專利名稱：一種阿維a有關物質的分離及測定方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物的分析方法，特別是用高效液相色譜法分離阿維A及其三個 順式異構體以及一個乙基取代物，并進行定量測定的方法。
背景技術：
在藥物分析中所稱的“有關物質(related substances) ”是指特定藥物中不是主 要組成物，但與成份相關的物質。因此有關物質檢測是控制藥品質量的重要指標。化合物9- (4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)_3，7_ 二甲基_2，4，6，8-壬四烯酸) 的結構中存在多個共軛雙鍵，因此存在多種順反式異構體。全反式9- (4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯基)_3，7_ 二甲基_2，4，6，8-壬四烯酸) 的商品名為阿維A，是一種皮膚病用藥，臨床上用于治療嚴重銀屑病及角化不良癥。在合成阿維A的產物中，往往會同時產生多種異構體，如ll，13-di-Cis、ll-Cis和 13-cis三種異構體。同時阿維A的合成產物中，還極易產生乙基取代物(即13位被乙基取 代所形成的雜質)。在合成阿維A時，由于化學反應的復雜性，在產生阿維A的同時易產生阿維A有關 物質，如阿維A順式異構體、乙基取代物。由于阿維A的順式異構體、乙基取代物的結構與 阿維A非常相近，分離十分困難，更難于定量。歐洲藥典的分析方法是使用HPLC-cartridge PAH色譜柱的色譜方法，存在許多問 題，乙基取代物與阿維A主峰不能分離，上述三種順式異構體雖然可以與阿維A主峰分離， 但各個順式異構體之間因完全重疊而不能互相分離。因此，用歐洲藥典的方法，無法對其中 存在的各順式異構體分別定量，也無法測定其中雜質乙基取代物的含量。在原料藥的生產中，為了確保藥品的質量，往往不僅需要測定原料藥主藥的含量， 而且還需要控制藥物中有關物質的量。阿維A的分析測定中，所稱“有關物質”就是上述順 式異構體以及乙基取代物。因此需要有一種好的方法，能夠對阿維A的“有關物質”進行分 離并定量，這對阿維A質量的控制具有非常重要的意義。
發明內容
本發明的目的是提供一種對阿維A及其順式異構體及乙基取代物進行分離和定 量測定的方法。本發明人經過多次試驗，篩選出了合適的高效液相色譜分析中色譜柱、流動相等 條件，達到了上述發明目的。本發明提供了一種阿維A三種順式異構體及13-乙基取代物分離并定量測定的 方法，其特征在于采用高效液相色譜法，色譜柱填料是十八烷基硅烷鍵合硅膠，流動相由 0.2% 1.5% (V/V)乙酸水溶液和有機溶劑組成，所述乙酸水溶液和有機溶劑的比例(V/ V)為10^-25% 75% 90% ；采用梯度洗脫，根據出峰順序可將阿維A與三種順式 異構體及13-乙基取代物分離并定性測定，峰1為ll，13-di-cis、峰2為13-cis、峰3為11-cis、峰4為阿維A、峰5為13-乙基取代物。所述有機溶劑是低級醇或低級腈，優選甲醇、乙腈、乙醇中的一種或多種。所述的乙酸水溶液優選濃度為0.2^-0.5 ^在本發明的一個實例中，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(色譜柱ZORBAX ODS 4.6Χ250_ 5 μ m)；以0.5%乙酸水溶液甲醇(17 83)為流動相；檢測波長為360nm。 取ll，13-di-cis、ll-cis、13-cis阿維A異構體適量，加少量四氫呋喃溶解并用甲醇稀釋成 每Iml約0. Img的溶液；取13-乙基取代物適量，加少量四氫呋喃溶解并用甲醇稀釋成每 Iml約0. 2mg的溶液；分別取上述兩種溶液適量與阿維A溶液混合后，按上述色譜條件進樣 20 μ 1，記錄色譜圖。按出峰順序，峰1為ll，13-di-cis、峰2為13_cis、峰3為ll_cis、峰 4為阿維A、峰5為13-乙基取代物。理論板數按阿維A峰計算不低于5000，阿維A主峰和 相鄰順式異構體及13-乙基取代物的分離度不低于1. 5。用本發明的方法不僅可將阿維A的三種順式異構體及乙基取代物進行有效分離， 還能夠定量測定其三種順式異構體ll，13-di-Cis、ll-Cis和13-cis的含量以及13-乙基 取代物的含量。表1本發明方法與歐洲藥典方法測定結果對比
權利要求
1.一種對阿維A順式異構體和13-乙基取代物進行分離和測定的方法，其特征在于 使用十八烷基硅烷鍵合硅膠作色譜柱的固定相，流動相由0.2% 1.5% (V/V)乙酸水溶液 和有機溶劑組成，所述乙酸水溶液和有機溶劑的比例(V/V)為10% 25% 75% 90%; 采用梯度洗脫，根據出峰順序可對阿維A與三種順式異構體及13-乙基取代物定性，峰1為 11，13-di-cis、峰2為13-cis、峰3為11-cis、峰4為阿維A、峰5為13-乙基取代物。
2.權利要求1所述的方法，對阿維A及其順式異構體和13-乙基取代物定量的方法是， 分別量取所述峰1、峰2、峰3、峰4和峰5的面積，按外標法計算出阿維A中順式異構體及乙 基取代物的含量。
3.權利要求1或2所述的方法，其中，所述有機溶劑是低級醇或低級腈。
4.權利要求3所述的方法，其中，所述有機溶劑選自甲醇、乙腈或乙醇中的一種或多種。
5.權利要求1或2所述的方法，其中，所述的乙酸水溶液中乙酸的濃度為0.2% 0. 5%。
全文摘要
一種阿維A有關物質——順式異構體及13-乙基取代物的分離和定量測定方法，使用十八烷基硅烷鍵合硅膠作色譜柱的固定相，流動相由乙酸水溶液和有機溶劑組成，采用梯度洗脫，可將阿維A順式異構體及13-乙基取代物進行分離并測定其含量。本方法簡便可行，重現性好。
文檔編號G01N30/02GK102109500SQ20091024405
公開日2011年6月29日 申請日期2009年12月28日 優先權日2009年12月28日
發明者吳蕓, 沈紅梅 申請人:重慶華邦勝凱制藥有限公司