專利名稱：一種酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
三聚氰胺(Melamine)，分子式C3N6H6，簡稱三胺，是一種三嗪類含氮雜環(huán)有機化合 物。三聚氰胺呈弱堿性，與鹽酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺鹽。三聚氰胺 是重要的氮雜環(huán)有機化工原料，在中性或微堿性情況下，與甲醛縮合而成各種羥甲基三聚 氰胺，但在微酸性環(huán)境中(PH5.5 6. 5)與羥甲基的衍生物進行縮聚反應(yīng)而生成樹脂產(chǎn)物。 三聚氰胺是一種用途廣泛的基本有機化工中間產(chǎn)品，最主要的用途是作為生產(chǎn)三聚氰胺甲 醛樹脂的原料。該樹脂硬度比脲醛樹脂高，不易燃，耐水、耐熱、耐老化、耐電弧、耐化學(xué)腐 蝕，有良好的絕緣性能、光澤度和機械強度，廣泛運用于木材、塑料、涂料、造紙、紡織、皮革、 電氣、醫(yī)藥等行業(yè)。三聚氰胺還可以作阻燃劑、減水劑、甲醛清潔劑等。雖然，目前廣泛認(rèn)為三聚氰胺毒性比較低微，大鼠口服的半數(shù)致死量大于3g/kg 體重，但長期攝入仍不容忽視，會造成生殖、泌尿系統(tǒng)的損害，膀胱、腎部結(jié)石，并可進一步 誘發(fā)膀胱癌。1994年國際化學(xué)品安全規(guī)劃署和歐洲聯(lián)盟委員會合編的《國際化學(xué)品安全手 冊》第三卷和國際化學(xué)品安全卡片說明長期或反復(fù)大量攝入三聚氰胺可能對腎與膀胱產(chǎn) 生影響，導(dǎo)致產(chǎn)生結(jié)石。蛋白質(zhì)主要由氨基酸組成，其含氮量一般不超過30 %，而三聚氰胺分子中含氮量 為66%左右。常用的蛋白質(zhì)測試方法“凱氏定氮法”是通過測出含氮量乘以6. 25來估算蛋 白質(zhì)含量，因此，添加三聚氰胺會使得食品的蛋白質(zhì)測試含量虛高，從而使劣質(zhì)食品和飼料 在檢驗機構(gòu)只做粗蛋白質(zhì)簡易測試時蒙混過關(guān)。食品和飼料工業(yè)蛋白質(zhì)含量測試方法的缺 陷，加之三聚氰胺作為一種白色結(jié)晶粉末，沒有什么氣味和味道，食品與飼料中摻雜了三聚 氰胺后也不易被發(fā)現(xiàn)，為此三聚氰胺也常被不法商人用作食品添加劑，以提升食品檢測中 的蛋白質(zhì)含量指標(biāo)，因此三聚氰胺也被人們稱為“蛋白精”。因此，需要靈敏、準(zhǔn)確、快速的檢 測方法。目前檢測三聚氰胺含量的化學(xué)方法有高效液相色譜法和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法， 由于復(fù)雜的儀器設(shè)備和繁瑣的過程，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的是提供一種三聚氰胺單克隆抗體。本發(fā)明所提供的三聚氰胺單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCC No. 3394的三聚氰 胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MAL分泌產(chǎn)生的。保藏編號為CGMCC No. 3394的三聚氰胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MAL也屬于本發(fā) 明的保護范圍。所述三聚氰胺單克隆抗體在制備檢測三聚氰胺的酶聯(lián)免疫試劑盒中的應(yīng)用也屬 于本發(fā)明的保護范圍。
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本發(fā)明的另一個目的是提供一種酶聯(lián)免疫試劑盒。本發(fā)明所提供的酶聯(lián)免疫試劑盒，為下述1)、2)、；3)或4)中任一所述酶聯(lián)免疫試 劑盒1)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、所述三聚氰胺單 克隆抗體和酶標(biāo)記抗抗體；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；2)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標(biāo)記物、所述三聚氰胺單克隆抗體 和抗抗體；其中，所述抗抗體作為包被原；3)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標(biāo)記物、所述三聚氰胺單克隆抗 體；其中，所述三聚氰胺單克隆抗體作為包被原；4)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、所述三聚氰胺單 克隆抗體的酶標(biāo)記物；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；所述三聚氰胺半抗原的結(jié)構(gòu)式如式I所示
權(quán)利要求
1.一種三聚氰胺單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCC No. 3394的三聚氰胺單克隆抗體 雜交瘤細(xì)胞株MAL分泌產(chǎn)生的。
2.保藏編號為CGMCCNo. 3394的三聚氰胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MAL。
3.權(quán)利要求1中所述三聚氰胺單克隆抗體在制備檢測三聚氰胺的酶聯(lián)免疫試劑盒中 的應(yīng)用。
4.一種酶聯(lián)免疫試劑盒，為下述1)、2)、；3)或4)中任一所述酶聯(lián)免疫試劑盒1)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、權(quán)利要求1中所述三 聚氰胺單克隆抗體和酶標(biāo)記抗抗體；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；2)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標(biāo)記物、權(quán)利要求1中所述三聚氰胺單 克隆抗體和抗抗體；其中，所述抗抗體作為包被原；3)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原的酶標(biāo)記物、權(quán)利要求1中所述三聚氰胺單 克隆抗體；其中，所述三聚氰胺單克隆抗體作為包被原；4)酶聯(lián)免疫試劑盒中包括三聚氰胺半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物、權(quán)利要求1中所述三 聚氰胺單克隆抗體的酶標(biāo)記物；其中，所述偶聯(lián)物作為包被原；所述三聚氰胺半抗原的結(jié)構(gòu)式如式I所示
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述酶聯(lián)免疫試劑盒包括三 聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、洗滌液、樣品稀釋液；所述三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液為濃度分別為ο μ g/L、5 μ g/L、20 μ g/LUOO μ g/L、500 μ g/L 和2500 μ g/L的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品溶液；所述底物顯色液由A液和B液組成，A液為濃度為1. 5% -2. 5%的過氧化脲的水溶液， B液為濃度為0. 5% -1. 5%的四甲基聯(lián)苯胺的水溶液；所述洗滌液為濃度為0. 8% 1. 2%的吐溫20和濃度為0. 3% -0. 7%的疊氮化鈉的 0. 005M-0. 015M磷酸鹽緩沖液；所述樣品稀釋液為20X (0. 03mol/L-0. 05mol/L)的磷酸鹽緩沖液。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述抗抗體為羊抗鼠抗 抗體或羊抗兔抗抗體。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一所述的酶聯(lián)免疫試劑盒，其特征在于所述載體蛋白為牛 血清白蛋白、人血清白蛋白、鼠血清蛋白、甲狀腺蛋白、兔血清蛋白、血藍蛋白或卵清白蛋 白。
8.—種檢測樣品中三聚氰胺的方法，包括如下步驟 1)將待測樣品進行前處理，得到待測樣本溶液；2)用權(quán)利要求4-7中任一所述酶聯(lián)免疫試劑盒對所述待測樣本溶液進行檢測；所述前處理的方法為下述幻、13)、(3)、(1)、6)和f)中的任一a)所述待測樣品為奶粉；每取0.8g-l. 2g所述奶粉溶于8ml-12ml權(quán)利要求5中所述 樣品稀釋液中，混合均勻，離心，取上清液，即為待測樣本溶液；b)所述待測樣品為牛奶；將所述牛奶與權(quán)利要求5中所述樣品稀釋液按照1:(9-11) 的體積比混勻，得到的溶液即為待測樣本溶液；c)所述待測樣品為蛋；將每0.8g-l. 2g蛋用8ml-12ml提取劑進行提取，得到的提取液 即為待測樣本溶液；d)所述待測樣品為寵物食品；將每1.8g-2. 2g寵物食品用8ml-12ml提取劑進行提取， 得到的提取液即為待測樣本溶液；e)所述待測樣品為飼料；將每0.8g-l. 2g飼料用8ml-12ml提取劑進行提取，得到的提 取液即為待測樣本溶液；f)所述待測樣品為小麥面筋；將每0.lg-0. 3g小麥面筋用8ml-12ml提取劑進行提取， 得到的提取液即為待測樣本溶液；所述提取劑的組成為由Na2HPO4 · 12H20、NaH2PO4 WH2CKNaCl、Tween20和水組成，所述 Na2HPO4 · 12H20在所述提取劑中的濃度為2. 9g/L，所述NaH2PO4 · 2H20在所述提取劑中的濃 度為0. 2g/L，所述NaCl在所述提取劑中的濃度為0. 9g/L，所述Tween20在所述提取劑中的 濃度為0. 05g/L。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用。該酶聯(lián)免疫試劑盒，包括三聚氰胺單克隆抗體和三聚氰胺半抗原。該三聚氰胺單克隆抗體，是由保藏編號為CGMCC No.3394的三聚氰胺單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株MAL分泌產(chǎn)生的。本發(fā)明的酶聯(lián)免疫試劑盒主要采用間接競爭ELISA方法定性或定量檢測動物或人食用的產(chǎn)品(特別是牛奶、奶粉等乳品及蛋、飼料等)中三聚氰胺的含量。本發(fā)明試劑盒及檢測方法對樣品的前處理要求低，樣品前處理過程簡單，能同時快速檢測大批量樣品；采用高特異性的三聚氰胺單克隆抗體，檢驗方法方便易行，具有特異性高、靈敏度高、精確度高、準(zhǔn)確度高等特點。
文檔編號G01N33/577GK102086228SQ200910242088
公開日2011年6月8日 申請日期2009年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月4日
發(fā)明者史為民, 吳小平, 徐飛, 江海洋, 潘凈茹, 王亞輝, 王戰(zhàn)輝, 王照鵬, 王熙 申請人:北京維德維康生物技術(shù)有限公司