專利名稱：一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法
技術領域：
本發明涉及一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法。
背景技術：
色氨酸是人體必需氨基酸，在人體內不能自己合成，而且這些氨基酸都非常重要， 必須通過食物來攝取。色氨酸可以促進胃液及胰液的產生，從而人體對食物的消化吸收。色 氨酸可轉化生成人體大腦中的一種重要神經傳遞物質——5-羥色胺，而5-羥色胺有中和 腎上腺素與去甲腎上腺素的作用，并可改善睡眠的持續時間。當動物大腦中的5-羥色胺含 量降低時，表現出異常的行為，出現神經錯亂的幻覺以及失眠等。此外，5-羥色胺有很強的 血管收縮作用，可存在于許多組織，包括血小板和腸粘膜細胞中，受傷后的機體會通過釋放 5-羥色胺來止血。醫藥上常將色氨酸用作抗悶劑、抗痙攣劑、胃分泌調節劑、胃粘膜保護劑 和強抗昏迷劑等。
發明內容
本發明所要解決的技術問題在于，選用合適的試劑使樣品中的蛋白質水解，得到 游離的色氨酸，而常規的酸水解方法會破壞蛋白質中的色氨酸。本發明采取以下設計方 案本發明涉及的一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，包括如下步驟稱取0. 2-0. 5g試樣或脫脂后試樣(精確至0. lmg)于50mL容量瓶中，在輕輕振搖 中緩慢加入25ml 10% (m/V)氫氧化鉀溶液，使試樣濕潤且不粘壁，置于40士 1°C培養箱中 水解16 18h。取出水解液冷卻至室溫后，用水定容，播勻，取部分水解液以4000r/min轉 速離心15min，取2mL上清液置10ml具塞試管中，并將試管放入冷水盆中，加入5mL 對 二甲氨基苯甲醛硫酸溶液(l.Og對二甲氨基苯甲醛溶于lOmol/L硫酸中并定容100mL)，搖 勻。每個試樣另取2mL上清液于10ml具塞試管中，加5ml 10mol/L硫酸溶液作為樣品空白， 搖勻，室溫放置30min。然后向每支試管內加入0.2mL 0.2% (m/V)亞硝酸鈉溶液，搖勻，室 溫放置25min。以樣品空白調零，在590nm波長處1cm光徑測定樣品溶液的吸光度值，再從 標準曲線上查的樣品溶液中色氨酸的含量。本發明的優點是采用本發明的方法食品中的色氨酸含量，快速有效，RSD小于 10%，光度法的檢出限為l.giyg/mL。由此可見，本發明的方法，為檢測食品中的色氨酸含 量，提供了一種可靠的便于實施的方法，能夠滿足研究和生產中的需要。
具體實施例方式實施例食品中色氨酸含量的精密度和回收率檢測稱取0.2g試樣或脫脂后試樣(精確至0. lmg)于50mL容量瓶中，在輕輕振搖中緩 慢加入25ml 10% (m/V)氫氧化鉀溶液，使試樣濕潤且不粘壁，置于40士 1°C培養箱中水解 16 18h。取出水解液冷卻至室溫后，用水定容，播勻，取部分水解液以4000r/min轉速離心15min，取2mL上清液置10ml具塞試管中，并將試管放入冷水盆中，加入5mL 對二甲 氨基苯甲醛硫酸溶液(l.Og對二甲氨基苯甲醛溶于lOmol/L硫酸中并定容100mL)，搖勻。 每個試樣另取2mL上清液于10ml具塞試管中，加5ml lOmol/L硫酸溶液作為樣品空白，搖 勻，室溫放置30min。然后向每支試管內加入0.2mL 0.2% (m/V)亞硝酸鈉溶液，搖勻，室溫 放置25min。以樣品空白調零，在590nm波長處1cm光徑測定樣品溶液的吸光度值，再從標 準曲線上查的樣品溶液中色氨酸的含量。色氨酸標準曲線的制作配制7個不同濃度的標準溶液，色氨酸量分別為0、 20、30、40、50、60、701^，并測定此7個濃度標準溶液的吸光度。以質量(X，y g)為橫坐 標、吸光度(Y)為縱坐標作圖可得一直線，經最小二乘法計算，得到線性回歸方程為y = 0. 0091x-0. 0066，相關系數的平方為R2 = 0. 9995。在0 70 y g的線性范圍內色氨酸量與 吸光度具有良好的相關性。色氨酸標準液 試樣中色氨酸的含量按下式進行計算X =-xlOO
mxlOOO式中X-試樣中色氨酸的含量，g/100g ；m-試樣質量，mg;A-從工作曲線上查得色氨酸含量，y g ；試樣中色氨酸的含量按公式進行計算，結果如下
4 顯而易見，本領域的普通技術人員，可以用本發明的光度法對食品中色氨酸含量 進行測定。上述實施例僅供說明本發明之用，而并非是對本發明的限制，有關技術領域的普 通技術人員，在不脫離本發明范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，因此所有等同的 技術方案也應屬于本發明的范疇，本發明的專利保護范圍應由各權利要求限定。
權利要求
本發明涉及一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，其特征在于所述測定方法包括如下步驟稱取0.2-0.5g試樣或脫脂后試樣(精確至0.1mg)于50mL容量瓶中，在輕輕振搖中緩慢加入25ml 10％(m/V)氫氧化鉀溶液，使試樣濕潤且不粘壁，置于40±1℃培養箱中水解16～18h。取出水解液冷卻至室溫后，用水定容，播勻，取部分水解液以4000r/min轉速離心15min，取2mL上清液置10ml具塞試管中，并將試管放入冷水盆中，加入5mL 1％對二甲氨基苯甲醛硫酸溶液(1.0g對二甲氨基苯甲醛溶于10mol/L硫酸中并定容100mL)，搖勻。每個試樣另取2mL上清液于10ml具塞試管中，加5ml10mol/L硫酸溶液作為樣品空白，搖勻，室溫放置30min。然后向每支試管內加入0.2mL 0.2％(m/V)亞硝酸鈉溶液，搖勻，室溫放置25min。以樣品空白調零，在590nm波長處1cm光徑測定樣品溶液的吸光度值，再從標準曲線上查的樣品溶液中色氨酸的含量。試樣中色氨酸的含量按下式進行計算 <mrow><mi>X</mi><mo>=</mo><mfrac> <mrow><mi>A</mi><mo>×</mo><mn>25</mn> </mrow> <mrow><mi>m</mi><mo>×</mo><mn>1000</mn> </mrow></mfrac><mo>×</mo><mn>100</mn> </mrow>式中X—試樣中色氨酸的含量，g/100g；m—試樣質量，mg；A—從工作曲線上查得色氨酸含量，μg；
2.根據權利要求1所述的一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，其特征在于 用10% (m/V)氫氧化鉀溶液水解樣品中的蛋白質，使色氨酸游離出來。
3.根據權利要求1所述的一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，其特征在于 樣品在40士 1°C培養箱中水解時間必須達到16小時以上。
4.根據權利要求1所述的一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，其特征在于 水解液冷卻至室溫后，用水定容，取部分水解液以4000r/min轉速離心15min。
5.根據權利要求1所述的一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，其特征在于 取2mL上清液置IOmL具塞試管中，并將試管放入冷水盆中，加入5mLl %對二甲氨基苯甲醛 硫酸溶液，搖勻，室溫放置30min。
6.根據權利要求1所述的一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，其特征在于 另取2mL上清液于IOml具塞試管中，加5ml lOmol/L硫酸溶液作為樣品空白，搖勻，室溫放 置 30min。
7.根據權利要求1所述的一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，其特征在于 向每支試管內加入0. 2mL 0. 2% (m/V)亞硝酸鈉溶液，搖勻，室溫放置25min。
8.根據權利要求1所述的一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，其特征在于 以樣品空白調零，在590nm波長處Icm光徑測定樣品溶液的吸光度值。
9.根據權利要求1所述的一種光度法對食品中色氨酸含量的測定方法，其特征在于 本發明方法簡便易行，避免了昂貴的氨基酸分析儀。
全文摘要
本發明涉及一種通過光度法對食品中色氨酸的測定方法。稱取適量試樣于容量瓶中，加入氫氧化鉀溶液水解，取出冷卻至室溫后定容，取水解液離心，并置于具塞試管中冷水浴，加入對二甲氨基苯甲醛溶液；另取上清液置于具塞試管中，加硫酸溶液作為樣品空白。然后向每支試管內加入亞硝酸鈉溶液搖勻，測定其吸光值，由吸光值從標準曲線上查得樣品溶液濃度。采用本發明的方法檢測食品中的色氨酸含量，快速有效廉價，相對平均偏差小于10.0％。由此可見，本發明的方法，對于食品中色氨酸含量的檢測，提供了一種可靠的便于實施的方法，能夠滿足研究和生產中的需要，避免了昂貴的氨基酸分析儀。
文檔編號G01N21/78GK101852737SQ201010121100
公開日2010年10月6日 申請日期2010年3月10日 優先權日2010年3月10日
發明者宋薇 申請人:譜尼測試科技(北京)有限公司