，稱取一定重量浸膏，用380 420倍重量比的色譜純甲醇溶解，經(jīng)0. 25 μ m濾膜過(guò)濾；該方法處理簡(jiǎn)單，無(wú)需進(jìn)一步樣品 凈化步驟。b、將a步驟制備好的樣品用液相色譜_ 二極管陣列檢測(cè)器分析，分析條件如下色譜柱ZorbaxSB-C18 分析柱(250mmX4. 6mm, 5 μ m)；流動(dòng)相有機(jī)相為甲醇；水相為0. 15M三乙醇胺的水溶液，經(jīng)磷酸調(diào)pH至6. 0 ；梯度洗脫條件起始有機(jī)相比例為60% ；40分鐘后有機(jī)相比例達(dá)到80% ；50分鐘后有機(jī)相比例升高到100% ；進(jìn)樣體積10 μ L，流速為0. 8mL/min，柱溫30攝氏度。檢測(cè)波長(zhǎng)3種α -酸的檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，3種β -酸的檢測(cè)波長(zhǎng)為356nm。在上述條件中，三乙醇胺是本方法的關(guān)鍵。在PH6.0左右的酸度下，三乙醇胺結(jié)合 氫離子形成陽(yáng)離子，同時(shí)，α-酸和β-酸在該條件下，電離產(chǎn)生負(fù)離子，兩種離子形成離子 對(duì)化合物，在C18的色譜柱上得到較好的保留，從而 實(shí)現(xiàn)其分離。本方法與原有的酒花中α-酸和β-酸的分析方法相比，采用了離子對(duì)試劑，避免 了強(qiáng)酸性流動(dòng)相的使用，并且對(duì)α-酸和酸的分離效果要優(yōu)于現(xiàn)有方法，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性 和回收率很好，適用于大批量樣品的分析。
圖1酒花浸膏樣品色譜圖。圖2酒花酊樣品色譜圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明以下將通過(guò)實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明實(shí)施例1準(zhǔn)確稱取酒花浸膏樣品0. 0507克，用400倍重量比的色譜純甲醇溶解定容，將獲 得溶液經(jīng)0. 25 μ m有機(jī)相濾膜過(guò)濾除去不溶物質(zhì)，進(jìn)樣分析；液相色譜分析條件色譜柱ZorbaxSB-C18 分析柱(250mmX4. 6mm, 5 μ m)；流動(dòng)相有機(jī)相為甲醇；水相為0. 15M三乙醇胺的水溶液，經(jīng)磷酸調(diào)pH至6. 0 ；梯度洗脫條件起始有機(jī)相比例為60% ；40分鐘后有機(jī)相比例達(dá)到80% ;50分鐘 后有機(jī)相比例升高到100% ；進(jìn)樣體積10 μ L，流速為0. 8mL/min,柱溫30攝氏度；檢測(cè)波長(zhǎng)3種α -酸的檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，3種β -酸的檢測(cè)波長(zhǎng)為356nm。所得樣品譜圖如圖-1所示。實(shí)施例2取酒花酊lmL，用色譜純甲醇稀釋5倍后經(jīng)0. 25 μ m有機(jī)相濾膜過(guò)濾后，進(jìn)樣分 析；液相色譜分析條件色譜柱ZorbaxSB-C18 分析柱(250mmX4. 6mm, 5 μ m)；流動(dòng)相有機(jī)相為甲醇；水相為0. 15M三乙醇胺的水溶液，經(jīng)磷酸調(diào)pH至6. 0 ；梯度洗脫條件起始有機(jī)相比例為60% ；40分鐘后有機(jī)相比例達(dá)到80% ;50分鐘 后有機(jī)相比例升高到100% ；進(jìn)樣體積10 μ L，流速為0. 8mL/min,柱溫30攝氏度；檢測(cè)波長(zhǎng)3種α -酸的檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，3種β -酸的檢測(cè)波長(zhǎng)為356nm。樣品譜圖如圖_2所示。對(duì)同一酒花酊劑樣品進(jìn)行平行5次測(cè)定，結(jié)果表明，方法的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性很好，除含量最低的加潷草酮的RSD略大于5%外， 其它成分的RSD均小于5%。方法加標(biāo)回收率 均在93%-106%之間，說(shuō)明本方法能夠較為可靠地測(cè)定酒花樣品中的α-酸和β-酸。
權(quán)利要求
一種離子對(duì)色譜法測(cè)定酒花中α-酸和β-酸的方法，其特征在于所述方法包括以下步驟a、樣品制備對(duì)于酒花酊劑，稱取一定重量酒花酊劑，用4～6倍重量比的色譜純甲醇稀釋后，經(jīng)0.25μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾；對(duì)于酒花浸膏樣品，稱取一定重量浸膏，用380～420倍重量比的色譜純甲醇溶解，經(jīng)0.25μm濾膜過(guò)濾；b、將a步驟制備好的樣品用液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器分析，分析條件如下色譜柱Zorbax SB-C18分析柱；流動(dòng)相有機(jī)相為甲醇；水相為0.15M三乙醇胺的水溶液，經(jīng)磷酸調(diào)pH至6.0；梯度洗脫條件起始有機(jī)相比例為60％；40分鐘后有機(jī)相比例達(dá)到80％；50分鐘后有機(jī)相比例升高到100％；進(jìn)樣體積10μL，流速為0.8mL/min，柱溫30攝氏度；檢測(cè)波長(zhǎng)3種α-酸的檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm，3種β-酸的檢測(cè)波長(zhǎng)為356nm。
全文摘要
一種采用離子對(duì)色譜法測(cè)定酒花中α-酸和β-酸的方法，其特征在于所述方法包括以下步驟a、樣品制備對(duì)于酒花酊劑，稱取一定重量酒花酊劑，用4～6倍重量比的色譜純甲醇稀釋后，經(jīng)0.25μm有機(jī)相濾膜過(guò)濾；對(duì)于酒花浸膏樣品，稱取一定重量浸膏，用380～420倍重量比的用色譜純甲醇溶解，經(jīng)0.25μm濾膜過(guò)濾；b、將a步驟制備好的樣品用液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器分析。本方法與原有的酒花中α-酸和β-酸的分析方法相比，采用了離子對(duì)試劑，避免了強(qiáng)酸性流動(dòng)相的使用，并且對(duì)α-酸和β-酸的分離效果要優(yōu)于現(xiàn)有方法，實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和回收率很好，適用于大批量樣品的分析。
文檔編號(hào)G01N30/02GK101865893SQ20101020454
公開日2010年10月20日 申請(qǐng)日期2010年6月22日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月22日
發(fā)明者丁麗, 于晶晶, 張曉兵, 胡斌, 趙曉東, 郭吉兆 申請(qǐng)人:中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院