利用紅細胞內含有的血紅蛋白的本征色素沉著來確定血樣的紅細胞指數的方法及設備的制作方法

專利名稱：利用紅細胞內含有的血紅蛋白的本征色素沉著來確定血樣的紅細胞指數的方法及設備的制作方法
技術領域：
本發明總的來說涉及分析血樣的設備及方法，具體地講，涉及確定樣本的紅細 胞體積以及平均細胞體積的設備及方法。
背景技術：
內科醫生、獸醫和科學家檢查人類和動物的生物流體(尤其是血液)，以確定組 分的微粒數量以及識別是否存在在健康的受試者中沒有發現的異常微粒。通常被測量、 定量和識別的微粒包括紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)和血小板。RBC分析包括確定 RBC數目、大小、體積、形狀、血紅蛋白含量和濃度、以及血細胞比容(也被稱為紅細 胞壓積)。RBC分析還可以包括確定紅細胞(諸如DNA，RNA)內是否存在某些成分和 /或確定這些成分的濃度，包括檢測RBC中是否存在和/或存在多少血液寄生蟲(例如瘧 原蟲)或者檢測WBC中是否存在和/或存在多少細胞外的或利什曼原蟲組織的睡病蟲， 以及檢測是否存在和/或存在多少其他血液寄生蟲。WBC分析可以包括確定WBC子類 型的族群(population)頻率，通常稱為分類WBC計數，以及通知任何在健康的受試者中 沒有發現的異常細胞類型。血小板(或者在包括鳥、爬行動物和魚的某些動物中為凝血 細胞(thrombocyte)，該凝血細胞在功能上類似于哺乳動物的血小板，但是比哺乳動物的 血小板大約10倍且是有核的)分析可以包括對血小板數目、大小、形狀結構和體積的確 定，包括確定樣本中是否存在血小板或凝血細胞的凝塊。在諸如Wintrobe，s Clinical Hematology第12版的醫學文獻中詳細描述的已知的
血液檢查技術通常將檢查方法分為手動、離心和阻抗型方法。用于細胞計數的手動方法 通常涉及產生精確確定的血液或流體樣本的體積，該血液或流體樣本被定量稀釋并且在 計數室中被直觀計數。手動檢查方法包括檢查其中通過目測確定微粒類型的相對量的外 周涂片。離心檢查方法涉及對樣本進行離心，使得根據組分的相對密度將樣本分成多個 組分層。可以給組分層染色，以增強可見性或檢測性。阻抗型方法涉及檢查根據被測量 的顆粒而經過處理的血液的精確體積；例如溶解RBC來計數有核細胞以及在導電流體中 體積(volumetrically)稀釋樣本。該過程通常涉及監視施加給通過窄通道的樣本的電流或 電壓，以確定當微粒以單行通過時微粒對電流/電壓的影響。其他技術涉及對通過光束 入射到以單行通過的微粒的光的強度和散射角的分析。還可以使用流式細胞測定法，該 方法涉及利用附著于針對細胞或微粒類型上存在的表面抗原決定簇的抗體的熒光基團給 懸浮中的感興趣的微粒染色、用適當波長的光激發染色微粒、以及分析各個微粒/細胞的發光(emission)。除了 外周涂片或離心分離之外，上述所有方法都要求滴涂精確的樣本體積。樣 本體積的不精確將導致相關分析中同一數量的定量誤差。除了離心方法之外，上述所有 方法還都要求樣本與一種或多種液體試劑或稀釋劑混合，并且為了獲得精確的結果還要 求對儀器進行校準。在外周涂片的情況下，需要高度訓練來正確地檢查涂片。上述的許 多方法產生大量的污染物，而處理這些污染物是昂貴的。另外，上述方法不適于確定其 中紅細胞和凝血細胞有核的鳥、爬行動物和魚中的以及其中紅細胞尺寸非常小并且可能 與血小板混淆的某些哺乳動物中的全血計數(CBC)。可以通過檢查人類或動物的血液確定的信息量是巨大的。確定RBC指數尤其有 用；例如，單個細胞大小、單個細胞血紅蛋白含量和濃度、以及樣本內的RBC的族群統 計。如上述引用的Wintrobe的文獻中的討論所表明，對于上述參數中的每種參數的平均 和離差統計(例如，變異系數)還可以提供重要信息，這已經使得外科醫生能夠對RBC 紊亂進行更好地分類。

發明內容
根據本發明，提供了一種確定RBC指數的方法，RBC指數包括單個RBC的體 積、以及血紅蛋白含量和濃度；以及RBC族群統計，包括樣本中存在的RBC的總量，和 基本上未稀釋的血液樣本內的上述每個指數的平均值。根據本發明的一方面，提供了一種方法，其包括以下步驟1)提供基本上未稀 釋的血液樣本；2)將樣本滴落在適于靜止保持樣本以進行分析的分析腔室中，該分析腔 室由第一平板的內表面和第二平板的內表面限定，其中兩個平板都是透明的，并且該腔 室的高度在兩個平板的內表面之間延伸，該高度使得樣本內的至少一個紅細胞與這兩個 內表面都接觸；3)對與內表面接觸的所述至少一個紅細胞成像；4)確定被成像的紅細胞 上與兩個內表面接觸的部分的光密度；以及5)使用所確定的與在兩個內表面之間延伸的 紅細胞的所述部分光學對準的像素的光密度值，來確定與內表面接觸的紅細胞的血紅蛋 白濃度。根據本發明的另一方面，提供了一種用于確定基本上未稀釋的血液樣本內的紅 細胞的細胞體積的方法。該方法包括以下步驟1)提供基本上未稀釋的血液樣本；2)將 該樣本滴落在適于靜止保持樣本以進行分析的分析腔室中，該腔室由第一平板的內表面 和第二平板的內表面限定，其中兩個平板都是透明的，并且該腔室的高度在兩個平板的 內表面之間延伸，該高度使得樣本內的至少一個紅細胞與兩個內表面都接觸；3)對與內 表面接觸的所述至少一個紅細胞進行成像，包括對紅細胞上與兩個內表面接觸的部分進 行成像；4)確定紅細胞上與兩個內表面接觸的部分的平均光密度；5)確定整個紅細胞的 總的光密度；以及6)使用腔室的高度、為被成像的紅細胞上與兩個內表面接觸的部分確 定的平均光密度、和為整個被成像的紅細胞確定的光密度，來確定所述至少一個紅細胞 的細胞體積。本發明的一個優點在于本發明可以用來利用極少的樣本量來確定血液樣本的特 性，該極少的樣本量可以通過毛細管穿刺從病人直接獲得，從而使得本發明對現場護理 應用更加有用，或者可以根據需要從靜脈樣本獲得該極少的樣本量。
本發明的另一個優點在于其可用于利用血紅蛋白的本征色素沉著來確定血液樣 本的特性，因此不需要添加任何染料或著色劑。血紅蛋白的高摩爾消光系數使得能夠精 確地確定其在小到幾微米的非常小的光路距離內的相對或絕對濃度。本發明的另一個優點在于可以確定一個特定細胞上的單個RBC指數，從而可以 識別指數之間的相關性。本發明的方法的另一個優點在于其對于外部和內部流體都適用，并且與重力和 方位無關，因此該方法適于用在手持式設備中和微重力條件下。本發明的方法的另一個優點在于與阻抗計數器不同，本發明的設備不需要在每 次使用時都進行校準。本發明的設備不易受諸如細胞流經阻抗型細胞計數器量孔以進行 測量時的細胞形狀、細胞方位之類的擾動，或者不易受到阻抗計數所需的稀釋液體的滲 透壓影響。通過下面提供的包括附圖的詳細描述，本發明的方法及與其有關的優點將更加 顯然。


圖1至圖4是可用在本發明的方法中的分析腔室的截面示意圖。圖5是具有多個分析腔室的條帶的示意平面圖。圖6是具有分析腔室的一次性容器的示意平面圖。圖7是具有分析腔室的一次性容器的示意截面圖。圖8是可與本發明的方法一起使用的分析設備的示意圖。圖9是圖1所示的分析腔室的一部分的放大示圖。圖10是示出根據本發明的一個方面的用于確定紅細胞內的血紅蛋白濃度和多個 紅細胞內的平均血紅蛋白濃度的方法步驟的框圖。圖11是示出根據本發明的一個方面的用于確定紅細胞的細胞體積和紅細胞族群 的平均細胞體積的方法步驟的框圖。圖12是示出根據本發明的一個方面的用于確定紅細胞的血紅蛋白含量和紅細胞 族群的平均血紅蛋白含量的方法步驟的框圖。
具體實施例方式本發明的用于分析基本上未稀釋的全血樣本的方法及設備能夠確定紅細胞 (RBC)細胞體積(CV)、平均細胞體積(MCV)、細胞血紅蛋白濃度(CHC)、平均細胞血 紅蛋白濃度(MCHC)、和平均細胞血紅蛋白含量(MCH)，以及它們的族群統計，而不需 要添加任何染料、試劑(除了一些實施例中的抗凝血劑之外)或者對樣本進行稀釋的稀釋 液。本發明的方法利用了分析腔室，該分析腔室可用于靜止地保持基本上未稀釋的 抗凝全血樣本以進行分析。該腔室的典型大小可以保持大約0.2至1.0 μ 1的樣本，但是 該腔室不限于任何特定的體積容量，該容量可以為適 應分析應用而改變。在此使用的術 語“基本上未稀釋的”表示根本未被稀釋的血液樣本或者未被故意稀釋的血液樣本，但 是為了進行分析，可以對血液樣本添加一些試劑。如果添加有試劑的話，就該試劑添加對樣本稀釋的程度來說，在臨床上這種稀釋對所進行的分析沒有顯著的影響。通常，將 在執行本發明的方法過程中使用的試劑只有抗凝血劑(例如，EDTA、肝素)，在一些實 例中為等容球狀試劑(isovolumetric sphering agent)。這些試劑通常以干粉形式來添加， 其目的是不稀釋樣本。在某些情況下(例如，非常快速的分析)，不必添加抗凝血劑，但 是在大多數情況下優選的是添加抗凝血劑以確保樣本處于分析可接受的形式。術語“靜 止”用來描述樣本被滴落在腔室內以進行分析，并且在分析過程中該樣本不會相對于腔 室故意移動；即，樣本靜止地處于腔室內。就血液樣本內存在運動的程度來說，血液樣 本的形成組分的布朗運動占主導，該運動不會破壞本發明的設備的使用。 現在參照圖1，分析腔室10由具有內表面14的第一平板12和具有內表面18的第 二平板16限定。平板12、16都是足夠透明的，以使得能夠有足以執行如下所述的光密度 分析的預定波長的光的量通過。平板12、16的至少一部分是彼此平行的，在該部分內， 內表面14和內表面18彼此間隔開高度20，使得樣本內的至少一些單個RBC 22均單獨地 接觸兩個內表面14、18，和/或樣本內的一個或多個RBC聚合體23均接觸腔室平板12、 16的內表面14、18，以及靜止樣本內的一個或多個無RBC的區域(例如，腔隙)24在所 述內表面之間延伸，如下將更詳細地說明。本發明的方法可以利用具有上述特性的各種 不同的分析腔室類型，因此不限于任何特定類型的分析腔室。具有平行的平板12、16的 分析腔室簡化了該分析，因此是優選的，但是并不是本發明所必需的；例如，可以使用 這樣一種腔室，即，該腔室的一個平板相對于另一個平板成已知的非平行角度布置。現在參照圖2至圖5，示出了一個可接受的腔室10的示例，該腔室10包括第一 平板12、第二平板16、以及至少三個布置在平板12和平板16之間的隔離物26。隔離 物26可以是可布置在平板12和平板16之間的用于將平板12和平板16彼此分隔的任何 結構。在平板12和平板16之間延伸的隔離物26的尺寸28在此被稱為隔離物26的高度 28。隔離物26的高度28通常不精確地彼此相等(例如，存在制造公差)，但是處于商業 上可接受的用于類似分析設備中的分隔裝置的公差內。球狀珠是可接受隔離物26的一個 示例，并且商業上可從例如 Bangs Laboratories of Fishers，Indiana, U.S.A.獲得。在圖3所示的腔室實施例中，隔離物26由彈性大于第一平板12和第二平板16 中的一個或者兩個的材料組成。從圖3可以看出，較大的隔離物26被壓縮到大多數隔 離物26接觸平板12、16的內表面14、18的程度，從而使得腔室高度僅僅稍微小于平 均的隔離物26的直徑。在圖4所示的腔室實施例中，隔離物26由彈性小于第一平板 12和第二平板16中的一個或兩個的材料組成。在圖4中，第一平板12由比球狀隔離 物26和第二平板16更有彈性的材料形成，并且將以帳篷式(tent-like)的方式覆蓋隔離 物26。在該實施例中，雖然腔室10的小局部區域可能偏離期望的腔室高度20，但是腔 室10的平均高度20將非常接近平均的隔離物26的直徑高度。分析顯示使用該實施例可 以將平均腔室高度20控制為小于4微米的腔室高度的上下或更好。除了受到上述的 彈性特性(以及諸如隔離物的分布密度之類的其他因素)的限制，隔離物26和平板12、 16可以由各種材料制備，只要平板12、16足夠透明。由丙烯酸(acrylic)或者聚苯乙烯 (polystyrene)組成的透明塑料薄膜是可接受的平板12、16的示例，并且由聚苯乙烯、聚 碳酸酯(polycarbonate)、硅酮(silicone)等制成的球狀珠是可接受的隔離物26。可接受 的隔離物的特定示例是由聚苯乙烯制成的球體，在商業上可以從例如Thermo Scientific ofFremont, California, U.S.A.目錄編號為4204A獲得4微米(4 μ m)直徑的這種球體。參
照圖5，垂直布置在另一個平板上方的平板12包括多個以規則的間隔布置的口 30(例如， 用作氣孔)，并且平板12和平板16在多個點處結合在一起。在一些實施例中，結合材 料32形成了可用于將樣本34橫向地包含在分析腔室10內的外腔室壁。這個可接受的分 析腔室的示例在美國專利申請公開No.2007/0243117、2007/0087442、以及2008年4月2 日提交的美國臨時專利申請No.61/041,783和2008年10月31日提交的美國臨時專利申請 No.61/110,341中詳細地進行了描述，這些文獻在此以引用方式整體并入本文。另一個可接受的腔室10的示例布置在如圖6和圖7所示的一次性容器36中。腔室10形成在第一平板12和第二平板16之間。第一平板12和第二平板16都是透明的， 以允許光穿過腔室10。第一平板12和第二平板16的至少一部分彼此平行，在該部分內， 內表面14和內表面18彼此間隔開高度20。該腔室10的實施例在美國專利No.6,723,290 中更詳地進行了描述，該專利以引用方式整體并入本文。圖2至圖7所示的分析腔室表 示可接受的用于本發明方法的腔室。然而，本發明的方法不限于這些特定實施例。可接受的腔室高度是這樣的一個高度，S卩，其中樣本內的至少一些RBC單獨地 接觸腔室平板的兩個內表面，和/或一個或多個RBC聚合體接觸腔室平板的兩個內表 面，和靜止樣本內的一個或多個無RBC區域(例如，腔隙)在所述內表面之間延伸。由 于血液樣本內的RBC 22的大小是被分析(例如人類、猴子、馬、山羊、魚、鳥等)的血 液樣本類型的函數，因此可接受的腔室高度將根據被測試對象而改變。基于典型的RBC 大小和RBC在一定程度上可以變形(例如，上述的被部分壓縮的球體)的事實，對于大 多數動物品種來說，大約2至6微米(2-6 μ m)的腔室高度對于單個RBC是可接受的。可 以分別在分別具有較大或較小腔室高度的腔室中執行其RBC基本上大于或小于人類RBC 的動物品種的血細胞比容(hematocrit)分析。另外，利用RBC聚合體的紅細胞壓積分析 的腔室高度可以由RBC聚合體的高度決定。在不利用隔離物26的那些腔室的實施例中，腔室10的高度20可以作為腔室的 制造工藝的一部分來確定并且提供給腔室。作為選擇，可以使用包括利用已知的可感覺 的著色劑量、或者利用布置在腔室內的幾何特征的各種技術來確定腔室10的高度20， 其中布置在腔室內的幾何特征可以用來確定已知領域的樣本的體積，從而確定腔室的高 度。在美國專利No.6,723,290和No.6,929,953中描述了這些技術和其他技術。然而，本 發明不限于這些技術。在一些應用中，在至少一部分樣本中摻合等容球狀試劑(例如，兩性離子去污 劑或者類似功能的試劑)，以使至少一些RBC呈現基本上為球狀的幾何形狀。自然形式 的RBC 22通常是雙凹圓盤狀38 (見圖1)，而不是球狀40。因此，沒有等容球狀試劑的 影響，很大一部分圓盤狀22將不會與兩個腔室平板12、16都接觸。增大具有基本上為 球狀的幾何形狀的RBC 22數量將會增大與兩個平板12、16都接觸的RBC 22的數量，這 其中包括被腔室平板限制的可以用其他不同方法成為球狀的一些細胞42。等容球狀試劑 (例如，通過滴落在內表面的特定部分上)可以布置在腔室10的分立區域中。在腔室10 內沒有樣本混合時，該試劑將僅與靠近該試劑的樣本部分摻合，從而留下未被球狀試劑 處理的其他樣本部分。這種有選擇地使一部分RBC 22免受等容球狀處理的步驟容許(如 下將要描述的)通過圖像分析來檢查RBC 22的定性形態以及容許將圖像呈現給內科醫生來檢查諸如其圓度、形狀和細胞上存在突起之類的特征。該等容球狀處理不會干擾任何 的RBC 22的定量分析。使用分析設備來執行對靜止地置于腔室10內的樣本的分析，該分析設備可用于 對至少一部分樣本進行成像并且對該圖像進行分析。以容許基于基本單位來確定樣本的 光密度的方式產生該圖像。術語“基本單位”或者“圖像單位”是指所定義的能夠分辨 樣本圖像的增量單位。通常被定義為在特定成像系統內能夠單獨處理的最小圖元的像素 是圖像單位的一個示例，并且圖像單位還可以包括集合單位形式的少量像素。還可以以 線性項(例如，在焦平面上每像素幾微米)來描述成像設備的放大倍數，其中線性 維度沿 著應用于圖像的正交網格的一個特定軸。在焦平面上被傳感器像素(或者其他圖像單位) 捕獲的實際樣本面積因此是成像設備所應用的放大系數的函數。因此，成像設備的放大 倍數應當已知或者應當能夠確定。與該像素有關的體積因此是每個像素的圖像的面積與 已知的腔室高度的乘積，這是因為腔室中被感測的點是RBC延伸貫穿整個腔室的點。例 如，如果放大倍數為每像素0.5微米，則占據200個像素的圖像將具有50平方微米的面 積，而體積則為50平方微米與腔室高度的乘積。現在參照圖8，適于用于本發明方法的分析設備44的示例包括樣本照明器46、 析像器48、以及可編程分析器50。樣本照明器46包括光源，并且通常包括用于控制光 的光學器件，該光源選擇性地產生整個波長范圍內的光，該波長范圍寬到足以用于進行 紅細胞壓積分析(例如，大概400-670nm ；鑒于在大約413nm和大約540nm波長時血紅 蛋白內出現的高光吸收度(這在大約413nm和大約540nm波長時的高摩爾消光系數(O 中得到反映)，因此，在確定人類血液樣本內的RBC的光密度方面，大約413nm和大約 540nm的光尤其有效)。樣本照明器46利用透光度來產生圖像。例如可以通過將光源 定位在停留于腔室10內的樣本的一側、引導光通過靜止布置在腔室平板之間的樣本、然 后使用析像器捕獲光來測量樣本的透光特性。可接受的析像器48的示例是電耦合器件 (CCD)類型的圖像傳感器，其將穿過樣本的光的圖像轉換成為電子數據形式。互補金屬 氧化物半導體(“CMOS” )類型的圖像傳感器是另一種可以使用的圖像傳感器的示例， 然而本發明不限于這些示例中的任意一個。可編程分析器50包括中央處理單元(CPU)并 且連接至樣本照明器46和析像器48。CPU適于(即，被編程為)選擇性地執行進行本 發明方法所必需的功能。應當注意，可以使用硬件、軟件、固件或者其結合來實現可編 程分析器50的功能。所屬領域的技術人員將能夠對處理單元進行編程以執行在此所述的 功能，而不需要進行過度的實驗。題目為“ApparatusforAnalyzing Biologic Fluids”且于 2005年3月15日發布的美國專利No.6,866,823公開了這種分析設備44，該美國專利內容 以引文方式整體并入本文。分析設備44適于針對被成像的樣本部分基于每個圖像單位來確定與檢測到的光 信號相關的OD值。RBC 22的OD由細胞內的血紅蛋白濃度、在給定波長的血紅蛋白的 摩爾消光系數(也被稱為摩爾吸收率)、以及傳播通過血紅蛋白的光路的距離來確定，并 且可由以下關系來表示OD = ε cL其中ε =血紅蛋白摩爾消光系數，C=血紅蛋白濃度，以及L=傳播通過RBC 22(即，細胞內的血紅蛋白)的距離。摩爾消光系數是血紅蛋白的固有特性，可以由實驗方法或者通過當前可獲得的經驗數據導出。在利用具有誤差容限的光源(例如，具有設定的額定波長加上或減去某一數量的波長的LED)的分析設備的實施例中，為了精確的目 的，初始校正設備并且確定血紅蛋白摩爾消光系數是有用的，然后該摩爾消光系數可與 該特定設備結合使用，直到該光源被替換為止，此時可以重新校準該設備。所檢測到的光信號(即，OD值)可被邊緣檢測算法(edge finding algorithm)用 來識別RBC的位置和邊界。與腔室10的兩個內表面都接觸的RBC 22的OD分布類似于 被部分壓縮的球體的OD分布。與表面14、18不接觸的細胞22的橫向邊緣的OD(相對 而言)可以認為趨近于O。所確定的OD的值如下1)在朝向RBC 22的中心的方向上行 進時(即，隨著通過細胞的光傳輸路徑增大)增大；2)在RBC與平板內表面14、18接 觸時(即，當通過RBC的光傳輸路徑恒定時)，達到最大值并且基本上保持恒定；以及 3)在遠離RBC 22的中心的方向上行進時(即，隨著通過細胞的光傳輸路徑減小)減小。 RBC的OD分布的這種表征對于球狀的RBC來說尤其一致，并且不限于與兩個內表面都 接觸的那些RBC。在一些實施例中，分析設備44還適于確定與兩個內表面都接觸的一組RBC 22 和/或RBC聚合體23的平均最大OD值。可以基于每個樣本分析來確定與所述內表面 接觸的可接受組大小的一組RBC和/或RBC聚合體的構成，或者可以針對同一類型(例 如，人類血液樣本)的“η”個樣本分析周期性地進行這種確定。例如，可以對被識別為 與兩個內表面14、18都接觸的一組RBC 22進行比較估計，以確定該組內的平均最大OD 和OD的統計偏差。希望確定平均最大0D，這是因為細胞22內的血紅蛋白的OD即使在 一個特定樣本內也會根據細胞而發生變化。如果標準偏差大于預定閾值，則可以選擇與 兩個平板12、16都接觸的新的一組RBC 22，或者可以擴大現有的組，直到上述分析建立 了這樣一組RBC 22，S卩，該組RBC 22的平均最大OD具有可接受的標準偏差。例如， 一組內的RBC 22的平均最大0D，如果大約為加上或減去該樣本內與兩個表面14、18都 接觸的所有RBC的平均最大OD的百分之一(1%)，則處于可接受的標準偏差值內。然 而，可以根據當前的應用和正在使用的特定統計分析(例如，標準誤差等)來改變可接受 的標準偏差值的構成。可以獲得與RBC 22的OD相關的現有統計數據并且可以將其用 于確定可接受的OD統計值。對一個特定組內的RBC的平均最大OD是否處于臨床上可 接受的標準偏差內的確定也是適應性的，這是由于，如上所述，公知的是個體內的RBC 族群通常在血紅蛋白濃度上的變化很小，并且可以使用該結果的連續(raiming)標準偏差 來確定在獲得可接受準確性的平均值之前必須檢查多少細胞；例如，對于來自具有正常 血液特征的對象的樣本，可接受的組大小可以僅僅為100個RBC，而來自具有異常血液 特征的對象的樣本可能需要分析1000個或更多個RBC。用于確立可接受的平均最大OD 的、與兩個內表面都接觸的特定數目的RBC 22和/或RBC聚合體23不限于樣本內的任 何具體數目或者百分比的RBC 22和/或RBC聚合體23，并且可以包括與兩個表面14、 18都接觸的所有(例如，成千上萬個)RBC 22和/或RBC聚合體23。現在參照圖9和10，分析設備44還適于通過檢查與腔室10的兩個內表面14、 18都接觸的RBC 22的一部分25來確定RBC 22的血紅蛋白濃度(“CHC” )。血紅蛋 白濃度在任何給定的RBC 22內都是一致的。基于每個像素(或者其他圖像單位)來確定 OD值。每個像素的OD信號表示可歸因于與該像素“對準”的腔室部分的高度“L”的OD信號。在確定CHC的過程中，感測0D、已知或者可以確定腔室的高度，以及已 知血紅蛋白摩爾消光系數(O。因此，使用光密度(OD)、血紅蛋白消光系數(O、以 及通過血紅蛋白的路徑長度(L)之間的關系來確定CHC，其中，對于與腔室的內表面接 觸的RBC 22的一部分25來說，通過血紅蛋白的路徑長度(L)等于腔室的高度OD = ε cL, C = OD/ ε L。使用以下步驟來確定RBC 22的平均細 胞血紅蛋白濃度(“MCHC”)使用上 述用于確定單個RBC的CHC的同樣方法，針對與腔室的兩個內表面都接觸的一些RBC 重復該方法，使用這些結果來確定平均值和可接受的標準偏差。現在參照圖9和11，分析設備44還適于通過整合(integrating)作為RBC內血紅 蛋白的OD的函數的RBC體積來確定與腔室10的兩個內表面都接觸的單個RBC 22的細 胞體積(“CV”)。可以通過使用各種分析技術來執行體積的整合。例如，根據第一 技術，可以使用腔室高度20、為被成像的RBC 22上與兩個內表面14、18接觸的部分25 確定的平均最大光密度、以及為整個被成像的RBC 22確定的光密度來確定與兩個內表面 14、18都接觸的單個RBC 22的細胞體積。被成像的RBC的總的光密度除以平均最大光 密度，并且針對腔室高度來校正該結果。根據另一個技術，通過將單個RBC 22劃分成 不同的部分來確定細胞體積與兩個表面接觸的部分25( “區域I”)，以及不與內表面 14、18中的任何一個接觸的部分27( “區域II”)。通過感測部分25(S卩，區域I)的OD 來確定細胞上與內表面14、18接觸的部分25的體積。該OD是基于每個像素(或者其 他圖像單位)來進行感測和定義的。如上所述，通過作為儀器放大系數的函數的每個像 素的圖像大小來確定由該像素表示的腔室面積。因此，與該像素相關的體積是每個像素 的圖像面積與已知腔室高度的乘積，這是因為腔室中被感測的點是RBC 22延伸貫穿整個 腔室高度20的點。通過對與兩個表面接觸面積內的每個像素相關的體積求和來確定與兩 個表面14、18接觸的RBC部分25 (S卩，區域I)的體積。以類似的方式確定RBC 22上 不與兩個表面14、18接觸的部分27(即，區域II)的體積。對為兩個表面接觸面積確定 的OD值和為不與兩個表面14、18接觸的RBC 22的部分27 (即，區域II)內的每個像素 確定的OD值進行比較。由于血紅蛋白摩爾消光系數(ε )是線性函數，則區域II內的每 個像素的相對OD值也表示與該像素相關的RBC 22的高度；例如，如果該像素的OD是 區域I中的OD的50%，則該點處的RBC 22的高度就是區域I中的RBC高度(即，腔室 高度20)的50%。如上所述，基于每個像素來確定與區域II中的每個像素相關的體積并 且將所確定的體積進行求和以確定RBC 22的區域II中的體積。RBC 22的體積是區域I 和II的和。減小每個像素上的圖像面積(即，增大分辨率)可以提高細胞體積確定的準 確性。提供這些技術作為可使用技術的示例，然而本發明不限于這些技術。用于確定細胞體積的上述技術可用于確定為獲得OD而感測的特定RBC 22的體 積。由于RBC 22內的血紅蛋白的OD即使在一個特定樣本內也會根據RBC的不同而不 同，因此，使用針對特定細胞感測到的OD來確定細胞22的體積可以提高體積確定的準 確性。然而，大量RBC 22不與腔室10的兩個內表面14、18都接觸。對于不與兩個表面 都接觸的那些RBC 22，可以使用先前獲得的與兩個表面14、18都接觸的RBC 22的平均 最大光密度來確定細胞體積。如所述獲得的平均最大光密度的準確性足以提供那些其他 細胞22的準確體積。作為進一步的選擇，對于本發明的那些利用等容球狀試劑的實施例來說，還可以通過假定上述的RBC片段或RBC是球狀的來確定與兩個內表面14、18不 接觸的RBC片段或RBC 22的細胞體積。如果可以使用上述剖析技術(profiling technique) 來確定RBC 22的周長，則可以使用該圓形面積來確定球體的大小，從而確定RBC 22的 體積。

分析設備44還適于使用以下步驟來確定樣本內的RBC 22的平均細胞體積 (“MCV” )使用上述的同樣方法，針對一些RBC重復該方法，使用這些結果來確定 平均值以及該平均值的準確性或置信度的度量(例如，可接受的平均值的標準誤差)。確 定具有可接受的準確性度量的MCV所需要的RBC數目取決于所分析的RBC族群，該數 目范圍可以為從大約幾百個到幾千個RBC 22。用于確定已經確定了其細胞體積的RBC 數目是否是為了確定MCV而可接受的族群的一種方法是迭代地確定該族群內的樣本平均 細胞體積并且確定這些平均值的標準誤差(即，平均值的標準偏差)。一旦準確性度量 (例如，標準誤差)處于預定的可接受范圍內，則接受該MCV。現在參照圖9和12，分析設備44還適于通過對所確定的單個RBC 22占據的體 積上的血紅蛋白濃度進行積分來確定RBC 22的細胞血紅蛋白含量(“CH”)。對于與 腔室10的兩個內表面14、18都接觸的那些RBC 22來說，使用如上所述的針對特定RBC 22確定的濃度(CHC)和體積(CV)來確定CH。如果基于單個RBC 22來確定CH，則可 以使用為該特定RBC 22確定的CHC而不使用平均CHC(MCHC)來確定CH，從而提高 精確度。對于不與腔室10的兩個內表面14、18接觸的那些RBC22，通過使用平均最大 光密度確定針對該特定RBC 22的濃度和體積來確定CH。分析設備44還適于通過以下步驟來確定樣本內RBC 22的平均細胞血紅蛋白含 量(“MCH”)使用上述的同樣方法，針對一些RBC 22重復該方法，使用這些結果來 確定平均值以及可接受的準確性度量(例如，平均值的標準誤差)。確定具有可接受的準 確性度量的MCH所需要的RBC數目取決于所分析的RBC族群，該數目范圍可以從大約 幾百個RBC 22到幾千個RBC 22。一旦準確性度量(例如，標準誤差)處于可接受的范 圍內，則接受該MCH。用于確定CHC、MCHC> CV> MCV> CH和MCH的上述方法是本發明如何使
用所述腔室和分析設備來確定基本上未稀釋的血液樣本的這些特征的示例。本發明不限 于這些特定示例。根據本發明的方法，如上所述，基本上未稀釋的全血樣本被置于腔室10中。在 將樣本引入腔室之前或者在將樣本引入腔室時，將抗凝血劑(在一些實例中為等容球狀 試劑和/或凝聚劑)與樣本混合。以干粉或半干粉形式(例如通過表面涂覆)添加的試 劑尤其易于使用。但是，本發明不限于干粉形式的試劑，例如可以使用不會有意圖地稀 釋樣本的液態試劑。樣本靜止地停留在腔室中。在某些情況下(例如，非常快速的分 析)，可以不必添加抗凝血劑，但是在大多數情況下，添加抗凝血劑是優選的，以確保樣 本處于分析可接受的形式。在某些分析(例如，提供有關單個RBC的信息)中，可能優 選的是不包括凝聚劑。使用分析設備44，通過使光透射穿過樣本并且檢測透射光，來對靜止停留在腔 室10內的樣本的至少一部分成像。雖然不要求對停留在腔室10內的整個樣本進行成像， 但是這是優選的，因為這么做通常會提供對樣本(以及其所有組分)的更全面的分析并且伴隨著準確性的提 高，這是因為對于基本上未稀釋的全血樣本來說，腔室內的RBC 22和 沒有RBC的區域24的分布通常是不均勻的。通過分析設備44，使用樣本部分的圖像來確定與腔室10的內表面12、16相接觸 的一組RBC 22。取決于被請求的血液樣本的特征，分析設備44將確定一個或多個特征 值來得出被請求的特征值。本發明的優點是不必使樣本內的所有RBC 22都與每個腔室平板接觸。可以僅使 用與腔室10的兩個內表面14、18都接觸的一些RBC22來執行該方法。不使用較小的RBC 22和RBC片段來校準該分析，但是測量 它們對紅細胞壓積的貢獻。另外，根據本發明，可以確定樣本的CHC、MCHC> CV、 MCV、CH和MCH，而不需要知曉腔室10內的樣本的總面積或體積。根據本發明識別和分析的RBC 22包括網狀細胞(未成熟的紅細胞)，該細胞在 骨髓中生長成為有核細胞。在網狀細胞釋放到循環之前，剝去它們的核。網狀細胞在失 去它們的網狀染色(為細胞質RNC和細胞核DNA的染色殘留部分的功能)之前在血流中 循環大約一天并且生長為基本上只包含血紅蛋白的成熟RBC 22。血液樣本內的網狀細胞 的相對數目是各種狀態的重要指標。例如，網狀細胞數目是骨髓紅細胞生產活動的良好 指標，這是因為它代表最近的生產。異常低的絕對網狀細胞數目表示再生障礙性貧血、 惡性貧血、骨髓腫瘤、紅細胞生成素生產問題、各種維生素或者礦物質缺乏癥(B9、 B12、以及鐵)等。異常高的絕對網狀細胞數量可以表示由于身體對出血或溶血所引起的 失血進行補充所導致的快速生產。因此，能夠檢測和計數網狀細胞有重要的價值。根據 本發明，網狀細胞被識別為RBC 22，這是因為它們包含有血紅蛋白，并且因為可以對它 們進行染色以識別剩余的RNA和DNA。還可以通過將樣本與諸如體外活體染料(如吖啶橙、astrozone orange等)之類的
著色劑摻合來將網狀細胞與其他RBC 22區分開并且對網狀細胞進行計數。該染料使自 然存在于網狀細胞內的網狀蛋白在被約470nm的紫光激發時發出熒光。通過由于所有網 狀細胞中包含的血紅蛋白引起的并且根據樣本圖像來確定的RBC光密度，可以確定RBC 22在靜止樣本內的位置。可以通過在與體外活體染料相關的一個或多個被選波長(例 如470nm)下對樣本成像并且在熒光下對樣本進行檢查來將網狀細胞與不包含網狀蛋白的 RBC 22和白細胞區分開。對于通過血紅蛋白的存在和網狀蛋白的熒光而被識別為網狀細 胞的那些RBC，可以使用用于確定細胞體積、細胞血紅蛋白含量、以及細胞血紅蛋白濃 度的上述方法來確定各個網狀細胞的這些特征。另外，可以確定統計信息(例如，平均 值和準確性度量)。還可以通過熒光信號的強度來確定每個網狀細胞內的網狀細胞的相對 量，該相對量與網狀細胞的成熟度成反比。因此，可以確定與單個網狀細胞以及網狀細 胞的族群有關的甚至更加具體的信息。可以使用熒光面積或熒光強度來確定單個網狀細 胞中的網狀蛋白的相對量，并且可以作為單個網狀細胞的體積的函數來計算該相對量。使用本發明，還可以在包含或排除網狀細胞的情況下確定RBC指數。例如，可 以在包括和不包括網狀細胞貢獻的體積的兩種情況下都繪制樣本的MCV。在沒有網狀細 胞的情況下確定MCV可以揭示受大尺寸網狀細胞影響的族群小紅細胞癥。可以確定RBC 和網狀細胞之間的多種其他數學關系。如上所述，根據本發明，可以為不與兩個平板內表面14、18接觸的RBC 22確定各個指數。可以以同樣的方式分析RBC片段，從而使得能夠將RBC片段與血液樣本 內發現的其他組分(例如，血小板、血小板凝塊、白細胞片段、剩余物等)區分開。使 用本發明檢測RBC片段的能力尤其有用，這是因為RBC片段可以表示諸如微血管病性溶 血性貧血、重度炎癥、以及彌散性惡性腫瘤之類的狀態。沒有經過等容球狀試劑處理的 血液樣本內的RBC片段的分析例如可以包括形態分析以確定未被改變的形態特征，例如 大小確定、與圓度的偏差、周長與面積之比等。使用本發明產生的OD圖像能夠確定每 個RBC片段的諸如圓度、橢圓度、突出度等之類的特征，這些特征有助于上述的形態分 析。另外，通過測量紅細胞片段的直徑或周長并且用這些尺寸計算球體的體積，可以確 定紅細胞片段的體積。 雖然已經通過本發明的具體實施例示出和描述了本發明，但是所屬領域的技術人員應當理解在不脫離本發明的思想和范圍的情況下可以在形式上或細節上進行各種變 化。
權利要求
1.一種用于確定血液樣本內的紅細胞血紅蛋白濃度的方法，包括以下步驟將樣本滴落在適于靜止保持樣本以進行分析的分析腔室中，所述腔室由第一平板的 內表面和第二平板的內表面限定，其中兩個平板都是透明的，并且所述腔室具有在兩個 平板的內表面之間延伸的已知高度或者可確定的高度，該高度使得樣本內的至少一個紅 細胞與兩個內表面都接觸；對與兩個內表面都接觸的所述至少一個紅細胞成像； 確定被成像的紅細胞上與兩個內表面接觸的至少一部分的光密度；以及 使用所確定的光密度來確定與內表面接觸的紅細胞的血紅蛋白濃度。
2.如權利要求1所述的方法，其中所述光密度是基于每個圖像單位來確定的。
3.如權利要求2所述的方法，其中所述圖像單位是像素。
4.如權利要求1所述的方法，進一步包括以下步驟確定與內表面接觸的多個紅細胞的血紅蛋白濃度；以及使用為所述多個紅細胞中的每一個紅細胞確定的血紅蛋白濃度來確定平均血紅蛋白 濃度。
5.如權利要求4所述的方法，其中對整個樣本成像。
6.如權利要求1所述的方法，進一步包括在至少一部分樣本中摻合等容球狀試劑的步驟。
7.如權利要求6所述的方法，其中所述等容球狀試劑是兩性離子去污劑。
8.如權利要求7所述的方法，其中兩個平板的內表面實質上是平行的，并且在確定血 紅蛋白濃度之前已知腔室高度。
9.如權利要求8所述的方法，其中所述腔室高度處在大約2微米到6微米之間的范圍內。
10.如權利要求1所述的方法，進一步包括以下步驟對多個紅細胞成像，每個這種紅細胞的至少一部分與內表面接觸； 確定每個這種紅細胞上與兩個內表面接觸的這部分的光密度； 使用為所述多個紅細胞中的至少一些確定的光密度來確定平均最大光密度；以及 使用所確定的平均最大光密度，來確定樣本內不與兩個內表面都接觸的一個或多個 紅細胞的血紅蛋白濃度。
11.如權利要求1所述的方法，其中所述樣本具有摻合有等容球狀試劑的第一部分和 沒有摻合等容球狀試劑的第二部分。
12.如權利要求11所述的方法，其中不與兩個內表面都接觸的一個或多個紅細胞中的 至少一些存在于樣本的第二部分內，并且該方法進一步包括確定處于第二部分內的不與 兩個內表面都接觸的一些紅細胞的未改變的形態的步驟。
13.如權利要求1所述的方法，進一步包括在樣本中摻合體外活體染料的步驟，該 染料用于使樣本內的網狀細胞內的網狀蛋白在被一個或多個預定波長的光激發時發出熒 光。
14.如權利要求13所述的方法，進一步包括利用熒光面積或者熒光強度來確定一個或 多個發出熒光的網狀細胞內的網狀蛋白的相對量的步驟。
15.如權利要求13所述的方法，進一步包括以下步驟對多個紅細胞進行成像，每個這種紅細胞的至少一部分與內表面接觸，其中使用至 少一個或多個預定波長的光執行該成像，所述至少一個或多個預定波長的光被紅細胞內 的血紅蛋白吸收；以用于使得網狀細胞內的網狀蛋白發出熒光的預定波長對所述多個紅細胞進行成像；確定每個這種紅細胞上與兩個內表面接觸的部分的光密度；使用所確定的光密度值，來確定所述多個紅細胞中除了發出熒光的那些紅細胞之外 的每個紅細胞的血紅蛋白濃度；以及使用為所述多個紅細胞中除了發出熒光的那些紅細胞之外的每個紅細胞所確定的血 紅蛋白濃度，來確定平均血紅蛋白濃度。
16.如權利要求1所述的方法，其中在一個或多個預定波長下執行成像步驟，并且血 紅蛋白濃度的確定利用了針對所述一個或多個預定波長的血紅蛋白的摩爾消光系數。
17.如權利要求16所述的方法，其中使用分析設備執行成像步驟，該分析設備被校準 以確定針對該分析設備的經過校準的血紅蛋白摩爾消光系數值。
18.如權利要求1所述的方法，其中所述血液樣本實質上是未稀釋的。
19.如權利要求1所述的方法，其中所述血液樣本是全血。
20.一種用于確定血液樣本內的紅細胞的細胞體積的方法，包括以下步驟將樣本滴落在適于靜止地保持樣本以進行分析的分析腔室中，該腔室由第一平板的 內表面和第二平板的內表面限定，其中兩個平板都是透明的，并且所述腔室具有在兩個 平板的內表面之間延伸的已知高度或可確定的高度，該高度使得樣本內的至少一個紅細 胞與兩個內表面都接觸；對與兩個內表面都接觸的所述至少一個紅細胞成像，并且產生圖像信號； 基于每個圖像單位來確定該紅細胞上與兩個內表面接觸的部分的平均光密度以及該 紅細胞的總的光密度；以及使用細胞上與內表面接觸的部分的平均光密度、總的光密度和所述腔室的高度，來 確定被成像的紅細胞的體積。
21.如權利要求20所述的方法，其中所述血液樣本實質上是未稀釋的。
22.如權利要求20所述的方法，其中所述血液樣本是全血。
23.如權利要求20所述的方法，其中所述圖像單位是像素。
24.一種用于確定血液樣本內的紅細胞的細胞體積的方法，包括以下步驟將血液樣本滴落在適于靜止地保持樣本以進行分析的分析腔室中，該腔室由第一平 板的內表面和第二平板的內表面限定，其中兩個平板都是透明的，并且所述腔室具有在 兩個平板的內表面之間延伸的已知高度或可確定的高度，該高度使得樣本內的至少一個 紅細胞與兩個內表面都接觸；對與兩個內表面都接觸的所述至少一個紅細胞成像，所述至少一個紅細胞包括該紅 細胞上與兩個表面接觸的部分和不與兩個內表面接觸的部分；基于每個圖像單位，來確定紅細胞上與兩個內表面接觸的部分的光密度，以及不與 兩個內表面接觸的部分的光密度；使用為被成像的紅細胞上與兩個內表面接觸的部分確定的每個圖像單位的光密度，來確定該部分的體積；使用為被成像的紅細胞上不與兩個內表面接觸的部分確定的每個圖像單位的光密度 和為與兩個內表面接觸的部分確定的每個圖像單位的光密度，來確定被成像的紅細胞上 不與兩個內表面接觸的部分的體積；以及使用為被成像的紅細胞上與兩個內表面接觸的部分確定的體積和為被成像的紅細胞 上不與兩個內表面接觸的部分確定的體積，來確定所述至少一個紅細胞的細胞體積。
25.如權利要求M所述的方法，包括以下步驟確定與兩個內表面都接觸的多個紅細胞的細胞體積；以及 使用為所述多個紅細胞中的每個紅細胞確定的細胞體積，來確定平均細胞體積。
26.如權利要求M所述的方法，其中對整個樣本進行成像。
27.如權利要求M所述的方法，進一步包括在至少一部分樣本中摻合等容球狀試劑的步驟。
28.如權利要求27所述的方法，所述等容球狀試劑是兩性離子去污劑。
29.如權利要求M所述的方法，其中兩個平板的內表面實質上是平行的，并且在確定 血紅蛋白濃度之前已知腔室高度。
30.如權利要求四所述的方法，其中所述腔室高度處于大約2微米到6微米的范圍內。
31.如權利要求M所述的方法，進一步包括以下步驟對樣本內的多個紅細胞成像，每個紅細胞的一部分與兩個內表面接觸； 基于每個圖像單位，為每個紅細胞確定該紅細胞上與兩個內表面接觸的部分的光密 度；以及使用為所述多個紅細胞中的每個紅細胞上與兩個內表面接觸的部分確定的光密度， 來確定平均最大光密度。
32.如權利要求31所述的方法，進一步包括以下步驟 對不與兩個內表面都接觸的一個或多個紅細胞成像； 確定不與兩個內表面都接觸的紅細胞的光密度；使用不與兩個內表面都接觸的紅細胞的光密度、所確定的平均最大光密度、和腔室 高度，來確定不與兩個內表面都接觸的所述一個或多個紅細胞的細胞體積。
33.如權利要求32所述的方法，其中所述樣本具有摻合有等容球狀試劑的第一部分和 沒有摻合等容球狀試劑的第二部分。
34.如權利要求33所述的方法，其中不與兩個內表面都接觸的所述一個或多個紅細胞 中的至少一些紅細胞存在于樣本的第二部分內，以及該方法進一步包括確定第二部分內 不與兩個內表面都接觸的所述一個或多個紅細胞中的至少一個紅細胞的未改變的形態。
35.如權利要求31所述的方法，進一步包括以下步驟 對不與兩個內表面都接觸的至少一個紅細胞成像； 確定不與兩個內表面都接觸的紅細胞的光密度；使用為與兩個內表面都接觸的紅細胞確定的平均光密光，來確定不與兩個內表面都 接觸的紅細胞的血紅蛋白濃度。
36.如權利要求M所述的方法，進一步包括在樣本中摻合體外活體染料的步驟，該染料可用于使樣本內的網狀細胞內的網狀蛋白被一個或多個預定波長的光激發時發出熒光。
37.如權利要求36所述的方法，進一步包括確定一個或多個發出熒光的網狀細胞內的 網狀蛋白的相對量的步驟。
38.如權利要求36所述的方法，進一步包括以下步驟對多個紅細胞成像，每個這種紅細胞的至少一部分與內表面接觸，其中使用被紅細 胞內的血紅蛋白吸收的光來執行該成像；以用于使得樣本內的網狀細胞內的網狀蛋白發出熒光的預定波長對所述多個紅細胞 成像；為所述多個紅細胞中的每個紅細胞確定細胞體積；以及使用所述多個紅細胞中的每個紅細胞的細胞體積來確定平均細胞體積，從該平均細 胞體積中排除發出熒光的每個紅細胞的細胞體積。
39.如權利要求M所述的方法，其中以一個或多個預定波長執行成像步驟，并且血紅 蛋白濃度的確定利用了針對所述一個或多個預定波長的血紅蛋白的摩爾消光系數。
40.如權利要求M所述的方法，進一步包括以下步驟使用為紅細胞上與兩個內表面接觸的部分確定的光密度，來確定紅細胞的血紅蛋白 濃度；以及使用血紅蛋白濃度和細胞體積，來確定紅細胞內的血紅蛋白含量。
41.如權利要求40所述的方法，進一步包括以下步驟確定多個紅細胞內的血紅蛋白含量，每個紅細胞的一部分與兩個內表面接觸； 使用為所述多個紅細胞中的每個紅細胞確定的血紅蛋白含量，來確定平均血紅蛋白含量。
42.如權利要求M所述的方法，其中所述血液樣本實質上是未稀釋的。
43.如權利要求M所述的方法，其中所述血液樣本是全血。
44.如權利要求M所述的方法，其中所述圖像單位是像素。
45.—種用于確定具有多個紅細胞的實質上未稀釋的血液樣本內的紅細胞血紅蛋白濃 度的設備，包括分析腔室，適于靜止地保持樣本以進行分析，所述腔室由第一平板的內表面和第二 平板的內表面限定，其中兩個平板都是透明的，并且所述腔室具有在兩個平板的內表面 之間延伸的已知高度或者可確定的高度，該高度使得樣本內的一個或多個紅細胞將與兩 個內表面都接觸；成像單元，其包括照明器和析像器，該單元用于對與內表面接觸的一個或多個紅細 胞進行成像，并且產生表示這種被成像的紅細胞的圖像信號；以及可編程分析器，適于基于每個圖像單位，使用所述圖像信號來確定被成像的紅細胞 上與兩個內表面接觸的至少一部分的光密度，并且使用所確定的光密度來確定與內表面 接觸的紅細胞的血紅蛋白濃度。
46.—種用于確定實質上未稀釋的血液樣本內的至少一個紅細胞的細胞體積的設備， 包括分析腔室，適于靜止地保持樣本以進行分析，所述腔室由第一平板的內表面和第二平板的內表面限定，其中兩個平板都是透明的，并且所述腔室具有在兩個平板的內表面 之間延伸的已知高度或可確定的高度，所述高度使得所述至少一個紅細胞與兩個內表面 都接觸；成像單元，其包括照明器和析像器，該單元用于對與內表面接觸的至少一個紅細胞 進行成像，并且產生表示該被成像的紅細胞的圖像信號；以及可編程分析器，適于使用所述圖像信號來確定與兩個內表面都接觸的紅細胞的平均 光密度和該紅細胞的總的光密度，并且使用平均光密度、總的光密度和腔室的高度來確 定該被成像的紅細胞的體積。
全文摘要
用于確定紅細胞內的血紅蛋白的濃度的方法及設備。將未稀釋的、全血樣本滴落在透明的分析腔室(10)中，該分析腔室的高度使得紅細胞與兩個表面(14，18)接觸。然后，測量紅細胞上與兩個表面接觸的部分的光密度。根據該光密度和血紅蛋白的已知差異系數來計算紅細胞的血紅蛋白濃度。對其他細胞重復該操作，直到能夠可靠地確定平均血紅蛋白濃度。從屬權利要求包括利用兩性離子等容球狀試劑來使得該測量與幾何形狀因子無關。
文檔編號G01N33/49GK102027368SQ200980116926
公開日2011年4月20日 申請日期2009年3月20日 優先權日2008年3月21日
發明者尼滕·V·拉爾普里亞, 斯蒂芬·C·沃德洛, 杰里米·R·希爾, 羅伯特·A·萊文, 達瑞恩·W·溫弗里希特 申請人:艾博特健康公司