專利名稱：一種血型檢測卡及其生產方法
技術領域：
本發明涉及一種血型檢測卡及其生產方法，屬于血型檢測技術領域。
背景技術：
血型檢測主要根據血型正定型，目前血型正定型一直是根據血型抗體
與對應紅細胞抗原的凝集反應。以ABO血型為例A型紅細胞表面含A 抗原，血清/血漿含B抗體；B型紅細胞表面含B抗原，血清/血漿中含A 抗體；AB型紅細胞表面含AB抗原，血清/血漿中不含AB抗體；0型血表 面不含AB抗原，血清/血漿中含AB抗體。這種抗原抗體形成的凝集反應 由醫學專業人員根據血型定型試劑來判讀結果。
血型正定型檢測主要包括4步1、在反應容器或平板上加血型定型 試劑，2、加入少量受檢者全血，3、將兩者混勻，4、判讀結果。血型檢 測及結果判定必須由醫療專業人員完成，而且由于多種人為因素(試劑 位置混淆/記憶不清、樣品加錯位置等)造成血型結果判斷錯誤導致嚴重 輸血反應甚至死亡。
檢測過程需要使用抗體溶液，抗體溶液的保存溫度一般為4攝氏度， 以防止失效。液態的抗體試劑在運輸和保存方面存在4交大困難，尤其是在沒有穩定冷藏設備的環境中(例如野外)使用時，常常會因為抗體失 效而無法得到準確的檢測結果。
為簡化血型檢測過程，提供便捷的檢測方式，人們進行了如下嘗試
中國專利申請200320121646. 2 (公開號為2669196 )公開了一種4企測 AB0血型檢測卡。血型卡由帶凹槽平面載體和凹槽內干燥的抗體膜構成， 抗體膜分別為抗A、抗B和全凝集素。透明不干膠膜用于覆蓋檢測完畢的 血型卡標注區和檢測區，并用于粘貼檔案。檢測卡、透明不干膠膜和干燥 劑裝入鋁箔袋成一個試劑盒。該檢測卡室溫保存，結果準確，能有效控制效 期，方便了非專業人員使用，結果保存及存檔方便，單份測定，可隨身攜帶。 主要用于醫院、部隊、公檢法部門外出AB0血型才企測，個人也可進行血型自檢。
中國專利申請03215617. 0 (公開號為2605574 )的血型鑒定卡，/>開 了 一種簡便的血型鑒定卡，板卡狀，其板卡上設有鑒定凹坑，凹坑上設有識 別標記，最好將鑒定凹坑設計三個，分別為抗A鑒定凹坑、抗B鑒定凹坑和 RH鑒定凹坑；使用紙質板卡，可以在板卡有鑒定凹坑的表面上設防滲膜 層。本實用新型結構簡單，使用操作方便，結果快速準確，又成本低，易于普 及推廣應用。
中國專利ZL 200620112928. X (公開號為2901313 )公開了 一種ABO 血型反定型試劑盒，包括三個密封瓶、A型、B型和0型紅細胞試劑，密封 瓶為塑料滴瓶，由透明塑料瓶、塑料瓶蓋、滴管和密封墊組成，A型、B型和0型紅細胞試劑是由A型、B型和0型紅細胞和紅細胞保養液組成，A型、 B型和0型紅細胞的濃度為4%, A型、B型和0型紅細胞是通過白細胞過濾 器過濾后的紅細胞，紅細胞保養液是使用藥品和蒸餾水按照特定比例配 制而成。本實用新型的有效期不低于3個月，本實用新型的優點是使用方 便、有效期長、靈敏度高、準確性好的ABO血型反定型試劑盒，能夠在臨 床上準確地i貪斷AB0血型。
以上的發明均只能纟企測AB0血型，并且無法徹底消除由于人為誤:操作 造成的判讀錯誤。因此，目前需要一種能顯著降低血型判讀錯誤率、操 作更加簡單、結果顯而易見的血型檢測卡和/或血型檢測方法。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種使用方便，結果可靠顯見的新 型血型一企測卡。
本發明要解決的另 一個技術問題是提供上述血型檢測卡的生產方法。 為實現上述目的，本發明采用以下技術方案
一種血型檢測卡，由載體和固定在載體上的抗體層組成，抗體層含有 至少一個字母形狀的抗體印跡。抗體印跡的數量可以為一個或多個，還可 以將不同字母的抗體印跡進行組合形成檢測單元。例如將字母A形抗體印 跡與字母B形抗體印跡組合，形成ABO血型檢測單元。
所述抗體印跡由血型片企測用抗體制成，其中的抗體選自抗A抗體、抗B抗體、抗Rh血型相關抗體、抗P血型相關抗體、抗MNSs血型相關抗體、 抗Duffy血型相關抗體中的一種或幾種。
所述抗體印跡的字母形狀為與該抗體印跡產生抗原抗體反應的血型 相應的字母。例如抗A抗體印跡呈字母"A"，測得為A型血；抗B抗體印 跡呈字母"B"，測得為B血型；抗Rh抗體印跡呈字母"R",測得為Rh血 型；抗P抗體印跡呈字母"P",測得為P血型、抗MNSs抗體印跡呈字母"M"， 測得為MNSs血型；抗Duffy抗體印跡呈字母"D，，，測得為Duffy血型。
在本發明中，相應于ABO血型的抗體印跡字母形狀分別是字母A或B 的形狀。根據顯示出的紅色A、 B字母便可以確定其血液的血型，即字母A 判定其血型為A型；字母B判定其血型為B型；字母AB判定其血型為AB 型；不顯示任何字母判定其血型為0型。
相應于Rh、 P、 MNSs、 Duffy血型的抗體印跡字母形狀分別是它們的 相應字母形狀。Rh血型含有5種抗原DCcEe,出現R這個字母判定其血液 含有D抗原，判斷為Rh陽性，未出現字母判定其血液為Rh陰性。P、 MNSs、 Duffy等血型判定與Rh血型相同。
所述抗體印跡中的抗體為多克隆抗體、單克隆抗體或月交體金標記的金 標抗體。其中單克隆抗體和金標抗體的特異性強，可增強反映的靈敏度。 多克隆抗體和單克隆抗體均可通過商業途徑購買得到，也可以采用公知的 多克隆抗體或單克隆抗體的制備方法制得。
所述載體選自紙板、玻璃片、塑料板、纖維膜或樹脂板中的一種，也可以是其他檢驗領域可接受的醫用材料。所述的紙板是一種能夠承受本發 明方法處理的具有一定厚度的紙板。所述的玻璃片是目前市場上普遍銷售 載玻片。所述的塑料板是目前市場上銷售的聚合物板，例如聚苯乙烯、聚 乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚碳酸酯等聚合物板。所述的纖維膜是目前市 場上銷售的纖維膜，例如像絲素蛋白膜、聚乳酸膜玻璃纖維膜、醋酸纖維 素膜或硝酸纖維素膜等。
所述的樹脂板是目前市場上銷售的樹脂板，例如像PVC、 ABS、環氧樹 脂或酚醛樹脂板等。
所述載體一側表面或一側的局部表面具有弧度，例如呈凸面型結構或 凹面型結構，又如在凸面型結構的外圍設有凹槽。帶有凸面型的結構中， 抗體層位于凸面處，未與抗體反應的血液自動離開抗體層表面，可減少結 果判定的干擾。
所述血型檢測卡外設有包裝材料，選自塑料薄膜、鋁箔或紙中的一種 或幾種。所述的塑料薄膜、鋁箔或紙都是在藥品包裝中通常使用的包裝材 料。可以使用單一材料包裝，例如只是使用塑料薄膜包裝或使用鋁箔包裝， 也可以使用多種材料包裝，例如先使用鋁箔包裝，再在其外面用紙包裝。
一種血型檢測卡的生產方法，在用抗體固定劑預處理的清潔載體的表 面噴涂或印染血型檢測用抗體，制成具有字母形狀的抗體印跡的抗體層， 使用緩沖液除去未與載體結合的多余抗體，干燥，包裝。
所述抗體印跡的字母形狀為與該抗體印跡產生抗原抗體反應的血型相應的字母。
所述清潔載體的方法包括但不限于如下方法使用紙載體時，可以先
使用吸塵器清除灰塵，然后噴灑殺菌劑、消毒劑等進行清潔；使用玻璃片、塑料板或樹脂板時，可以先用洗液浸泡12-24h,然后用自來水沖洗，再用蒸餾水清洗；濾干后，可以在室溫下進行自然干燥，也可以在用綢布擦千后，再在干燥箱進行干燥。使用纖維膜時，可以噴灑目前在市場上銷售的清潔劑，然后涼干或在干燥箱進行干燥。
所述預處理的清潔載體是指用抗體固定劑進行了預處理的載體，其表面可結合纟元體。
由于固相載體本身一般不具有直接與抗體和其他活性蛋白反應的能力，因此需要預先在固相載體表面引入活性基團，然后利用活性基團與抗體上的氨基、羧基或其他基團進行反應而使其固定在所述載體上。為此，清潔的載體需要用抗體固定劑進行處理。
在本發明中，抗體固定劑應該理解是能夠往固相載體表面引入活性基團，并且這些活性基團與抗體的氨基、羧基等活性基團進行反應而其固定在所述載體上的任何物質。常用的固定劑可以是無才幾固定劑或有機固定劑。
所述的無機固定劑例如甲醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛、二氧化硅和鋨酸等，它們都是目前市場上銷售的產品。例如將二氧化硅噴涂在載體上，通過表面鞋基化、氨基硅烷化和對苯二甲醛組裝，在二氧化硅表面衍生活潑的醛基基團，利用抗體的氨基和醛基發生還原胺化反應將抗體固定在二氧化硅表面上。
所述的有機固定劑例如是APES ( 3-氨丙基三乙氧基硅烷)、Polv-L-Lysine (多聚賴氨酸)或鉻明膠溶液等，它們都是目前市場上銷售的產品。例如使用絲素蛋白膜或聚乳酸膜時，使用含有氨基、羧基或其他基團的有機固定劑處理絲素蛋白膜或聚乳酸膜，使抗體的氨基和醛基與所述這些基團發生反應而將抗體固定在這些膜上。
所述固定劑的使用量沒有特別限制，所述固定劑的使用量不能太少，如果使用量太少，所述的載體與抗體結合不牢，容易脫露，從而影響檢測結果。如果固定劑使用量太多，會造成所述固定劑的浪費。 一般而言，所述固定劑的使用方法是在清潔的載體與固定抗體層的表面噴涂固定劑，
或將清潔載體置于固定劑溶液中使表面覆蓋上固定劑，取出；干燥即可。
所述的固定劑選自曱醇、乙醇、丙酮、曱醛、戊二醛、二氧化硅、鋨酸、3-氨丙基三乙氧基硅烷、多聚賴氨酸或鉻明膠溶液中的一種。抗體與載體固定結合的方法為現有技術，本領域普通技術人員根據教科書、文獻或固定劑的使用說明書的指導可方便地實施。
所述使用緩沖液除去未與載體結合的多余抗體是指檢測用抗體與載體表面固定劑中的 一些活性基團進行反應而被固定在載體上之后，放置一段時間(0. 5 - 24小時)，待固定化過程結束后再用緩沖液除去未與載體結合的多余抗體，得到所述的血型檢測卡。
ii所述的緩沖液為磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液或含甘油的緩沖液中的一種。所述的緩沖液為能夠將沒有與這種載體結合的多余抗體除去而又不損害其它結合抗體與血型檢測卡其它部分的溶液。緩沖液使用量沒有特別
限制，或多或少都可以，但以不損害其它結合抗體與血型^r測卡其它部分
為原則。
在使用所述的緩沖液處理后， 一般需要進行干燥處理(室溫或真空干燥箱)。
本發明血型檢測卡使用方法是在本發明血型檢測卡上加入少量受檢者的全血，通常是l-2滴全血，搖勻后根據本發明血型檢測卡上顯示的紅色字母，就可以知道血型結果。例如本發明血型檢測卡上顯示的紅色字母A表示受檢者的血型為A型血，其它依此類推。
本發明的血型4全測卡可廣泛應用于AB0、 Rh、 P、 MNSs、 Duffy等具有臨床意義的主要血型系統。本發明的血型檢測卡可應用于各血液中心，各級醫院輸血科、臨床檢驗科，突發事件、戰地醫療備用，邊遠地區救護所，非醫療專業人員家用，既可針對血液中心和醫院設計成批量鑒定，又可針對家用設計成單人或十人以內的小量檢測型卡片。
本發明的優點是本發明將抗體固定于載體之上，不必再使用現有技術中冷藏的抗體溶液，徹底解決了攜帶抗體溶液的運輸和冷藏難題，并才及大地筒化了檢測操作。本發明操作簡單，只需將全血滴加在反應處，稍加搖動，即可根據紅細胞聚集后顯現的字母直接判讀血型結果，僅需2個步驟便可直接知道結果，極大地縮短了檢測時間，還能夠避免人為因素造成的血型判斷錯誤，例如在傳統血型檢測操作中可能發生的血型試劑加錯、加反、血型結果讀錯等錯誤。本發明在血液中心、醫院、突發事件、戰地醫療、邊遠地區救護或家庭中作為檢測血型具有廣泛的應用前景。
下面結合附圖和具體實施方式
對本發明作進一步說明，并非對發明的限定，依照本領域公知的現有技術，本發明的實施方式并不限于此，因此凡依照本文公開內容所做出的本領域的等同替換，均屬于本發明的保護范圍。
圖1為本發明第一種結構示意圖，載體為平面結構。
圖2為本發明第一種結構的縱剖面圖。
圖3為本發明第二種結構示意圖，載體具有凹面。
圖4為本發明第二種結構的縱剖面圖。
圖5為本發明第三種結構示意圖，載體具有凸面及凹槽。
圖6為本發明第三種結構的縱剖面圖。
圖7為人次血型檢測卡的示意圖。
具體實施例方式
實施例1 載體為平面的單人份AB0血型檢測卡
13ABO血型檢測卡，由平面玻片載體1 (醫用載玻片)和固定在玻片載體1上的檢測用抗體層2組成，抗體層由兩個抗體印跡組成。
抗體印跡的字母形狀分別為字母A和字母B，字母A形狀的抗體印跡為抗A抗體，字母B形狀的抗體印跡為抗B抗體。
抗體層2通過載體表面的固定化試劑與玻片載體1固定連接。
實施例2 載體為凹面的單人份ABO血型檢測卡
ABO血型檢測卡，由紙板載體1和固定在紙板載體1上的凈企測用抗體層2組成，抗體層由兩個抗體印跡組成。
抗體印跡的字母形狀分別為字母A和字母B，字母A形狀的抗體印跡為抗A抗體，字母B形狀的抗體印跡為抗B抗體。紙板載體l的檢測區域具有凹面結構3, 4元體印跡4立于凹面結構3處。
抗體層2通過載體表面的固定化試劑與載體1固定連接。
實施例3 載體為凸面并具有凹槽的單人份ABO血型纟企測卡ABO血型檢測卡，由紙板載體1和固定在紙板載體1上的才企測用抗體層2組成，抗體層由兩個抗體印跡組成。
抗體印跡的字母形狀分別為字母A和字母B,字母A形狀的抗體印跡為抗A抗體，字母B形狀的抗體印跡為抗B抗體。紙板載體l的檢測區域具有凸面結構3,抗體層位于凸面結構3處，凸面結構3的外圍環設有凹槽4，用于收集未反應的血液。
抗體層2通過載體表面的固定化試劑與載體1固定連接。
實施例4 載體為凸面并具有凹槽的多人份AB0血型^r測卡
ABO血型4全測卡，由紙板載體1和固定在紙板載體1上的抗體層2組
成，抗體層2由若干個檢測單元組成，每個檢測單元由兩個單字母形狀的
抗體印跡組成。
每個檢測單元內的抗體印跡的字母形狀分別為字母A和字母B,字母A形狀的抗體印跡為抗A抗體，字母B形狀的抗體印跡為抗B抗體。
紙板載體1的檢測區域具有凸面結構3,抗體層位于凸面結構3處，凸面結構3的外圍環設有凹槽4，用于收集未反應的血液。
該ABO血型檢測卡可實現同時對多人進行血型檢測，邊緣空白處可做4企測記錄之用。
實施例5 采用醫用玻璃載片作為載體的血型檢測卡的生產方法
A、 選用醫用玻璃載片(玻片)作為載體，其洗滌方法是用1°/。的HC1溶液浸泡一晝夜，再用市售洗滌劑洗刷，然后用清水反復沖洗，最后用蒸餾水沖洗1 2次。濾干后，再在干燥箱中在溫度9(TC下進行干燥2h,然后冷卻至室溫。
B、 在清潔載體上用山東省曲阜市華榮化工新材料有限公司銷售的3-氨丙基三乙氧基硅烷處理，用該試劑將玻片浸沒后取出玻片，干燥，備用；
C、 在經過處理的載體上用相應抗體噴涂字母A和B形狀的抗體印跡，字母A形狀的抗體印跡采用抗A抗體噴涂，字母B形狀的抗體印跡采用抗B抗體噴涂，過夜(放置0. 5-24小時)；(抗體購自上海血液生物醫藥有限責任公司，商品名為抗A、抗B血型定型試劑)
D、 用磷酸鹽緩沖液除去未與載體結合的多余抗體，晾千。
E、 得到的血型檢測卡用鋁泊進行密封包裝，多人份或單人份均可。
實施例6:采用紙板作為載體生產本發明血型檢測卡本發明血型檢測卡的生產，其生產步驟如下
A、選用一次性血型紙板作為載體，將紙板加工成每個檢測單元直徑為1. 2-2. 2cm的圓形凹槽，每個圓形凹槽的深度為0. 02-0. 2cm,中間為圓弧狀。
B、 在經過處理的絲素蛋白膜/硝酸纖維膜上用相應抗體噴印字母A和B形狀的抗體印跡，字母A形狀的抗體印跡采用抗A抗體噴涂，字母B形狀的抗體印跡采用抗B抗體噴涂，過夜(放置0. 5-24小時)，用磷酸鹽緩沖液除去未與載體結合的多余抗體，晾干，制成檢測單元的形狀，備用；(抗體購自上海血液生物醫藥有限責任公司，商品名為抗A、抗B血型定型試劑)
C、 將每個檢測單元中間涂上粘合劑，將涂有抗體的膜貼在檢測單元內；
D、 得到本發明的血型檢測卡；E、得到的血型卡進行密封包裝。
使用實施例5的方法生產的實施例1所述的血型檢測卡，進行了 100 人次檢測，結果表明，非醫療專業人員使用本血型檢測卡獲得的檢測結果 與目前醫療專業人員采用傳統血型檢測方法得到的々企測結果相同，非醫療 專業人員使用本血型檢測卡檢測速度快一倍，批量生產成本可低于現有傳 統血型檢測方法。因此，非常有利于廣泛推廣應用。
權利要求
1.一種血型檢測卡，其特征在于由載體和固定在載體上的抗體層組成，抗體層含有至少一個字母形狀的抗體印跡。
2. 根據權利要求1所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述抗體印跡由血型檢測用抗體制成，其中的抗體選自抗A抗體、抗B抗體、抗Rh血型相關抗體、抗P血型相關抗體、抗MNSs血型相關抗體、抗Duffy血型相關抗體中的一種或幾種。
3. 根據權利要求1所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述抗體印跡的字母形狀為與該抗體印跡產生抗原抗體反應的血型相應的字母。
4. 根據權利要求1至3中任何一項所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述抗體印跡中的抗體為多克隆抗體、單克隆抗體或膠體金標記的金標抗體。
5. 根據權利要求1所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述載體選自紙板、玻璃片、塑料板、纖維膜或樹脂板中的一種。
6. 根據權利要求5所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述的塑料板選自聚苯乙烯、聚乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯或聚碳酸酯等聚合物板中的一種。
7. 根據權利要求5所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述的纖維膜選自絲素蛋白膜、聚乳酸膜玻璃纖維膜、醋酸纖維素膜或硝酸纖維素膜中的一種。
8. 根據權利要求5所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述的樹脂板選自PVC、 ABS、環氧樹脂或酚醛樹脂;tl中的一種。
9. 根據權利要求1所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述載體一側表面或一側的局部表面具有弧度。
10. 根據權利要求9所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述載體一側表面或一側的局部表面具有弧度，為凸面型或凹面型結構。
11. 根據權利要求10所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述凸面型結構的外圍設有凹槽。
12. 根據權利要求1所述的一種血型檢測卡，其特征在于所述血型檢測卡外設有包裝材料，選自塑料薄膜、鋁箔或紙中的一種或幾種。
13. —種血型檢測卡的生產方法，其特征在于在用抗體固定劑預處理的清潔載體的表面噴涂或印染血型檢測用抗體，制成具有字母形狀的抗體印跡的抗體層，使用緩沖液除去未與載體結合的多余抗體，干燥，包裝。
14. 根據權利要求13所述的 一種血型檢測卡的生產方法，其特征在于所述抗體印跡的字母形狀為與該抗體印跡產生抗原抗體反應的血型相應的字母。
15. 根據權利要求13所述的一種血型檢測卡的生產方法，其特征在于所述清潔載體的方法為使用紙載體時，先清除灰塵，然后噴灑殺菌劑、消毒劑等進行清潔；使用玻璃片、塑料板或樹脂板時，先用洗液浸泡12-24h,然后用水沖洗；濾干后，進行干燥；使用纖維膜時，噴灑清潔劑，然后進行干燥。
16. 根據權利要求13所述的一種血型檢測卡的生產方法，其特征在于所述的固定劑為無才幾固定劑或有才幾固定劑。
17. 根據權利要求13所述的 一種血型檢測卡的生產方法，其特征在于所述的無機固定劑選自曱醇、乙醇、丙酮、甲醛、戊二醛、二氧化硅或鋨酸中的一種或幾種。
18. 根據權利要求13所述的一種血型檢測卡的生產方法，其特征在于所述的有機固定劑選自3-氨丙基三乙氧基硅烷、多聚賴氨酸或鉻明膠溶液中的一種或幾種。
19. 根據權利要求13所述的一種血型檢測卡的生產方法，其特征在于所述使用緩沖液除去未與載體結合的多余抗體是指，檢測用抗體與載體表面固定劑中的一些活性基團進行反應而被固定在載體上之后，放置一段時間(0. 5-24小時)，待固定化過程結束后再用緩沖液除去未與載體結合的多余抗體，得到所述的血型檢測卡。
20. 根據權利要求13所述的一種血型檢測卡的生產方法，其特征在于所述的緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液或含甘油的緩沖液中的一種。
全文摘要
本發明涉及一種血型檢測卡及其生產方法，屬于血型檢測技術領域。一種血型檢測卡，由載體和固定在載體上的抗體層組成，抗體層含有至少一個字母形狀的抗體印跡。本發明的血型檢測卡可廣泛應用于ABO、Rh、P、MNSs、Duffy等具有臨床意義的主要血型系統，易于推廣使用，操作簡便，直接讀出血型結果，還能夠避免人為因素出現的錯誤。
文檔編號G01N33/531GK101672852SQ20091009167
公開日2010年3月17日 申請日期2009年8月28日 優先權日2009年8月28日
發明者卉 李, 汪德清 申請人:中國人民解放軍總醫院