專利名稱：人參次苷h提取物及制備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物及其制備方法，特別涉及人參次苷H提取物及其制備。
背景技術：
人參在治療心腦血管疾病方面，有許多報道。人參次苷，可治療冠心病和缺血性中風。人參次苷H為人參皂苷類成分經水解產生的次級皂苷，再經硅膠柱層析精制所得 到的有效部位-H組皂苷，其主要組分為人參皂苷、他2和他3，其中他2為該藥的主要成 分，也是該藥的主要抗癌活性成分。藥效學研究表明人參皂苷他2對肝癌、黑色素瘤B16、 宮頸癌及肉瘤S180等癌細胞的增殖有顯著的特異性的抑制作用。其作用機理為在癌細胞 增殖過程中，經人參皂苷他2作用，使癌細胞停止在一定的增殖期，并促使其逆轉為正常細 胞。含有人參皂苷Mil、Mi2和他3的H組皂苷，為“人參次苷H”，體外實驗研究發現人參次 苷H對多種人源腫瘤細胞的增殖均有明顯的抑制作用。現有技術分離人參次苷H的效果不佳，本發明人在對人參次苷H提取物進行研究 過程中，采用新的分離技術，試驗出一組新的人參次苷H提取物及其制備方法，這些人參次 苷H提取物具有療效高，純度高，吸收好，質量穩定，同時制備方法分離效果佳，含量高，工 藝簡單，操作方便，成本低廉，適合工業化生產。
發明內容
本發明提供一種人參次苷H提取物，其中，含人參總次苷以人參皂苷Mi2(C36H62O8) 計，不少于60. 0 %，人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不少于30%。優選的，本發明的 提取物中人參皂苷Mi1含量范圍為_15%，人參皂苷他2含量范圍為10% -40%。本發明的人參次苷H提取物，制備方法如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材，用水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，用乙 醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至干，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶于酸溶液中反應，反應完成后調節PH至中性，收集 沉淀物；步驟3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅膠中，進行硅膠柱層析，用氯仿-甲醇進行洗 脫，濃縮即得；其中，步驟1中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇范 圍為 30-95% ；步驟2中所述的酸溶液選自鹽酸、硫酸或乙酸溶液，步驟3所述氯仿-甲醇比例為10 1-1 1。優選的，本發明的人參次苷H提取物，制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的藥材經水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用 85%乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總皂苷；步驟2、將總皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的酸溶液中，在40°C攪拌反應4h，反應完 成后調節PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠，干燥后粉碎過篩， 進行硅膠柱層析，用氯仿甲醇=10 1-2 1系統進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收 集富含人參皂苷Mi1和人參皂苷Mi2的流份，濃縮。本發明還提供本發明的人參次苷H提取物的質量標準(1)人參次苷H中人參總次苷含量以人參皂苷Mi2計不得少于60%對照品溶液的制備精密稱取經40°C減壓干燥M小時的人參皂苷Mi2對照品適 量，加甲醇制成每Iml含0. 15mg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備精密稱取人參次苷H組合物10mg，用50ml正丁醇飽和的水超 聲5分鐘后轉移至分液漏斗，加入2g氯化鈉溶解后，用正丁醇乙酸乙酯溶液(水飽和的正 丁醇-乙酸乙酯1 4)萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯層溶液，濃縮至干，殘渣 用甲醇溶解，定量轉移至50ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置15ml具塞試管中，水浴 蒸干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸(1 4)混合溶液anl，搖勻，密塞，置 60°C水浴中加熱15分鐘，取出，立即放入冰水中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸IOml，搖勻，以 試劑作空白。照分光光度法(中國藥典2005年版一部附錄V A)，在550nm的波長處測定吸 收度，計算，即得。本品按干燥品計算，含人參總次苷以人參皂苷Rh2(C36H62O8)計，不得少于60. 0%。(2)人參次苷H中人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不得少于30%。色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；以乙腈為流動 相A，以0. 2%磷酸溶液為流動相B，按下列梯度進行洗脫；檢測波長為203nm，理論板數按人 參皂苷Mi2峰計算應不低于7000。
權利要求
1.一種人參次苷H提取物，其特征在于，提取物中含人參總次苷以人參皂苷Mi2計，不 少于60. 0%，人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不少于30%。
2.權利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，提取物中人參皂苷Iih1含量范圍為 1% -15%，人參皂苷Rti2含量范圍為10% -40%。
3.權利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，制備方法如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材，用水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，用乙醇洗 脫，收集洗脫液，濃縮至干，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶于酸溶液中反應，反應完成后調節PH至中性，收集沉淀物；步驟3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅膠中，進行硅膠柱層析，用氯仿-甲醇進行洗脫，濃 縮即得；其中，步驟1中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇范圍為 30-95% ；步驟2中所述的酸溶液選自鹽酸、硫酸或乙酸溶液， 步驟3所述氯仿-甲醇比例為10 1-1 1。
4.權利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，制備方法如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材經水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85% 乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總皂苷；步驟2、將總皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的酸溶液中，在40°C攪拌反應4h，反應完成后 調節PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠，干燥后粉碎過篩，進行 硅膠柱層析，用氯仿甲醇=10 1-2 1系統進行洗脫，薄層TLC檢查洗脫結果，收集富 含人參皂苷Mi1和人參皂苷Mi2的流份，濃縮。
5.權利要求1的人參次苷H提取物，其特征在于，制備方法如下步驟1、西洋參葉用水提取2-3次，每次1-2小時，每次加水8-12倍量，提取液通過大 孔吸附樹脂柱，先用水洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85%乙醇洗脫，收集85 %乙醇洗脫 液，濃縮至干得總皂苷；步驟2、將總皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的鹽酸溶液中，在40°C攪拌反應4h，反應完成 后調節PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用95%的乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠，干燥后粉碎過 篩，進行硅膠柱層析，用體積比為氯仿甲醇=10 1-2 1的溶液系統進行洗脫，薄層 TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Mi1和人參皂苷Mi2的流份，濃縮。
6.權利要求1的人參次苷H提取物的檢測方法，其特征在于，步驟如下(1)人參次苷H中人參總次苷含量以人參皂苷Mi2計不得少于60%對照品溶液的制備 精密稱取經40°C減壓干燥M小時的人參皂苷Mi2對照品適量，加甲醇制成每Iml含0. 15mg 的溶液，作為對照品溶液，供試品溶液的制備精密稱取人參次苷H組合物10mg，用50ml正丁醇飽和的水超聲5分 鐘后轉移至分液漏斗，加入2g氯化鈉溶解后，用水飽和的正丁醇乙酸乙酯=1 4的正丁醇乙酸乙酯溶液萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯層溶液，濃縮至干，殘渣用甲 醇溶解，定量轉移至50ml量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，即得，測定法精密量取對照品溶液及供試品溶液各1ml，分別置15ml具塞試管中，水浴蒸 干，精密加入新配制的5%香草醛冰醋酸-高氯酸=1 4混合溶液anl，搖勻，密塞，置60°C 水浴中加熱15分鐘，取出，立即放入冰水中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸IOml，搖勻，以試劑 作空白；照中國藥典2005年版一部附錄VA分光光度法，在550nm的波長處測定吸收度，計 算，即得。本品按干燥品計算，含人參總次苷以人參皂苷Mi2計，不得少于60. 0%。 (2)人參次苷H中人參皂苷Iih1和人參皂苷Mi2含量之和不得少于30%，色譜條件與系 統適用性試驗以十八烷基硅烷鍵和硅膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0. 2%磷酸溶液為 流動相B，按下列梯度進行洗脫；檢測波長為203nm，理論板數按人參皂苷Mi2峰計算應不低 于 7000，時間(分)流動相A (% )流動相B (% )=0 1035 5065 50=10 4050 9050 10=40 509010=50 5590 3510 65=55 603565對照品溶液的制備精密稱取40°C減壓干燥的人參皂苷Iihp Rh2適量，加甲醇溶解并制 成每Iml分別含0. lmg、0. 5mg的混合溶液，作為對照品溶液，供試品溶液的制備取人參次苷 H組合物25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得， 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μ 1，注入液相色譜，測定，即得。 本品按干燥品計算，含人參皂苷Mi1和人參皂苷Mi2，總和不得少于30%。
7.含權利要求1的人參次苷H提取物的藥物組合物。
8.權利要求1的人參次苷H提取物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
9.權利要求1的人參次苷H提取物的制備方法，其特征在于，步驟如下步驟1、含有人參皂苷類成分的藥材用水提取，提取液通過大孔吸附樹脂柱，用乙醇洗 脫，收集洗脫液，濃縮至干，得總皂苷；步驟2、步驟1得到的總皂苷溶于酸溶液中反應，反應完成后調節PH至中性，收集沉淀物；步驟3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅膠中，進行硅膠柱層析，用氯仿-甲醇進行洗脫，收 集富含人參皂苷他2的流份，濃縮即得；其中，步驟1中所述大孔吸附樹脂為弱極性或非極性大孔吸附樹脂，所述乙醇范圍為 30-95% ；步驟2中所述的酸溶液選自鹽酸、硫酸或乙酸溶液， 步驟3所述氯仿-甲醇比例為10 1-1 1。
10.權利要求9的制備方法，其特征在于，步驟如下步驟1、選自西洋參葉、西洋參、三七、三七葉、人參或人參葉等含有人參皂苷類成分的 藥材用水提取2-3次，每次1-2小時，加水8-12倍量，提取液通過大孔吸附樹脂柱，先用水 洗脫，洗脫至流出液近無色，繼用85 %乙醇洗脫，收集85%乙醇洗脫液，濃縮至干得總皂 苷；步驟2、將總皂苷溶于20倍的PHI. 0左右的鹽酸溶液中，在40°C攪拌反應4h，反應完成 后調節PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人參總次苷粗品；步驟3、人參總次苷粗品用95%的乙醇加熱使溶解，拌入2倍量的硅膠，干燥后粉碎過 篩，進行硅膠柱層析，用體積比為氯仿甲醇=10 1-2 1的溶液系統進行洗脫，薄層 TLC檢查洗脫結果，收集富含人參皂苷Mi1和人參皂苷Mi2的流份，濃縮即得。
全文摘要
本發明涉及一種中藥提取物及其制備方法，特別涉及人參次苷H提取物及其制備。本發明的提取物中含人參總次苷以人參皂苷Rh2計，不少于60.0％，人參皂苷Rh1和人參皂苷Rh2含量之和不少于30％。
文檔編號G01N21/31GK102058643SQ200910228459
公開日2011年5月18日 申請日期2009年11月17日 優先權日2009年11月17日
發明者周水平, 宋兆輝, 張蘭蘭, 朱永宏, 林萬里, 蔡楠, 黃芝娟 申請人:天津天士力制藥股份有限公司